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岩藻多糖诱导人骨肉瘤细胞143B损伤作用及其机制
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作者 王琪琪 林巧 +3 位作者 单微燕 张涛 李昱蓉 张云 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期739-744,共6页
目的:探讨岩藻多糖(FUC)诱导人骨肉瘤细胞143B损伤作用及分子机制。方法:采用不同浓度FUC(0、0.5、1、10、100、400、800μg/ml)处理143B细胞48 h后,通过MTT法和化学比色法检测FUC对143B细胞活性和乳酸脱氢酶(LDH)释放的影响,每个浓度设... 目的:探讨岩藻多糖(FUC)诱导人骨肉瘤细胞143B损伤作用及分子机制。方法:采用不同浓度FUC(0、0.5、1、10、100、400、800μg/ml)处理143B细胞48 h后,通过MTT法和化学比色法检测FUC对143B细胞活性和乳酸脱氢酶(LDH)释放的影响,每个浓度设6个复孔。根据MTT结果计算出IC 50为244.5μg/ml。后续实验分组为对照组(不加FUC)、FUC(10μg/ml)组、FUC(100μg/ml)组、FUC(400μg/ml)和阳性对照组(白藜芦醇,40μmol/L),每个浓度设4个复孔,每组实验至少重复3次。流式细胞术检测细胞凋亡情况和细胞内活性氧(ROS)含量的变化;吖啶橙(AO)染色和Lyso-Tracker Red染色观察细胞自噬溶酶体形成情况;化学比色法检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;Western blot法检测细胞中核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)和自噬相关蛋白微管相关轻链蛋白3(LC-3)、Atg7、Beclin-1和p62等蛋白表达情况。结果:与对照组比较,FUC(100和400μg/ml)处理组143B细胞活性明显降低(P<0.01),上清液中LDH水平(P<0.05或P<0.01)、细胞凋亡率(P<0.01)、细胞内ROS水平和MDA含量显著增加(P<0.01)、Atg7和Beclin-1等蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01),LC-3I向LC-3II转换显著及自噬溶酶体形成增加(P<0.01),而细胞中SOD活性、GSH-Px活性和Nrf2、HO-1及p62蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:100和400μg/ml的FUC处理骨肉瘤细胞143B,可诱导其氧化损伤和自噬性死亡。 展开更多
关键词 岩藻多糖 骨肉瘤细胞143B 细胞培养 氧化损伤 自噬
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