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生物工程实验课程教学改革探索 被引量:29
1
作者 常景玲 李兰 +2 位作者 郭丹钊 张志宏 《实验科学与技术》 2008年第2期78-79,共2页
分析了生物工程专业和生物工程实验课程的特点,提出了生物工程大实验开设与改革的必要性,并对如何进一步完善生物工程综合实验教学提出了建议。
关键词 生物工程 大实验 教学改革
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菊粉化学和微生物菊粉内切酶研究进展 被引量:8
2
作者 王建 +1 位作者 滕达 史贤明 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 2004年第4期103-108,共6页
菊糖作为多聚果糖类碳水化合物,其物理化学性质已较早地得到研究,之后菊糖分子结构得到深入的研究。近年以开发菊粉系列产品作为功能性食品成分为目标,关于微生物菊粉内切酶酶学性质、基因结构、工程菌株构建与生产应用方面的研究进展迅... 菊糖作为多聚果糖类碳水化合物,其物理化学性质已较早地得到研究,之后菊糖分子结构得到深入的研究。近年以开发菊粉系列产品作为功能性食品成分为目标,关于微生物菊粉内切酶酶学性质、基因结构、工程菌株构建与生产应用方面的研究进展迅速,如已经成功地构建2种高表达内切菊粉酶的基因工程酵母。本世纪菊粉生物技术将大力推动菊粉产业的发展。 展开更多
关键词 研究进展 高表达 微生物 基因结构 果糖 菊糖 糖类 菊粉内切酶 功能性食品 系列产品
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红色链霉菌发酵产红霉素培养基的响应面优化 被引量:11
3
作者 于江傲 谢凤珍 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期728-731,736,共5页
目的采用响应面法对红色链霉菌(Streptomyces erythreus)发酵产红霉素培养基进行优化。方法利用Design-Expert 8的Min Run Res IV多因子两水平设计,对发酵培养基的有机碳源和氮源的组成进行因素的效应评价,利用最峭攀登搜索法为响应面... 目的采用响应面法对红色链霉菌(Streptomyces erythreus)发酵产红霉素培养基进行优化。方法利用Design-Expert 8的Min Run Res IV多因子两水平设计,对发酵培养基的有机碳源和氮源的组成进行因素的效应评价,利用最峭攀登搜索法为响应面分析的中心组合设计确定中心区,利用响应面分析得到优化培养基组成。结果淀粉、糊精、豆饼粉和玉米浆因素对红霉素产量有显著影响,其最佳组成为:淀粉5.24%,糊精1.43%,豆饼粉4.56%,玉米浆1.47%。结论利用响应面法已成功优化了红霉素发酵培养基组成的碳源和氮源,摇瓶发酵产红霉素化学效价为6 192 U/ml。 展开更多
关键词 红色链霉菌 红霉素 发酵 培养基 响应面 优化
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菊苣中菊粉提取工艺条件的研究 被引量:5
4
作者 谢凤珍 王建 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2006年第6期1013-1016,共4页
新鲜菊苣干制后干菊苣粉中总糖的含量可达73.6%,采用干菊苣粉用循环方式进行水抽提菊粉,在料液比为1:15,温度为80℃,浸提时间为2 h时提取率达98%,浸提液总糖含量达48.1 g/L;干菊苣粉和菊粉提取液中总糖的测定采用酸解法时,采用0.2 mol/L... 新鲜菊苣干制后干菊苣粉中总糖的含量可达73.6%,采用干菊苣粉用循环方式进行水抽提菊粉,在料液比为1:15,温度为80℃,浸提时间为2 h时提取率达98%,浸提液总糖含量达48.1 g/L;干菊苣粉和菊粉提取液中总糖的测定采用酸解法时,采用0.2 mol/L HCl水解40 min时,可提高测定结果准确度。 展开更多
关键词 菊苣 菊粉 水抽提
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响应面法优化玉米芯木聚糖提取条件 被引量:7
5
作者 谢凤珍 陈晓静 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第2期157-160,共4页
为提高玉米芯中木聚糖得率,采用响应面法对碱法提取玉米芯木聚糖条件进行优化。利用Design-Expert 8的Min Run ResⅣ多因子两水平设计,对影响木聚糖提取的因素进行效应评价,利用最峭攀登搜索法为响应面分析的中心组合设计确定中心区,利... 为提高玉米芯中木聚糖得率,采用响应面法对碱法提取玉米芯木聚糖条件进行优化。利用Design-Expert 8的Min Run ResⅣ多因子两水平设计,对影响木聚糖提取的因素进行效应评价,利用最峭攀登搜索法为响应面分析的中心组合设计确定中心区,利用响应面分析得到优化提取条件。结果表明,碱提温度、碱提时间、NaOH质量分数和料液比对木聚糖提取率有显著影响,其最佳条件为:NaOH质量分数16%,温度85℃,料液比1∶16,提取时间2.5h。利用响应面法成功对玉米芯木聚糖提取条件进行优化,提取率达到25.6%。 展开更多
关键词 玉米芯 木聚糖 提取条件 响应面 优化
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甘蓝酿酒工艺的研究 被引量:5
6
作者 李兰 +1 位作者 武庆东 呼慧丽 《中国酿造》 CAS 北大核心 2011年第10期182-185,共4页
以甘蓝为原料研究甘蓝酒的发酵工艺。分别对酿造工艺中的酵母接种量、发酵时间、发酵温度、甘蓝汁含量等因素进行了单因素试验,选取4个因素的合适水平进行4因素3水平的正交试验,以感官评分为指标对正交试验结果进行极差、方差分析,得出... 以甘蓝为原料研究甘蓝酒的发酵工艺。分别对酿造工艺中的酵母接种量、发酵时间、发酵温度、甘蓝汁含量等因素进行了单因素试验,选取4个因素的合适水平进行4因素3水平的正交试验,以感官评分为指标对正交试验结果进行极差、方差分析,得出甘蓝酒的最佳发酵工艺条件是甘蓝汁含量60%,酵母的接种量6%,发酵时间6d,发酵温度32℃。经过发酵可得到酒精度13%vol,颜色淡绿、鲜亮,清澈、酒体透明,富含蔬菜清香、醇厚、口味纯正的优质甘蓝酒。 展开更多
关键词 甘蓝 发酵 优化 甘蓝酒
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内切酶法制取菊苣低聚果糖工艺条件的研究 被引量:4
7
作者 谢凤珍 王建 《生物技术通讯》 CAS 2007年第4期619-621,共3页
目的:利用毕赤嗜甲醇酵母表达的重组黑曲霉菊粉内切酶,从菊苣菊粉中制取低聚果糖。方法:用重组黑曲霉菊粉内切酶酶解水提菊粉,用薄层色谱、离子色谱分析酶解产物,研究酶解条件,分析产物组成。结果与结论:菊粉浓度为20~160g/L、酶浓度为... 目的:利用毕赤嗜甲醇酵母表达的重组黑曲霉菊粉内切酶,从菊苣菊粉中制取低聚果糖。方法:用重组黑曲霉菊粉内切酶酶解水提菊粉,用薄层色谱、离子色谱分析酶解产物,研究酶解条件,分析产物组成。结果与结论:菊粉浓度为20~160g/L、酶浓度为12U/g菊粉时,低聚果糖的最大产率逐渐升高然后下降;在接近最大溶解度200g/L时,菊粉寡糖最大产率为62.0%,最大产率与酶的用量无关,但提高酶的浓度可以缩短达到最大产率的时间。pH5.5、50℃、菊粉浓度为40g/L、酶用量为12U/g菊粉时,可达到最大产率64.6%;酶解的产物主要为GF2到GF10的菊粉寡糖。 展开更多
关键词 菊粉内切酶 菊粉 低聚果糖
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拟青霉β-1,3(4)-葡聚糖酶同源建模及共价固定化 被引量:5
8
作者 于江傲 +1 位作者 谢凤珍 陈晓静 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第1期252-256,共5页
采用同源建模的方法构建拟青霉β-1,3(4)-葡聚糖酶的三维结构。通过对其活性位点及表面氨基酸残基侧链的分析,利用氨基载体Sepabeads EC-HA共价固定化葡聚糖酶,优化固定化条件,比较固定化酶与游离酶的酶学参数。结果表明:m(酶粉):m(载体... 采用同源建模的方法构建拟青霉β-1,3(4)-葡聚糖酶的三维结构。通过对其活性位点及表面氨基酸残基侧链的分析,利用氨基载体Sepabeads EC-HA共价固定化葡聚糖酶,优化固定化条件,比较固定化酶与游离酶的酶学参数。结果表明:m(酶粉):m(载体)=1.2:1、温度40~45℃、固定化时间8h,固定化效果最好。蛋白结合率可达91.7%,酶活回收率达87.6%,固定化酶最适温度、热稳定性、pH值稳定性和批次使用稳定性均得到明显提高。 展开更多
关键词 β-1 3(4)-葡聚糖酶 同源建模 共价固定化
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生物工程大实验课程设置及教学模式探索 被引量:4
9
作者 常景玲 +2 位作者 李兰 贾翠英 张志宏 《科技创新导报》 2011年第14期179-180,共2页
针对生物工程大实验在教学中存在的不足,从调整专业实验大纲与实验内容入手,对专业实验进行了全面系统的改革与实践,进行开放式、综合型生物工程大实验教学模式,并阐述了实验教学模式改革带来的良好教学效果。
关键词 生物工程大实验 课程设置 教学模式 探索
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耐热木聚糖酶源细菌筛选、鉴定及酶学性质 被引量:3
10
作者 谢凤珍 牛宏阳 《河南科技学院学报(自然科学版)》 2014年第5期7-10,共4页
利用木聚糖作为唯一碳源的基础盐培养,在50℃培养条件下,从新乡周围土样及腐殖质中筛选到1株产耐热β-木聚糖酶细菌,初步鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium FLH-2).该菌株在40~55℃生长良好,最适生长温度50℃.木聚糖酶粗酶性... 利用木聚糖作为唯一碳源的基础盐培养,在50℃培养条件下,从新乡周围土样及腐殖质中筛选到1株产耐热β-木聚糖酶细菌,初步鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium FLH-2).该菌株在40~55℃生长良好,最适生长温度50℃.木聚糖酶粗酶性质研究表明:该酶最适pH和最适温度分别为6.0和65℃;在pH 5.0~9.0及温度30~75℃之间酶活相对稳定,分别处理30 min,相对酶活仍保持在80%以上. 展开更多
关键词 耐热木聚糖酶 细菌 筛选 鉴定 性质
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葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达优化 被引量:2
11
作者 谢凤珍 陈晓静 《河南科技学院学报(自然科学版)》 2011年第3期45-49,共5页
拟青霉(Paecilomyces sp.FLH30)β-1,3(4)-葡聚糖酶可在重组菌BL21(DE3)-pET28a/PsBg16A中表达.首先确定了该酶的细胞表达定位,再研究了诱导温度、诱导剂种类及浓度、诱导起始菌体密度、诱导时间等因素对重组菌生长及目的蛋白表达活性... 拟青霉(Paecilomyces sp.FLH30)β-1,3(4)-葡聚糖酶可在重组菌BL21(DE3)-pET28a/PsBg16A中表达.首先确定了该酶的细胞表达定位,再研究了诱导温度、诱导剂种类及浓度、诱导起始菌体密度、诱导时间等因素对重组菌生长及目的蛋白表达活性的影响.结果表明,IPTG和乳糖皆可诱导目的蛋白表达,乳糖的诱导效果优于IPTG.在诱导起始OD_(600)为3.2时加入10%乳糖,20℃诱导20 h最适于目的蛋白的表达.表达条件优化后,酶活可达到482.2U/mL. 展开更多
关键词 葡聚糖酶基因 大肠杆菌 表达 优化
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拟青霉FLH30 β-葡萄糖苷酶动力学、激活抑制及其转糖苷 被引量:2
12
作者 于江傲 +2 位作者 李兰 常景玲 张志宏 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第16期130-135,共6页
研究了拟青霉FLH30胞内β-葡萄糖苷酶动力学性质及葡萄糖、木糖和葡萄糖醛酸内酯对该酶的激活及抑制作用。结果表明:该酶对p NP-β-D-葡萄糖苷、p NP-β-D-半乳糖苷、纤维二糖、乳糖、龙胆二糖和水扬苷的水解动力学常数Km分别为0.54、5... 研究了拟青霉FLH30胞内β-葡萄糖苷酶动力学性质及葡萄糖、木糖和葡萄糖醛酸内酯对该酶的激活及抑制作用。结果表明:该酶对p NP-β-D-葡萄糖苷、p NP-β-D-半乳糖苷、纤维二糖、乳糖、龙胆二糖和水扬苷的水解动力学常数Km分别为0.54、5.28、0.98、26.34、6.92和1.72 mmol/L;在以对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(p NPG)为底物时,5~150 mmol/L葡萄糖和20~600 mmol/L木糖对酶有激活作用,高于此范围,则表现出抑制作用,葡萄糖醛酸内酯具有很强的抑制作用,葡萄糖、木糖和葡萄糖醛酸内酯抑制常数Ki值分别为63.4、170.3和0.038 mmol/L。木糖能促进该酶对纤维二糖和乳糖的水解作用,木糖浓度为200 mmol/L时,酶活分别增加189.6%和166.3%。该酶还具有转糖苷活性,能够将纤维二糖部分转化为纤维三糖和龙胆二糖。 展开更多
关键词 Β-葡萄糖苷酶 动力学 激活 抑制 转糖苷
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微波提取苹果汁中脂环酸芽孢杆菌DNA的PCR检测方法研究 被引量:2
13
作者 焦凌霞 +1 位作者 樊明涛 魏新元 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第14期154-157,共4页
根据Genbank公布的酸土脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus acidoterrestris DSM 3922T)鲨烯环化酶序列自行设计一对引物,利用微波技术直接从果汁样品中提取目标菌DNA,对引物特异性、微波法提取DNA的扩增效果及检测灵敏度进行探讨。结果表... 根据Genbank公布的酸土脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus acidoterrestris DSM 3922T)鲨烯环化酶序列自行设计一对引物,利用微波技术直接从果汁样品中提取目标菌DNA,对引物特异性、微波法提取DNA的扩增效果及检测灵敏度进行探讨。结果表明:微波功率1000W、处理时间30s、经5000r/min离心2min即可获得酸土脂环酸芽孢杆菌基因组DNA,所得模板质量符合聚合酶链式反应检测要求,目的条带清晰,检测时间仅为2h,检测限为200CFU/mL,有望真正应用于苹果汁生产的在线检测。 展开更多
关键词 脂环酸芽孢杆菌 苹果汁 微波处理 聚合酶链式反应 检测限
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拟青霉β-1,3(4)-葡聚糖酶同源模建、分子对接与分子动力学模拟 被引量:2
14
作者 师玉忠 +2 位作者 于江傲 常景玲 李兰 《计算机与应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期370-374,共5页
在同源模建得基础上,采用分子对接和分子动力学(MD)模拟方法研究了拟青霉β-1,3(4)-葡聚糖酶与β-1,3(4)-葡聚糖(G4G4G3G4G4G)和β-1,3-葡聚糖(G3G3G3G3G3G)的相互作用机制。对接结果显示,该酶对β-1,3(4)-葡聚糖具有较β-1,3-葡聚糖更... 在同源模建得基础上,采用分子对接和分子动力学(MD)模拟方法研究了拟青霉β-1,3(4)-葡聚糖酶与β-1,3(4)-葡聚糖(G4G4G3G4G4G)和β-1,3-葡聚糖(G3G3G3G3G3G)的相互作用机制。对接结果显示,该酶对β-1,3(4)-葡聚糖具有较β-1,3-葡聚糖更高的结合力,动力学轨迹分析显示,葡聚糖酶催化β-1,3(4)-葡聚糖的机制要比催化β-1,3-葡聚糖更为复杂。 展开更多
关键词 β-13(4)-葡聚糖酶 同源模建 分子对接 分子动力学
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酸、热胁迫条件下酸土脂环酸芽孢杆菌SOD基因的表达分析 被引量:2
15
作者 徐茜茜 +1 位作者 刘晓娇 焦凌霞 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2015年第11期80-85,共6页
本研究在克隆得到酸土脂环酸芽孢杆菌DSM 3922T SOD基因全序列的基础上,利用荧光实时定量PCR技术分别检测酸土脂环酸芽孢杆菌SOD基因在酸、热胁迫条件下的表达差异。结果表明:该基因在正常生长条件下组成性表达,在酸、热胁迫下表达量在... 本研究在克隆得到酸土脂环酸芽孢杆菌DSM 3922T SOD基因全序列的基础上,利用荧光实时定量PCR技术分别检测酸土脂环酸芽孢杆菌SOD基因在酸、热胁迫条件下的表达差异。结果表明:该基因在正常生长条件下组成性表达,在酸、热胁迫下表达量在短时间内迅速上调,酸胁迫0.5 h表达量为对照组的4.63倍,胁迫1 h表达量升至最高,为对照组的32.55倍,随后表达量迅速下调,胁迫5 h时表达量降至对照组的1.67倍。70℃热胁迫5 min时SOD基因相对表达量为对照组的2.81倍,胁迫25 min时表达量升至最高,为对照组的15.05倍,随后表达量下调,胁迫40 min时表达量降至对照组的4.93倍。酸土脂环酸芽孢杆菌SOD基因对酸、热环境胁迫具有快速反应的特点,表明酸土脂环酸芽孢杆菌SOD基因与该菌嗜热耐酸的独特生理适应机制密切相关。 展开更多
关键词 酸土脂环酸芽孢杆菌 SOD 基因表达 酸胁迫 热胁迫
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拟青霉内切β-1,3(4)-葡聚糖酶基因克隆、表达及重组酶性质 被引量:2
16
作者 谢凤珍 陈晓静 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1657-1665,共9页
采用改造的酿酒酵母表达载体pYES2-GSL构建了拟青霉Paecilomyces sp.FLH30表达cDNA文库,刚果红平板法筛到一内切β-1,3(4)-葡聚糖酶基因(PsBg16A),全长cDNA为1 217 bp,完整开放阅读框(ORF)951 bp,编码316个氨基酸,属于糖苷水解酶16家族... 采用改造的酿酒酵母表达载体pYES2-GSL构建了拟青霉Paecilomyces sp.FLH30表达cDNA文库,刚果红平板法筛到一内切β-1,3(4)-葡聚糖酶基因(PsBg16A),全长cDNA为1 217 bp,完整开放阅读框(ORF)951 bp,编码316个氨基酸,属于糖苷水解酶16家族。去信号肽的PsBg16A克隆入表达载体pET28a(+)并在E.coli BL21成功表达,经16°C 20%乳糖诱导24 h,酶活达482 U/mL。重组PsBg16A可水解大麦葡聚糖、地衣多糖和昆布多糖,显示PsBg16A为典型的β-1,3(4)-葡聚糖酶(EC 3.2.1.6),重组酶最适pH和温度分别为7.0和65°C,对大麦葡聚糖、地衣多糖和昆布多糖的Km分别为3.12、4.86和10.32 g/L。 展开更多
关键词 拟青霉 β-1 3(4)-葡聚糖酶 基因克隆 表达 性质
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拟青霉FLH30胞内β-葡萄糖苷酶特性研究 被引量:1
17
作者 于江傲 +2 位作者 李兰 常景玲 张志宏 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第13期152-156,共5页
对拟青霉FLH30胞内β-葡萄糖苷酶的底物特异性、动力学性质、转糖苷性质及激活和抑制作用进行了研究。结果表明:该酶最适温度60℃,最适pH6.0,在70℃以下及pH5.0~12.0范围内比较稳定,处理30min后,残余酶活力仍保持在80%以上;... 对拟青霉FLH30胞内β-葡萄糖苷酶的底物特异性、动力学性质、转糖苷性质及激活和抑制作用进行了研究。结果表明:该酶最适温度60℃,最适pH6.0,在70℃以下及pH5.0~12.0范围内比较稳定,处理30min后,残余酶活力仍保持在80%以上;分子量为57.2ku的单亚基蛋白;能够水解pNP-β-D-葡萄糖苷、pNP-β-D-葡萄糖苷、pNP-β—D-半乳糖苷、ONP—β—D-半乳糖苷、纤维二糖、龙胆二糖、乳糖、及纤维寡糖(G3-G4)等,同时,该酶还能够水解大麦葡聚糖、昆布多糖和地衣多糖,且具有转糖苷活性。 展开更多
关键词 拟青霉FLH30 Β-葡萄糖苷酶 特性
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一株黑曲霉菌株所产菊粉酶的酶学性质 被引量:1
18
作者 王建 吴艳兵 +1 位作者 李广领 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第10期2414-2417,共4页
对筛选得到的一株黑曲霉菌株(Aspergillus niger inu-8)所产菊粉酶的酶学性质进行了研究。结果表明,菊粉酶的最适作用温度为45~55℃,在30~60℃范围内该酶能保持较高的活性,但超过60℃后其活性迅速下降;在80℃水浴下处理0.5 h,酶活性丧... 对筛选得到的一株黑曲霉菌株(Aspergillus niger inu-8)所产菊粉酶的酶学性质进行了研究。结果表明,菊粉酶的最适作用温度为45~55℃,在30~60℃范围内该酶能保持较高的活性,但超过60℃后其活性迅速下降;在80℃水浴下处理0.5 h,酶活性丧失80%;该酶的适宜pH值相对偏酸,在pH值4.0~6.0时有很好的稳定性,在pH值5.0时表现为一个活性高峰;Ca2+对该酶具有明显激活作用,Hg2+和EDTA(乙二胺四乙酸)是该酶的强烈抑制剂;菊粉酶可水解菊粉但不水解棉子糖,对蔗糖酶的活性较低,I/S为52,对菊粉的米氏常数Km为0.34 mol·L-1,最大反应速度vmax为0.53 mg·L-1·min-1。 展开更多
关键词 菊粉 菊粉酶 酶活性 酶学性质
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耐热β-1,3(4)-葡聚糖酶源真菌筛选、鉴定及产酶条件优化 被引量:1
19
作者 于江傲 +2 位作者 谢凤珍 陈晓静 孙婷婷 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第13期131-134,共4页
利用葡聚糖作为唯一碳源的基础盐培养,在50℃培养条件下,从新乡周围土样及腐殖质中筛选到一株产β-1,3(4)-葡聚糖酶耐热真菌菌株(Paecilomycessp.FLH30)。该菌株在40~60℃能较好生长,最适生长温度45℃。产酶培养优化条件表明:在培养温... 利用葡聚糖作为唯一碳源的基础盐培养,在50℃培养条件下,从新乡周围土样及腐殖质中筛选到一株产β-1,3(4)-葡聚糖酶耐热真菌菌株(Paecilomycessp.FLH30)。该菌株在40~60℃能较好生长,最适生长温度45℃。产酶培养优化条件表明:在培养温度为45℃,初始培养基pH6.5,以大麦麸皮为碳源,以蛋白胨、酵母粉和玉米浆为有机氮源,发酵4d,葡聚糖酶活达132.4U/mL,葡聚糖酶最适pH和温度分别为7.0和70℃。 展开更多
关键词 耐热β-1 3(4)-葡聚糖酶 真菌 筛选 优化
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毕赤嗜甲醇酵母工程菌高密度培养表达黑曲霉菊粉内切酶的研究
20
作者 谢凤珍 +1 位作者 王建 史贤明 《生物技术通讯》 CAS 2007年第1期60-63,共4页
目的:对毕赤嗜甲醇酵母工程菌inu-26高密度培养表达黑曲霉菊粉内切酶的条件进行优化,找出最佳的外源蛋白表达条件。方法:在摇瓶优化培养的基础上进行发酵罐高密度培养,优化最佳产酶条件。结果:以葡萄糖为碳源、微量元素添加量100~200m... 目的:对毕赤嗜甲醇酵母工程菌inu-26高密度培养表达黑曲霉菊粉内切酶的条件进行优化,找出最佳的外源蛋白表达条件。方法:在摇瓶优化培养的基础上进行发酵罐高密度培养,优化最佳产酶条件。结果:以葡萄糖为碳源、微量元素添加量100~200mL/L、甲醇浓度1g/L、pH6.0~7.0、诱导时间96h时酶的表达量最高;摇瓶模拟高密度培养表明影响酵母生长的最主要因素葡萄糖和硫酸铵的最佳浓度分别为20~45和11.5g/L;利用培养基F1进行高密度培养优于其他培养基,工程菌生长符合指数生长曲线,细胞生长延迟期为1.36h,比生长速率μ为0.4846h-1。结论:以葡萄糖为碳源,采用葡萄糖-甲醇混合诱导和100%甲醇单一诱导相结合,在菌体鲜重约为280g/L时连续诱导96h,菌体生长良好,不会出现自溶,且酶的表达量最高,为摇瓶培养的3倍多,酶活最高可达540 U/mL。 展开更多
关键词 毕赤嗜甲醇酵母 黑曲霉菊粉内切酶 高密度培养
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