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副溶血弧菌SH112株OmpA蛋白的高效表达及免疫学特性
被引量:
6
1
作者
王亚磊
王权
+4 位作者
白雪瑞
别
闯
南
陈兆国
韩先干
蒋蔚
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第10期1937-1947,共11页
【目的】我们前期研究表明副溶血弧菌SH112株的OmpA蛋白在该菌的致病过程中发挥重要作用,是亚单位疫苗研制的潜在靶标抗原。本研究进一步对ompA(VPA1186)基因进行克隆表达,并研究其免疫学特性。【方法】扩增去除信号肽序列的成熟外膜蛋...
【目的】我们前期研究表明副溶血弧菌SH112株的OmpA蛋白在该菌的致病过程中发挥重要作用,是亚单位疫苗研制的潜在靶标抗原。本研究进一步对ompA(VPA1186)基因进行克隆表达,并研究其免疫学特性。【方法】扩增去除信号肽序列的成熟外膜蛋白OmpA的基因片段,定向克隆至表达载体,基因测序后对其编码蛋白质进行生物信息学分析。重组蛋白His-OmpA经纯化后,免疫ICR小鼠制备鼠多抗血清。Western blotting检测该蛋白的免疫原性及鼠多抗血清的特异性。动物实验验证其免疫保护率。【结果】成功表达分子量约为40.0 kDa的重组蛋白His-OmpA。制备的鼠多抗血清ELISA效价可达1∶50000以上。Westernblotting检测结果显示,该血清可与His-OmpA蛋白、总外膜蛋白和全菌蛋白发生特异性反应,说明所表达的目的蛋白保持原蛋白的免疫原性。此外,该高免血清可与其他主要血清型的副溶血弧菌发生特异性交叉反应,而与其他非副溶血弧菌菌株无交叉反应,表明该血清特异性较高,且提示OmpA蛋白可能是副溶血弧菌属的共同保护性抗原。小鼠免疫保护实验结果表明,该蛋白可提供约35%的免疫保护率。【结论】OmpA蛋白可作为诊断副溶血弧菌感染和亚单位疫苗研制的靶蛋白,为进一步开展该蛋白的功能研究提供了参考。
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关键词
副溶血弧菌
OMPA
免疫原性
保护性作用
原文传递
五种重要致病性弧菌高通量液相芯片检测方法的建立
被引量:
5
2
作者
郭容
董晓妹
+4 位作者
别
闯
南
王权
韩先干
叶建强
蒋蔚
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第7期805-813,共9页
为建立一种快速、准确同时检测5种致病性弧菌的高通量液相芯片技术,本研究针对霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌和拟态弧菌的10个目的基因,包括5个种特异性基因和5个毒力基因,分别设计特异性引物和探针,多重PCR扩增后的产物与...
为建立一种快速、准确同时检测5种致病性弧菌的高通量液相芯片技术,本研究针对霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌和拟态弧菌的10个目的基因,包括5个种特异性基因和5个毒力基因,分别设计特异性引物和探针,多重PCR扩增后的产物与偶联有不同核酸探针的微球混合物进行杂交反应,利用液相芯片检测仪分析结果。结果显示,本方法同时检测这5种致病性弧菌时,检出限最高达到1.8×10^(2)CFU/mL;检测包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、河流弧菌、沙门菌、李斯特杆菌和铜绿杆菌等常见细菌时,均无交叉反应,表明特异性好;检测不同批次的样品时,变异系数均小于8%,表明重复性良好。本研究建立的液相芯片检测方法能够快速同时检测这5种致病性弧菌,具有高通量、灵敏性高、重复性好、可控性强、节省样本和时间等优点,对水产品中多种重要致病性弧菌的检测和流行病学调查提供了技术支持。
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关键词
弧菌
种特异性基因
毒力基因
液相芯片
多重检测
原文传递
检测创伤弧菌两种毒力基因的环介导等温扩增检测方法的建立
被引量:
4
3
作者
别
闯
南
王权
+3 位作者
白雪瑞
凌娇
李恭贺
蒋蔚
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2018年第1期48-54,共7页
为建立快速检测致病性创伤弧菌两种毒素的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,分别以创伤弧菌溶血素A基因(hemolysin gene A,HA)和多重毒素(repeats in toxin,RTX)毒力基因的保守序列作为靶序列设计内、...
为建立快速检测致病性创伤弧菌两种毒素的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,分别以创伤弧菌溶血素A基因(hemolysin gene A,HA)和多重毒素(repeats in toxin,RTX)毒力基因的保守序列作为靶序列设计内、外引物。通过肉眼观察白色沉淀初步判断检测结果,通过琼脂糖电泳最终确定检测结果。LAMP检测创伤弧菌的两种基因的灵敏度都达到10 CFU/mL。特异性结果表明致病性创伤弧菌的结果为阳性,而其他几种常见弧菌和食源菌检测结果为阴性。在人工模拟样品检测中,LAMP结果显示,采用水煮法提取DNA,从样品处理到报告结果耗时1.5 h,鱼肉中创伤弧菌的检出限为1×10~2 CFU/g(RTX)和1×10~4 CFU/g(HA);采用同样方法提取DNA进行普通PCR,其检出限为1×10~3 CFU/g(RTX)和1×10~4 CFU/g(HA),耗时4 h。结果表明,本研究建立的LAMP方法检测创伤弧菌两种毒力基因时具有灵敏度高、特异性强、方法简便等优点,适用于食品和养殖业中的现场快速检测。
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关键词
环介导等温扩增
溶血素A基因
多重毒素
创伤弧菌
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职称材料
题名
副溶血弧菌SH112株OmpA蛋白的高效表达及免疫学特性
被引量:
6
1
作者
王亚磊
王权
白雪瑞
别
闯
南
陈兆国
韩先干
蒋蔚
机构
中国农业科学院上海兽医研究所
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第10期1937-1947,共11页
基金
国家重点研发计划(2017YFC1200201)
上海市科学技术委员会科研计划(17140900400)~~
文摘
【目的】我们前期研究表明副溶血弧菌SH112株的OmpA蛋白在该菌的致病过程中发挥重要作用,是亚单位疫苗研制的潜在靶标抗原。本研究进一步对ompA(VPA1186)基因进行克隆表达,并研究其免疫学特性。【方法】扩增去除信号肽序列的成熟外膜蛋白OmpA的基因片段,定向克隆至表达载体,基因测序后对其编码蛋白质进行生物信息学分析。重组蛋白His-OmpA经纯化后,免疫ICR小鼠制备鼠多抗血清。Western blotting检测该蛋白的免疫原性及鼠多抗血清的特异性。动物实验验证其免疫保护率。【结果】成功表达分子量约为40.0 kDa的重组蛋白His-OmpA。制备的鼠多抗血清ELISA效价可达1∶50000以上。Westernblotting检测结果显示,该血清可与His-OmpA蛋白、总外膜蛋白和全菌蛋白发生特异性反应,说明所表达的目的蛋白保持原蛋白的免疫原性。此外,该高免血清可与其他主要血清型的副溶血弧菌发生特异性交叉反应,而与其他非副溶血弧菌菌株无交叉反应,表明该血清特异性较高,且提示OmpA蛋白可能是副溶血弧菌属的共同保护性抗原。小鼠免疫保护实验结果表明,该蛋白可提供约35%的免疫保护率。【结论】OmpA蛋白可作为诊断副溶血弧菌感染和亚单位疫苗研制的靶蛋白,为进一步开展该蛋白的功能研究提供了参考。
关键词
副溶血弧菌
OMPA
免疫原性
保护性作用
Keywords
Vibrio parahaemolyticus
OmpA
immunogenicity
protective effect
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
五种重要致病性弧菌高通量液相芯片检测方法的建立
被引量:
5
2
作者
郭容
董晓妹
别
闯
南
王权
韩先干
叶建强
蒋蔚
机构
中国农业科学院上海兽医研究所
扬州大学兽医学院
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第7期805-813,共9页
基金
兵团财政科技计划项目(2020AB025-03)
国家重点研发计划政府间国际科技创新合作重点专项(2018YFE0102200)
+2 种基金
上海市科学技术委员会科研计划项目(13DZ05022702)
上海市科技兴农重点攻关项目(2020-02-08-00-08-F01489)
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2020JB07)。
文摘
为建立一种快速、准确同时检测5种致病性弧菌的高通量液相芯片技术,本研究针对霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌和拟态弧菌的10个目的基因,包括5个种特异性基因和5个毒力基因,分别设计特异性引物和探针,多重PCR扩增后的产物与偶联有不同核酸探针的微球混合物进行杂交反应,利用液相芯片检测仪分析结果。结果显示,本方法同时检测这5种致病性弧菌时,检出限最高达到1.8×10^(2)CFU/mL;检测包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、河流弧菌、沙门菌、李斯特杆菌和铜绿杆菌等常见细菌时,均无交叉反应,表明特异性好;检测不同批次的样品时,变异系数均小于8%,表明重复性良好。本研究建立的液相芯片检测方法能够快速同时检测这5种致病性弧菌,具有高通量、灵敏性高、重复性好、可控性强、节省样本和时间等优点,对水产品中多种重要致病性弧菌的检测和流行病学调查提供了技术支持。
关键词
弧菌
种特异性基因
毒力基因
液相芯片
多重检测
Keywords
Vibrio
species-specific gene
virulence gene
Luminex xMAP
multiple detection
分类号
S852.613 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
检测创伤弧菌两种毒力基因的环介导等温扩增检测方法的建立
被引量:
4
3
作者
别
闯
南
王权
白雪瑞
凌娇
李恭贺
蒋蔚
机构
广西大学
中国农业科学院上海兽医研究所
出处
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2018年第1期48-54,共7页
基金
上海市科学技术委员会科研计划项目(17140900400)
文摘
为建立快速检测致病性创伤弧菌两种毒素的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,分别以创伤弧菌溶血素A基因(hemolysin gene A,HA)和多重毒素(repeats in toxin,RTX)毒力基因的保守序列作为靶序列设计内、外引物。通过肉眼观察白色沉淀初步判断检测结果,通过琼脂糖电泳最终确定检测结果。LAMP检测创伤弧菌的两种基因的灵敏度都达到10 CFU/mL。特异性结果表明致病性创伤弧菌的结果为阳性,而其他几种常见弧菌和食源菌检测结果为阴性。在人工模拟样品检测中,LAMP结果显示,采用水煮法提取DNA,从样品处理到报告结果耗时1.5 h,鱼肉中创伤弧菌的检出限为1×10~2 CFU/g(RTX)和1×10~4 CFU/g(HA);采用同样方法提取DNA进行普通PCR,其检出限为1×10~3 CFU/g(RTX)和1×10~4 CFU/g(HA),耗时4 h。结果表明,本研究建立的LAMP方法检测创伤弧菌两种毒力基因时具有灵敏度高、特异性强、方法简便等优点,适用于食品和养殖业中的现场快速检测。
关键词
环介导等温扩增
溶血素A基因
多重毒素
创伤弧菌
Keywords
Loop-mediated isothermal amplification
hemolysin gene A
repeats-in-toxin
Vibrio vulnificus
分类号
S852.613 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
副溶血弧菌SH112株OmpA蛋白的高效表达及免疫学特性
王亚磊
王权
白雪瑞
别
闯
南
陈兆国
韩先干
蒋蔚
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
6
原文传递
2
五种重要致病性弧菌高通量液相芯片检测方法的建立
郭容
董晓妹
别
闯
南
王权
韩先干
叶建强
蒋蔚
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2021
5
原文传递
3
检测创伤弧菌两种毒力基因的环介导等温扩增检测方法的建立
别
闯
南
王权
白雪瑞
凌娇
李恭贺
蒋蔚
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2018
4
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