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猪胸膜肺炎放线杆菌的分离及PCR诊断方法的建立 被引量：19
1
作者 梁金华 刘镇明 +3 位作者 顾万军 王淑敏 冼琼珍 黄良宗 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期36-38,共3页
APXⅣA基因是新发现的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的RTX毒素基因,本文通过PCR方法从APP标准血清1型及临床分离到的3株野毒株中扩增出长为442bp的部分APXⅣA基因,而从其它引起猪呼吸道疾病的细菌中无法扩增出此片段。通过玻板凝集试... APXⅣA基因是新发现的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的RTX毒素基因,本文通过PCR方法从APP标准血清1型及临床分离到的3株野毒株中扩增出长为442bp的部分APXⅣA基因,而从其它引起猪呼吸道疾病的细菌中无法扩增出此片段。通过玻板凝集试验鉴定这三株野毒株为血清1型APP。所建立的PCR方法能检测的DNA量最高敏感度为28pg.表明本文所建立的对猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的PCR诊断方法具有较高的特异性和敏感性。 展开更多
关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 分离 聚合酶链式反应 PCR诊断 血清学方法 病原学方法
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应用原核表达的猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白建立一种间接ELISA诊断方法 被引量：16
2
作者 林彦星 孙彦伟 +3 位作者 刘镇明 陈靳松 龚善中 徐铮 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期217-221,共5页
本试验在最佳诱导条件下获得猪圆环病毒Ⅱ型重组Cap蛋白的基础上,利用His Bind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,通过Western blot检测证明表达产物具有良好的抗原性。以纯化后的重组融合蛋白作为诊断抗原,对ELISA反应条件进行优化,... 本试验在最佳诱导条件下获得猪圆环病毒Ⅱ型重组Cap蛋白的基础上,利用His Bind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,通过Western blot检测证明表达产物具有良好的抗原性。以纯化后的重组融合蛋白作为诊断抗原,对ELISA反应条件进行优化,初步建立了检测PCV2抗体的间接ELISA方法。用该法对广东、广西一些地区收集到的380份血清样品进行检测,检测结果阳性率为86.1%,从中随机取90份猪血清样品与国产商品化试剂盒检测结果对比,符合率为95.6%,表明本实验建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,适于大规模检测PCV2血清抗体的流行病学调查。 展开更多
关键词 PCV2 重组CAP蛋白 表达 纯化 ELISA
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猪伪狂犬病病毒粤A株的分离与鉴定 被引量：7
3
作者 刘镇明 蓝天 +2 位作者 罗满林 袁少华 石迎新 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期76-78,共3页
从广东番禺某猪场病死仔猪中分离到一株疑为猪伪狂犬病病毒 (PRV)毒株 ,通过对其理化特性的鉴定、中和试验、实验动物回归试验、电镜观察、PCR扩增及感染力测定 ,发现其对氯仿、乙醚均敏感 ;能中和Pr闽A株标准阳性血清 ;实验兔接种该病... 从广东番禺某猪场病死仔猪中分离到一株疑为猪伪狂犬病病毒 (PRV)毒株 ,通过对其理化特性的鉴定、中和试验、实验动物回归试验、电镜观察、PCR扩增及感染力测定 ,发现其对氯仿、乙醚均敏感 ;能中和Pr闽A株标准阳性血清 ;实验兔接种该病毒后 ,发生瘙痒并麻痹致死 ;电镜观察可见病毒粒子呈不规则圆形并带有囊膜和纤突 ;PCR体外扩增可见其与闽A株在同一水平位置上有相同的电泳带 ;用Marc14 5细胞测定其毒价为 1 0 7.5TCID50 /mL 根据此分离病毒株的上述特性 。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 中和试验 PCR检测 病原鉴定
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《家畜传染病学》教学改革 被引量：12
4
作者 罗满林 刘镇明 +2 位作者 苏丹萍 黄毓茂 贺东生 《动物保健》 2006年第9期18-19,共2页
关键词 家畜传染病学 教学改革 分子生物学技术 预防兽医学 核心课程 科学技术 技术应用 电子显微镜
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检测猪圆环病毒2型的一种PCR方法 被引量：9
5
作者 梁红虎 罗满林 +2 位作者 刘镇明 邬苏晓 卜春玲 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期91-92,共2页
参照genbank已发表的猪圆环病毒2型的基因序列,设计1对2型特异的引物,对广东省20个猪场送检的患病断奶仔猪的病料进行PCR扩增,并将PCR产物连接到pMD18 T载体上,对重组质粒进行PCR、酶切鉴定及测序,最后发现PCR检测均为阳性.
关键词 猪 圆环病毒 PCR检测方法 基因序列 酶切鉴定
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猪圆环病毒Ⅱ型ORF2截短基因的克隆及原核表达 被引量：8
6
作者 林彦星 孙彦伟 +2 位作者 刘镇明 戚一达 耿忠海 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期464-468,共5页
参照GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型（Porcinecircovirus type 2，PCV2）的ORF2基因序列，设计合成1对引物，对PCV-2ZS株ORF2基因上含主要抗原位点的片段（ORF2-ME）进行PCR扩增，并克隆到pMD18-T Simple Vector中，进行序列测定。将重组质粒... 参照GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型（Porcinecircovirus type 2，PCV2）的ORF2基因序列，设计合成1对引物，对PCV-2ZS株ORF2基因上含主要抗原位点的片段（ORF2-ME）进行PCR扩增，并克隆到pMD18-T Simple Vector中，进行序列测定。将重组质粒pMD—ORF2-ME的EcoR Ⅴ和Xhol Ⅰ双酶切产物插入原核表达载体pET-32a（＋），构建原核表达载体pET—ORF—ME。测序分析表明，克隆的ORF2-ME与GenBank上公布的PCV2毒株核苷酸序列同源性为99％～100％，推导的氨基酸序列同源性介于91％～100％之间。原核表达载体导入BL21（DE3）后用IPTG进行诱导表达，收集菌液进行SDS—PAGE和Western Blotting分析，结果表明ORF2-ME在BL21（DE3）中成功表达，所表达融合蛋白的相对分子质量约为40000，并能被PCV2阳性血清所识别，这就为PCV2感染诊断和抗体检测提供了依据。 展开更多
关键词 PCV2 ORF2截短基因 克隆 表达
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牛结核病巢式PCR快速检测方法的建立 被引量：8
7
作者 亓文宝 陈世灿 +4 位作者 罗满林 方正刚 贺东生 刘镇明 黄毓茂 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期815-819,共5页
根据分枝杆菌(mycobacteria)保守的插入序列IS1081设计4条特异性引物,建立了快速检测牛结核病的巢式PCR方法。该方法一次扩增的敏感性是1.35 pg,二次扩增的敏感性是1.35 fg。在对95份PPD阳性牛临床病料组织和23份血液样本的PCR检测中,... 根据分枝杆菌(mycobacteria)保守的插入序列IS1081设计4条特异性引物,建立了快速检测牛结核病的巢式PCR方法。该方法一次扩增的敏感性是1.35 pg,二次扩增的敏感性是1.35 fg。在对95份PPD阳性牛临床病料组织和23份血液样本的PCR检测中,用引物TB-Q1和TB-Q2做一次扩增,阳性检出率分别为36/95(37.5%)和5/23(21.7%);用引物TB-B1和TB-B2做二次扩增,阳性检出率分别为81/95(85.3%)和14/23(60.9%)。该方法作为辅助PPD试验的快速检测方法用于牛结核病的流行病学调查,具有重要的实用价值和应用前景。 展开更多
关键词 牛结核病 巢式PCR PPD
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蛋黄抗体三种提取方法的比较 被引量：7
8
作者 苏伟桐 刘镇明 《中国兽药杂志》 2009年第4期38-41,共4页
利用氯仿、辛酸和苯酚三种溶剂采用不同提取方法,分别对经禽流感H5和H9亚型疫苗免疫的鸡蛋黄液进行YAb提取,并对提取的YAb用AIH5和AIH9抗原进行HI测定,结果显示:三种溶剂提取的YAbHI效价均低于原蛋黄液,HI抗体损耗率分别是氯仿法为26.30... 利用氯仿、辛酸和苯酚三种溶剂采用不同提取方法,分别对经禽流感H5和H9亚型疫苗免疫的鸡蛋黄液进行YAb提取,并对提取的YAb用AIH5和AIH9抗原进行HI测定,结果显示:三种溶剂提取的YAbHI效价均低于原蛋黄液,HI抗体损耗率分别是氯仿法为26.30%～44.72%,辛酸法为5%～16.87%,苯酚法为66.02%。三者中辛酸法提取的抗体含量最高,其次是氯仿法,苯酚法最低。三种方法提取的YAb均为澄清透明,分别带有各提取试剂的味道。将提取液3mL～5mL肌注鸡只,均无不良反应,表现安全。提取液保存8个月,仍澄清透明,无菌污染。 展开更多
关键词 氯仿 辛酸 苯酚 蛋黄抗体 提取 比较
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鸡马杜霉素中毒 被引量：6
9
作者 林彰毓 刘镇明 余永钦 《养禽与禽病防治》 1995年第12期6-8,共3页
马杜霉素铵是一种高效抗鸡球虫聚醚类离子载体型抗生素,在球虫生活史的第一个无性生殖阶段,它能选择性输送钾、钠等一价阳离子通过球虫细胞膜,使球虫的子孢子和新一代裂殖体细胞内的离子失调,抑制球虫发育,导致细胞代谢紊乱以致死亡。9... 马杜霉素铵是一种高效抗鸡球虫聚醚类离子载体型抗生素,在球虫生活史的第一个无性生殖阶段,它能选择性输送钾、钠等一价阳离子通过球虫细胞膜,使球虫的子孢子和新一代裂殖体细胞内的离子失调,抑制球虫发育,导致细胞代谢紊乱以致死亡。90年代初,美国氰胺公司以“加福”的商品名开发生产。目前,国内已有不少厂家进行生产,并冠以“杜球”、“克球皇”、“抗球王”等商品名进行推广应用。 展开更多
关键词 鸡病 马杜霉素 中毒
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牛结核病荧光定量PCR快速检测方法的建立及初步应用 被引量：6
10
作者 亓文宝 罗满林 +4 位作者 周荣 白培胜 贺东生 刘镇明 黄毓茂 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期883-886,共4页
目的建立牛结核病荧光定量PCR快速检测方法。方法根据分枝杆菌的插入序列IS1081设计引物和探针,优化反应条件,建立标准曲线,进行特异性、敏感性、重复性实验,并用所建立的方法对临床样品进行检测。结果该方法的敏感性达到了10个拷贝,且... 目的建立牛结核病荧光定量PCR快速检测方法。方法根据分枝杆菌的插入序列IS1081设计引物和探针,优化反应条件,建立标准曲线,进行特异性、敏感性、重复性实验,并用所建立的方法对临床样品进行检测。结果该方法的敏感性达到了10个拷贝,且特异性高,重复性好。对30份PPD试验和巢式PCR检测都为阳性的临床样本进行荧光定量PCR检测的结果全部为阳性;而对PPD检测阳性,巢式PCR检测为阴性的15份临床样本进行检测时,2份为阳性;在对2份PPD检测阴性而巢式PCR检测阳性的临床样本的检测结果也为阳性。结论成功建立了牛结核病荧光定量PCR快速检测方法,对临床样品的快速检测和牛结核病的早期诊断具有重要意义。 展开更多
关键词 牛结核病 荧光定量PCR 快速检测 巢式PCR PPD
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猪Ⅱ型圆环病毒ORF2截短基因的表达纯化及动物免疫试验 被引量：6
11
作者 林彦星 刘镇明 +4 位作者 黄毓茂 罗满林 贺东生 鲁俊鹏 杨丽梅 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期354-358,共5页
在最佳诱导条件下获得猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)重组Cap蛋白,表达产物经可溶性分析表明该重组蛋白主要以包涵体形式存在。大量诱导表达重组Cap蛋白,利用His Bind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,通过Western blotting检测证明表达产物... 在最佳诱导条件下获得猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)重组Cap蛋白,表达产物经可溶性分析表明该重组蛋白主要以包涵体形式存在。大量诱导表达重组Cap蛋白,利用His Bind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,通过Western blotting检测证明表达产物具有良好的免疫原性。用该纯化的重组蛋白作为亚单位疫苗,与本实验室所构建保存的pcDNA3.1-ORF2分别免疫BALB/c小鼠,对亚单位疫苗和基因疫苗做了对比试验,为进一步研制PCV2基因工程苗奠定良好的基础。 展开更多
关键词 PCV2 亚单位疫苗 CAP蛋白
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O型口蹄疫病毒VP1基因的克隆与表达 被引量：6
12
作者 林瑞庆 罗满林 +2 位作者 黄毓茂 刘镇明 辛朝安 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期92-95,共4页
以O型口蹄疫病毒(FMDV)流行毒株为研究对象,通过RT PCR扩增出VP1基因,克隆至表达载体pET 32a中,分析比较不同地区O型口蹄疫病毒VP1基因序列,为构建VP1重组基因工程苗奠定基础.经测序表明,目的基因VP1已以正确的阅读框架整合至表达质粒中... 以O型口蹄疫病毒(FMDV)流行毒株为研究对象,通过RT PCR扩增出VP1基因,克隆至表达载体pET 32a中,分析比较不同地区O型口蹄疫病毒VP1基因序列,为构建VP1重组基因工程苗奠定基础.经测序表明,目的基因VP1已以正确的阅读框架整合至表达质粒中,应用大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌,通过IPTG诱导方法,表达包含VP1基因产物的融合蛋白,经SDS PAGE和Western blotting分析,表明表达蛋白表达量高,反应原性良好. 展开更多
关键词 O型口蹄疫病毒 VP1基因 基因克隆 基因表达
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一株鸽新城疫病毒的分离鉴定及F与HN基因序列分析 被引量：6
13
作者 钟植文 黎先伟 +3 位作者 陈珊 高绮静 刘镇明 杨傲冰 《动物医学进展》 北大核心 2015年第5期86-90,共5页
从广东珠三角地区某鸽场的发病鸽群采样,接种10日龄SPF鸡胚后分离到一株病毒,命名为JP株。系列微量血凝和微量血凝抑制试验结果表明,新城疫病毒（NDV）阳性。测序结果显示,该NDV分离株F蛋白裂解位点的氨基酸序列为112 R-R-Q-K-R-F117,... 从广东珠三角地区某鸽场的发病鸽群采样,接种10日龄SPF鸡胚后分离到一株病毒,命名为JP株。系列微量血凝和微量血凝抑制试验结果表明,新城疫病毒（NDV）阳性。测序结果显示,该NDV分离株F蛋白裂解位点的氨基酸序列为112 R-R-Q-K-R-F117,具有强毒株序列特点;F基因分型表明,JP株属于基因Ⅵ型。Blast结果显示,JP株F、HN基因序列均与基因Ⅵ型pi/CH/LGD/110208株同源性最高,均达99%。同源性比较发现,F和HN基因、蛋白都与基因Ⅵ型新城疫毒株同源性较高,分别为92.5%~99%、95.5%~99.1%和90.6%~98.7%、91.9%~99%,而与国内常用疫苗株B1、La Sota、Mukteswar等同源性较低,分别为83.2%~85.9%、89.2%~91%和79.3%~83.4%、86%~89.5%。分离的JP株属于基因Ⅵ型,并与国内常用疫苗株存在一定的差异。 展开更多
关键词 鸽 新城疫病毒 F基因 HN基因 基因Ⅵ型
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关于鸡热应激的探讨 被引量：4
14
作者 徐铮 武力 刘镇明 《养禽与禽病防治》 北大核心 2006年第10期2-5,共4页
关键词 鸡 热应激 临床症状 生理机能
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伪狂犬病毒基因转移载体的快速构建及其瞬时表达 被引量：5
15
作者 罗满林 丁建华 +3 位作者 刘镇明 袁少华 张楚瑜 王家富 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期79-81,共3页
以含有伪狂犬病毒 (pseudorabiesvirus ,PRV)蛋白激酶 (proteinkinase ,PK)基因的重组质粒为基础 ,利用非互补粘性末端经过部分补平后成为粘性末端 ,再进行连接的方法克隆了与载体分子大小相当的报告基因表达盒 用限制性内切酶分析确... 以含有伪狂犬病毒 (pseudorabiesvirus ,PRV)蛋白激酶 (proteinkinase ,PK)基因的重组质粒为基础 ,利用非互补粘性末端经过部分补平后成为粘性末端 ,再进行连接的方法克隆了与载体分子大小相当的报告基因表达盒 用限制性内切酶分析确证了伪狂犬病毒表达载体中报道基因表达盒的插入方向 ,并通过导入细胞后检测外源基因在体外的瞬时表达 。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 瞬时表达 基因工程疫苗 表达载体 猪
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猪胸膜肺炎放线杆菌血清型的PCR鉴定 被引量：5
16
作者 陈征 罗满林 +4 位作者 李树清 李健 梁金华 刘镇明 崔克 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期653-656,共4页
据胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)生物I型各血清型之间外毒素(apx)基因组结构差异,参考GenBank上已发表的4种毒素(apxI/apxII/apxIII/apxIV)的核酸序列设计了6对特异性引物,对APP的12个血清型进行多重PCR扩增,... 据胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)生物I型各血清型之间外毒素(apx)基因组结构差异,参考GenBank上已发表的4种毒素(apxI/apxII/apxIII/apxIV)的核酸序列设计了6对特异性引物,对APP的12个血清型进行多重PCR扩增,得出不同的特异性的扩增片段,得以准确鉴定APP生物I型中的9种血清型,但其中血清型2和8,血清型5、9和11仍未能区分。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 血清型 PCR apx基因
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广东省猪群口蹄疫免疫抗体水平调查 被引量：4
17
作者 崔克 罗满林 +2 位作者 贺东生 刘镇明 黄毓茂 《中国兽药杂志》 2007年第11期17-19,共3页
采集广东省不同地区11个猪场的不同类型猪的血清样品3 108份,采用液相阻断-酶联免疫吸附法,以口蹄疫结构蛋白抗体滴度作为评估疫苗效力的指标。本试验共采集种公猪血清样品77份,结果显示平均抗体滴度为(1.859 1±0.078 1,1∶72);仔... 采集广东省不同地区11个猪场的不同类型猪的血清样品3 108份,采用液相阻断-酶联免疫吸附法,以口蹄疫结构蛋白抗体滴度作为评估疫苗效力的指标。本试验共采集种公猪血清样品77份,结果显示平均抗体滴度为(1.859 1±0.078 1,1∶72);仔猪血清样品514份,平均抗体滴度为(1.793 3±0.027 9,1∶62);经产母猪血清样品604份,平均抗体滴度为(1.967 2±0.024 2,1∶92);后备母猪血清样品有1 913份,平均抗体滴度为(1.790 8±0.015 2,1∶61)。从统计结果来看,经产母猪的免疫状态是最好的,但总的来说,猪群的整体免疫水平不高,免疫形势不容乐观,口蹄疫的防治水平仍须提高。 展开更多
关键词 口蹄疫 抗体滴度 液相阻断-酶联免疫吸附试验
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猪圆环病毒2型ORF2截短基因的原核表达与纯化 被引量：4
18
作者 林彦星 孙彦伟 +3 位作者 刘镇明 徐铮 鲁俊鹏 龚善中 《动物医学进展》 CSCD 2006年第12期66-70,共5页
对重组原核表达载体pET-ORF2的表达条件进行优化,结果表明,最佳IPTG诱导浓度为1.0mmol/L,最佳诱导时间为5h。在最佳诱导条件下获得猪圆环病毒2型重组Cap蛋白的基础上,利用HisBind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,再分别用SDS-PAGE... 对重组原核表达载体pET-ORF2的表达条件进行优化,结果表明,最佳IPTG诱导浓度为1.0mmol/L,最佳诱导时间为5h。在最佳诱导条件下获得猪圆环病毒2型重组Cap蛋白的基础上,利用HisBind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,再分别用SDS-PAGE电泳和Westernblotting对纯化产物的纯化效果及特异性进行检测,结果显示表达产物纯化良好,并能被PCV-2阳性血清识别,具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 重组原核表达载体 重组CAP蛋白 表达 纯化
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重组伪狂犬病病毒TK^-/FMDV VP1的构建 被引量：3
19
作者 卜春玲 罗满林 +2 位作者 刘镇明 黄毓茂 贺东生 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期241-244,269,共5页
以伪狂犬病病毒 (PRV)为载体表达其他病原体抗原蛋白是伪狂犬病疫苗研究的一个重要方向。本文以广东地方分离株 (以下简称YA)为亲本株 ,用PCR方法得到同源左右臂 ,然后将重组转移载体和PRVYA的基因组共转染 ,用BUDR筛选出了表达口蹄疫病... 以伪狂犬病病毒 (PRV)为载体表达其他病原体抗原蛋白是伪狂犬病疫苗研究的一个重要方向。本文以广东地方分离株 (以下简称YA)为亲本株 ,用PCR方法得到同源左右臂 ,然后将重组转移载体和PRVYA的基因组共转染 ,用BUDR筛选出了表达口蹄疫病毒 (Foot_and_MouthDiseaseVirus ,FMDV)结构蛋白VP1的TK_重组病毒 ,用PCR和SDS -PAGE的方法对VP1蛋白进行了初步鉴定 。 展开更多
关键词 重组伪狂犬病病毒 TK基因缺失疫苗 FMDV VP1
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浅谈猪伪狂犬病的防制 被引量：3
20
作者 邬苏晓 刘镇明 肖正中 《畜牧兽医科技信息》 2004年第3期22-24,共3页
关键词 猪 伪狂犬病 防制 狂犬病毒
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