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TRB3在肾纤维化中的表达及其与上皮-间叶转化的关系
被引量:
7
1
作者
刘
进
稳
辛冰牧
+1 位作者
慕容
花芳
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期407-411,共5页
目的研究TRB3与肾纤维化的关系和作用机制。方法结扎♂性C57BL/6小鼠单侧输尿管,建立肾纤维化模型。利用H&E染色和Masson染色确立纤维化病变。在过表达TRB3条件下,利用免疫印迹检测E-cadherin和α-SMA表达改变。在干扰TRB3条件下,...
目的研究TRB3与肾纤维化的关系和作用机制。方法结扎♂性C57BL/6小鼠单侧输尿管,建立肾纤维化模型。利用H&E染色和Masson染色确立纤维化病变。在过表达TRB3条件下,利用免疫印迹检测E-cadherin和α-SMA表达改变。在干扰TRB3条件下,利用细胞划痕实验检测细胞迁移。结果肾纤维化模型组TRB3蛋白表达高于假手术组(P<0.01),且与纤维化严重程度正相关。在大鼠肾小管上皮细胞NRK中过表达TRB3,导致E-cadherin表达降低,而α-SMA表达增高。干扰TRB3降低TGF-β1诱导的HepG2细胞迁移。结论 TRB3在纤维化肾脏组织中表达增高。TRB3可能通过诱导上皮-间叶转化在纤维化的进展中发挥促进作用。
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关键词
TRB3
单侧输尿管结扎
肾纤维化
E-CADHERIN
Α-SMA
上皮-间叶转化
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职称材料
稳定沉默TRB3细胞模型及TRB3启动子报告基因的建立
2
作者
慕容
刘
进
稳
花芳
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期182-186,共5页
构建人TRB3基因的shRNA真核表达载体和稳定沉默TRB3的人结肠癌细胞系HCT-8,构建TRB3启动子区的荧光素酶报告基因,为以TRB3为靶点的药物研究提供有效的筛选平台。针对TRB3的mRNA设计寡核苷酸序列,构建TRB3-shRNA表达载体和control-shRNA...
构建人TRB3基因的shRNA真核表达载体和稳定沉默TRB3的人结肠癌细胞系HCT-8,构建TRB3启动子区的荧光素酶报告基因,为以TRB3为靶点的药物研究提供有效的筛选平台。针对TRB3的mRNA设计寡核苷酸序列,构建TRB3-shRNA表达载体和control-shRNA阴性对照载体,宿主菌扩增,并测序鉴定。测序正确的重组质粒转染HCT-8细胞,以潮霉素筛选,分别建立稳定表达TRB3-shRNA和control-shRNA的HCT-8细胞系。通过细胞划痕-修复实验检测细胞的迁移能力。同时,通过克隆、酶切、连接、转化和扩增,构建TRB3启动子区的荧光素酶报告基因pTRB3-Luc,转染HEK293ET细胞并给予衣霉素刺激,检测荧光素酶报告基因的活性。经测序证实,TRB3-shRNA真核表达载体构建成功,插入的DNA片段与设计序列完全一致。在建立的稳定表达TRB3-shRNA的HCT-8细胞中,TRB3的mRNA和蛋白表达水平都显著下降,细胞的迁移能力显著降低。同时,TRB3启动子区荧光素酶报告基因pTRB3-Luc构建成功,并在衣霉素诱导下呈现剂量依赖性的活性增强。TRB3-shRNA重组质粒、稳定沉默TRB3的HCT-8细胞系和TRB3启动子报告基因的建立为进一步研究TRB3在肿瘤发生发展过程中的作用以及TRB3抑制剂的筛选提供了有力的工具。
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关键词
TRB3
稳定沉默
报告基因
肿瘤
迁移
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职称材料
OSKM诱导过表达c-Jun肝癌细胞重编程
3
作者
苏铭
韩烁
+5 位作者
张明智
李睿智
魏示若
曾沃坦
刘
进
稳
沈丽
《解剖学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期296-302,共7页
目的构建OSKM诱导的过表达c-Jun肝癌细胞(C3A-c-Jun)重编程细胞系,探讨外源性c-Jun对肝癌细胞重编程的影响。方法通过C3A细胞稳定过表达c-Jun后进行OSKM诱导重编程,通过碱性磷酸酶染色,Real-time PCR,免疫印迹法,免疫荧光等技术对细胞...
目的构建OSKM诱导的过表达c-Jun肝癌细胞(C3A-c-Jun)重编程细胞系,探讨外源性c-Jun对肝癌细胞重编程的影响。方法通过C3A细胞稳定过表达c-Jun后进行OSKM诱导重编程,通过碱性磷酸酶染色,Real-time PCR,免疫印迹法,免疫荧光等技术对细胞进行鉴定,建立C3A-c-Jun诱导肿瘤干细胞系C3A-c-Jun-i CSCs。结果 C3A-c-Jun-i CSCs克隆呈圆顶状,边缘圆钝,克隆内细胞小且排列紧密,多层分布,碱性磷酸酶染色阳性,mRNA和蛋白水平均可表达多潜能性标记物OCT4、SOX2;C3A-c-Jun-i CSCs组外源性和内源性Sox2的表达量均明显高于C3A-i CSCs对照组;在重编程过程中c-Jun持续表达。结论 OSKM诱导C3A、C3A-c-Jun肝癌细胞重编程,分别建立C3A-i CSCs和C3A-c-Jun-i CSCs细胞系,发现外源性c-Jun通过上调Sox2基因的表达,启动下游一系列反应,对肝癌细胞重编程过程起促进作用。
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关键词
C-JUN
诱导
肿瘤干细胞
重编程
免疫印迹法
C3A细胞
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职称材料
题名
TRB3在肾纤维化中的表达及其与上皮-间叶转化的关系
被引量:
7
1
作者
刘
进
稳
辛冰牧
慕容
花芳
机构
中国医学科学院药物研究所
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期407-411,共5页
基金
国家自然科学基金面上项目(No 30901814,81101595)
北京市自然科学基金面上项目(No 7102113)
中央级公益性科研院所基本科研创新药物发现与新技术专项(No2010CHX12)
文摘
目的研究TRB3与肾纤维化的关系和作用机制。方法结扎♂性C57BL/6小鼠单侧输尿管,建立肾纤维化模型。利用H&E染色和Masson染色确立纤维化病变。在过表达TRB3条件下,利用免疫印迹检测E-cadherin和α-SMA表达改变。在干扰TRB3条件下,利用细胞划痕实验检测细胞迁移。结果肾纤维化模型组TRB3蛋白表达高于假手术组(P<0.01),且与纤维化严重程度正相关。在大鼠肾小管上皮细胞NRK中过表达TRB3,导致E-cadherin表达降低,而α-SMA表达增高。干扰TRB3降低TGF-β1诱导的HepG2细胞迁移。结论 TRB3在纤维化肾脏组织中表达增高。TRB3可能通过诱导上皮-间叶转化在纤维化的进展中发挥促进作用。
关键词
TRB3
单侧输尿管结扎
肾纤维化
E-CADHERIN
Α-SMA
上皮-间叶转化
Keywords
TRB3
unilateral ureteral obstruction
renal fibrosis
E-cadherin
α-SMA
epithelial-mesenchymal transition
分类号
R329.24 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R735.202.2 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
稳定沉默TRB3细胞模型及TRB3启动子报告基因的建立
2
作者
慕容
刘
进
稳
花芳
机构
中国医学科学院/北京协和医学院药物研究所
出处
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期182-186,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30973557
No.81101595)
中央级公益性科研院所基本科研创新药物发现与新技术专项资助项目(No.2010CHX12)~~
文摘
构建人TRB3基因的shRNA真核表达载体和稳定沉默TRB3的人结肠癌细胞系HCT-8,构建TRB3启动子区的荧光素酶报告基因,为以TRB3为靶点的药物研究提供有效的筛选平台。针对TRB3的mRNA设计寡核苷酸序列,构建TRB3-shRNA表达载体和control-shRNA阴性对照载体,宿主菌扩增,并测序鉴定。测序正确的重组质粒转染HCT-8细胞,以潮霉素筛选,分别建立稳定表达TRB3-shRNA和control-shRNA的HCT-8细胞系。通过细胞划痕-修复实验检测细胞的迁移能力。同时,通过克隆、酶切、连接、转化和扩增,构建TRB3启动子区的荧光素酶报告基因pTRB3-Luc,转染HEK293ET细胞并给予衣霉素刺激,检测荧光素酶报告基因的活性。经测序证实,TRB3-shRNA真核表达载体构建成功,插入的DNA片段与设计序列完全一致。在建立的稳定表达TRB3-shRNA的HCT-8细胞中,TRB3的mRNA和蛋白表达水平都显著下降,细胞的迁移能力显著降低。同时,TRB3启动子区荧光素酶报告基因pTRB3-Luc构建成功,并在衣霉素诱导下呈现剂量依赖性的活性增强。TRB3-shRNA重组质粒、稳定沉默TRB3的HCT-8细胞系和TRB3启动子报告基因的建立为进一步研究TRB3在肿瘤发生发展过程中的作用以及TRB3抑制剂的筛选提供了有力的工具。
关键词
TRB3
稳定沉默
报告基因
肿瘤
迁移
Keywords
TRB3
long-term silence
reporter gene
tumor
migration This study was supported by the National Natural Science Foundation of China(No.30973557
No.81101595) and the Basic Research Program of the Institute of Materia Medica(No.2010CHX12)
分类号
R730.2 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
OSKM诱导过表达c-Jun肝癌细胞重编程
3
作者
苏铭
韩烁
张明智
李睿智
魏示若
曾沃坦
刘
进
稳
沈丽
机构
北京大学医学部细胞生物学系
北京东方亚美基因科技研究院有限公司
出处
《解剖学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期296-302,共7页
基金
国家自然科学基金(81572313)
广东省省级科技计划项目(2015B020229002)
文摘
目的构建OSKM诱导的过表达c-Jun肝癌细胞(C3A-c-Jun)重编程细胞系,探讨外源性c-Jun对肝癌细胞重编程的影响。方法通过C3A细胞稳定过表达c-Jun后进行OSKM诱导重编程,通过碱性磷酸酶染色,Real-time PCR,免疫印迹法,免疫荧光等技术对细胞进行鉴定,建立C3A-c-Jun诱导肿瘤干细胞系C3A-c-Jun-i CSCs。结果 C3A-c-Jun-i CSCs克隆呈圆顶状,边缘圆钝,克隆内细胞小且排列紧密,多层分布,碱性磷酸酶染色阳性,mRNA和蛋白水平均可表达多潜能性标记物OCT4、SOX2;C3A-c-Jun-i CSCs组外源性和内源性Sox2的表达量均明显高于C3A-i CSCs对照组;在重编程过程中c-Jun持续表达。结论 OSKM诱导C3A、C3A-c-Jun肝癌细胞重编程,分别建立C3A-i CSCs和C3A-c-Jun-i CSCs细胞系,发现外源性c-Jun通过上调Sox2基因的表达,启动下游一系列反应,对肝癌细胞重编程过程起促进作用。
关键词
C-JUN
诱导
肿瘤干细胞
重编程
免疫印迹法
C3A细胞
Keywords
c-Jun
Induce
Cancer stem cell
Reprogramming
Western blotting
C3A cell
分类号
R735.7 [医药卫生—肿瘤]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
TRB3在肾纤维化中的表达及其与上皮-间叶转化的关系
刘
进
稳
辛冰牧
慕容
花芳
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
7
下载PDF
职称材料
2
稳定沉默TRB3细胞模型及TRB3启动子报告基因的建立
慕容
刘
进
稳
花芳
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
下载PDF
职称材料
3
OSKM诱导过表达c-Jun肝癌细胞重编程
苏铭
韩烁
张明智
李睿智
魏示若
曾沃坦
刘
进
稳
沈丽
《解剖学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
0
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职称材料
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