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两种H9C2心肌细胞氧化损伤模型的比较
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作者 陈芸霞 邓洪荣 +5 位作者 许皓 易勤 谭彬 田杰 朱静 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1079-1085,共7页
目的:探讨低氧、低糖及血清剥夺(glucose and serum deprivation under hypoxia(1%O_(2)),GSDH)处理与H_(2)O_(2)处理在构建H9C2心肌细胞氧化损伤模型中的应用价值。方法:培养H9C2心肌细胞,当细胞生长状态良好时,用低氧(1%O_(2))、低糖(... 目的:探讨低氧、低糖及血清剥夺(glucose and serum deprivation under hypoxia(1%O_(2)),GSDH)处理与H_(2)O_(2)处理在构建H9C2心肌细胞氧化损伤模型中的应用价值。方法:培养H9C2心肌细胞,当细胞生长状态良好时,用低氧(1%O_(2))、低糖(1.0 g/L)及血清剥夺联合处理或200μmol/L的H_(2)O_(2)作用于心肌细胞24 h。采用CCK8实验检测细胞增殖能力;通过细胞凋亡试剂(annexinV-FITC/PI)、Hoechst染色检测细胞凋亡;细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测细胞氧化应激水平;BODIPY检测细胞脂质过氧化水平;过碘酸雪夫(periodic acid-schiff stain,PAS)染色检测细胞糖原合成能力;线粒体膜电位检测试剂(mitochondrial membrane potential assay kit with JC-1,JC-1)染色检测线粒体膜电位水平;Western blot检测能量代谢相关分子AMP依赖的蛋白激酶(Adenosine 5’-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK)及氧化应激相关分子NAD(P)H醌脱氢酶1(NAD(P)H quinone dehydrogenase 1,NQO-1)、血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,GSDH处理组与H_(2)O_(2)处理组的心肌细胞存活率均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白组相比,GSDH处理与H_(2)O_(2)处理都增加了心肌细胞的凋亡水平、ROS和脂滴堆积水平增高、糖原消耗量增加且线粒体膜电位降低。但相比于H_(2)O_(2)处理组,GSDH处理组的细胞糖原消耗增多更明显,脂滴堆积也更明显,并且AMPK磷酸化水平显著降低。结论:低氧、低糖及GSDH处理与H_(2)O_(2)处理均能造成H9C2心肌细胞氧化损伤,但相比于H_(2)O_(2)处理组,GSDH处理组的效果更符合体内心肌损伤时的能量代谢转变,有望作为一种更简单便捷的心肌氧化损伤模型应用于科研。 展开更多
关键词 低氧低糖血清剥夺 过氧化氢 氧化应激 能量代谢 免疫印迹法
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低氧低糖及血清剥夺联合处理抑制Nrf2信号通路诱发大鼠骨髓间充质干细胞氧化应激和凋亡 被引量:2
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作者 谢秋敏 孙艳婷 +5 位作者 许皓 易勤 谭彬 田杰 朱静 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期305-312,共8页
目的探讨低氧低糖血清剥夺(GSDH)处理对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)氧化应激及凋亡的影响。方法在体外对提取纯化后的原代BMSCs利用低氧(1%O_(2))、低糖(1.0 g/L)及血清剥夺联合处理建立BMSCs细胞损伤模型。采用集落形成实验、细胞周... 目的探讨低氧低糖血清剥夺(GSDH)处理对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)氧化应激及凋亡的影响。方法在体外对提取纯化后的原代BMSCs利用低氧(1%O_(2))、低糖(1.0 g/L)及血清剥夺联合处理建立BMSCs细胞损伤模型。采用集落形成实验、细胞周期测定以及CCK-8实验检测细胞增殖能力;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;通过细胞凋亡试剂(AnnexinV-FITC/PI)、线粒体膜电位检测试剂(JC-1)染色和线粒体荧光探针(Mito-Trancker)检测细胞凋亡;细胞活性氧簇(ROS)和钙离子(Fluo-4AM)检测细胞氧化应激水平;Western blotting检测抗氧化应激相关分子谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)等以及核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)信号通路中关键分子的蛋白表达水平。结果大鼠原代BMSCs表面标志物高表达CD29、CD71,低表达CD45、CD34;GSDH处理抑制BMSCs细胞增殖(P<0.05)和迁移(P<0.05),增加ROS和钙离子水平(P<0.05),且抑制抗氧化应激相关分子GPX4等蛋白表达(P<0.01);与空白对照组相比,GSDH处理后BMSCs凋亡显著升高(P<0.05),线粒体膜电位降低(P<0.01),网络化减少(P<0.01)。Nrf2信号通路中Nrf2蛋白及下游关键分子的蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论GSDH处理诱发的BMSCs氧化应激及进一步导致的凋亡损伤与Nrf2信号通路被抑制有关。 展开更多
关键词 低氧低糖血清剥夺 氧化应激 骨髓间充质干细胞 免疫印迹法 大鼠
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