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2015—2022年我国部分地区Ⅰ群禽腺病毒分子流行病学调查 被引量：6
1
作者 田甜 刘琳敏 +7 位作者 路文彬 庞洪泽 刘小娜 曹立辉 雷白时 赵款 张武超 袁万哲 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期57-63,共7页
为了解我国禽类养殖场中Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-Ⅰ)的分子流行病学情况,对采自6个不同省份及地区的324份疑似FAdV感染组织利用PCR进行病原学检测,通过扩增其Hexon基因并连接至pMD19-T载体进行测序和遗传进化分析。结果显示,324份样品中阳性... 为了解我国禽类养殖场中Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-Ⅰ)的分子流行病学情况,对采自6个不同省份及地区的324份疑似FAdV感染组织利用PCR进行病原学检测,通过扩增其Hexon基因并连接至pMD19-T载体进行测序和遗传进化分析。结果显示,324份样品中阳性检出率为23.4%,鸡、鹅、鹌鹑、鸽、鸭中均有检出,其中2021年FAdV的检出率高达61.8%。另外,在扩繁得到76株病毒中,通过序列对比发现,血清1型(FAdV-1)占比较少为7.9%,血清4型(FAdV-4)占比较高为92.1%。FAdV-1样本株与国内外流行毒株处于同一遗传进化分支,Hexon L1区域的核苷酸同源性为98.7%~100%,部分FAdV-4样本株与中国参考毒株处于同一遗传进化分支。本研究在2015—2022年采集了我国部分地区疑似FAdV感染的病料进行Ⅰ群禽腺病毒的分子流行病学调查和遗传进化分析,为进一步做好相关防控工作提供理论参考。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒 流行病学调查 遗传进化分析
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新型鹅细小病毒VP2蛋白的原核可溶性表达及优化 被引量：2
2
作者 向凤君 刘琳敏 +7 位作者 雷白时 杨颖 郭笑然 路文斌 田甜 张武超 赵款 袁万哲 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1285-1291,共7页
本研究利用基因工程技术将VP2编码基因克隆至载体pET-32a(+)中,成功构建重组质粒pET-32a-VP2,通过表达条件摸索发现VP2为包涵体表达。为了实现VP2蛋白的可溶性表达,制备含有能表达分子伴侣蛋白groES-groEL-tig的质粒pG-Tf2和重组质粒pET... 本研究利用基因工程技术将VP2编码基因克隆至载体pET-32a(+)中,成功构建重组质粒pET-32a-VP2,通过表达条件摸索发现VP2为包涵体表达。为了实现VP2蛋白的可溶性表达,制备含有能表达分子伴侣蛋白groES-groEL-tig的质粒pG-Tf2和重组质粒pET-32a-VP2双质粒表达系统。通过对双质粒表达系统表达条件的探索,发现在IPTG为0.25 mmol/L、四环素碱为250μg/L、诱导时间12 h、诱导温度20℃时可溶性表达效果最佳,可溶性蛋白占总表达量80%。经过Western-blot分析,证实重组蛋白具有良好反应原性。结果表明,利用分子伴侣与NGPV VP2蛋白的共表达系统,实现了新型鹅细小病毒(NGPV)VP2在大肠杆菌中的可溶性表达,为检测方法的建立和亚单位疫苗的研发奠定基础。 展开更多
关键词 新型鹅细小病毒 分子伴侣 可溶性表达 原核表达
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一种基于鸽源鹦鹉热衣原体MOMP蛋白的抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量：1
3
作者 路文彬 庞洪泽 +3 位作者 刘琳敏 田甜 张武超 袁万哲 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1363-1370,共8页
为建立一种检测鸽源鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)抗体的间接ELISA方法,将Cps的主要外膜蛋白(Major outer membrane protein,MOMP)基因分别克隆至2个原核表达载体,获得了2种带有不同标签的重组蛋白MOMP-GST和MOMP-His,利用MOMP-... 为建立一种检测鸽源鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)抗体的间接ELISA方法,将Cps的主要外膜蛋白(Major outer membrane protein,MOMP)基因分别克隆至2个原核表达载体,获得了2种带有不同标签的重组蛋白MOMP-GST和MOMP-His,利用MOMP-His重组蛋白免疫制备多克隆抗体,MOMPGST重组蛋白经抗MOMP的家兔源多抗验证后作为包被抗原,经条件优化,建立基于鸽源Cps的MOMP蛋白的间接ELISA方法。结果显示,成功表达了大小约为51 ku的MOMP-His和65 ku的MOMP-GST重组蛋白,制备的抗MOMP家兔源多克隆抗体效价在1∶409 600以上。该ELISA方法的最适条件为:抗原包被质量浓度为0.5 mg/L,抗原包被液为CBS,抗原包被条件为37℃1 h;封闭液为50 mL/L FBS,封闭条件为37℃2 h;血清稀释度为1∶200,血清孵育时间为30 min;酶标二抗稀释度为1∶8 000,酶标二抗孵育时间为1 h;底物反应时间为5 min。特异性试验结果显示,该方法仅能检测鸽源Cps阳性血清,与鸽Ⅰ型副黏病毒等其他常见鸽病毒阳性血清均无交叉反应。敏感性试验结果显示,当鸽阳性血清稀释到1∶1 600时检测结果仍为阳性,且批内批间的重复变异系数均在6%以内。结果表明,本研究建立的检测Cps的MOMP抗体的间接ELISA方法特异性强、敏感性高和重复性好,且可用于鸽Cps疫苗免疫抗体水平检测与流行病学调查。 展开更多
关键词 鹦鹉热衣原体 MOMP蛋白 间接ELISA
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新型鹅细小病毒VP2蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备 被引量：1
4
作者 刘琳敏 田甜 +5 位作者 郝雪飘 庞洪泽 雷白时 赵款 张武超 袁万哲 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1145-1151,共7页
为探究造成鸭短喙与侏儒综合征的病原即新型鹅细小病毒(NGPV) VP2蛋白的生物学功能,根据NGPV SD株序列,扩增VP2基因克隆至原核表达载体pET-32a,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白。将纯化的蛋白按照标准程序免疫7周龄BALB/c小鼠制... 为探究造成鸭短喙与侏儒综合征的病原即新型鹅细小病毒(NGPV) VP2蛋白的生物学功能,根据NGPV SD株序列,扩增VP2基因克隆至原核表达载体pET-32a,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白。将纯化的蛋白按照标准程序免疫7周龄BALB/c小鼠制备多克隆抗体。结果显示,NGPV VP2基因全长为2 199 bp;通过大肠杆菌BL21(DE3)成功表达出大小约为83 ku的His-VP2融合蛋白。ELISA结果显示,制备的多克隆抗体效价为1∶204 800。Western-blot结果显示,制备的多克隆抗体能特异性识别VP2蛋白。间接免疫荧光试验表明,制备的多克隆抗体能够特异性识别受感染细胞中的NGPV和鹅细小病毒。综上所述,本研究成功表达并纯化了VP2蛋白,并成功制备了效价高反应性好的多克隆抗体,为进一步探究NGPV VP2蛋白生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭短喙与侏儒综合征 新型鹅细小病毒 多克隆抗体 VP2
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