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核酸适配体在肿瘤靶向治疗中应用的研究进展 被引量:14
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作者 珍宝 石依倩 +2 位作者 陈长仁 段林花 王薪茹 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第14期1267-1279,共13页
核酸适配体是一类能够特异性地和靶物质结合的寡核苷酸序列.它可作用于蛋白质、金属离子、小分子化合物、细胞膜表面受体等靶标.其结合能力可与抗体相当甚至更强,同时具有低免疫原性、稳定性好等特点,并可结合各种药物及载体构建多元复... 核酸适配体是一类能够特异性地和靶物质结合的寡核苷酸序列.它可作用于蛋白质、金属离子、小分子化合物、细胞膜表面受体等靶标.其结合能力可与抗体相当甚至更强,同时具有低免疫原性、稳定性好等特点,并可结合各种药物及载体构建多元复合靶向给药系统用于肿瘤靶向治疗,在生物医学领域引起了极大的关注.本文综述了核酸适配体结合化疗药物,或以聚合物、无机纳米粒子(碳纳米管、氧化石墨烯、金纳米粒、介孔二氧化硅、量子点和磁性纳米粒)、树枝状分子、脂质体、胶束等纳米粒子为载体的药物传递系统用于肿瘤靶向治疗的最新研究进展. 展开更多
关键词 核酸适配体 药物传递系统 靶向给药 肿瘤靶向治疗 纳米粒子
原文传递
制药设备与车间工艺设计课程教学改革与实践 被引量:11
2
作者 艳飞 珍宝 +2 位作者 彭东明 李玲 阳华 《广州化工》 CAS 2014年第5期128-130,共3页
《制药设备与车间工艺设计》是制药工程专业的一门核心课程。本文作者从教学内容、教学理念、教学手段、实践教学体系等方面进行改革研究,并在实践中不断加以优化与完善,构建出新的课程教学体系。旨在为制药工程专业的专业课程教学改革... 《制药设备与车间工艺设计》是制药工程专业的一门核心课程。本文作者从教学内容、教学理念、教学手段、实践教学体系等方面进行改革研究,并在实践中不断加以优化与完善,构建出新的课程教学体系。旨在为制药工程专业的专业课程教学改革提供一些新的思路;并提高学生分析问题、解决问题的综合素质和创新能力。 展开更多
关键词 制药设备与车间工艺设计 教学体系 改革与实践
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制药工程专业课程思政建设研究 被引量:10
3
作者 艳飞 阳华 +3 位作者 王艳 王珊 向皞月 珍宝 《药学教育》 2021年第5期33-36,共4页
围绕“新工科”背景,文章对制药工程专业教育与思政教育有机融合的教学开展系统研究,通过课程思政教学目标、教学内容、教学案例、教学方法的设计与实践,构建专业课程思政教育新模式;通过培训与交流,不断提升教师队伍的思政能力;构建激... 围绕“新工科”背景,文章对制药工程专业教育与思政教育有机融合的教学开展系统研究,通过课程思政教学目标、教学内容、教学案例、教学方法的设计与实践,构建专业课程思政教育新模式;通过培训与交流,不断提升教师队伍的思政能力;构建激励机制和考评机制,增强实施课程思政的责任感。将显性教育和隐性教育融为一体,帮助专业学生塑造正确的世界观、价值观,为工科专业课程思政的实施提供一定的借鉴与参考。 展开更多
关键词 “新工科” 制药工程专业 课程思政 课程改革探索
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启发式教学与形成性评价相结合在药剂学教学中的实践与研究 被引量:8
4
作者 珍宝 艳飞 《广东化工》 CAS 2015年第19期175-175,167,共2页
结合启发式教学与形成性评价在药剂学教学中的实践,从激发学生的学习兴趣、提高学习积极性、提高学生效果、拓展学生思维为出发点,浅析了启发式教学与形成性评价结合在药剂学教学中的应用。其目的在于提高药剂学的教学质量,培养出合格... 结合启发式教学与形成性评价在药剂学教学中的实践,从激发学生的学习兴趣、提高学习积极性、提高学生效果、拓展学生思维为出发点,浅析了启发式教学与形成性评价结合在药剂学教学中的应用。其目的在于提高药剂学的教学质量,培养出合格的专业人才。 展开更多
关键词 药剂学 启发式教学 形成性评价 教学质量
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介孔二氧化硅纳米粒介导的药物传递系统及其生物安全性的研究进展 被引量:8
5
作者 肖正林 珍宝 +1 位作者 王婷 丁劲松 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期81-87,共7页
介孔二氧化硅纳米粒(MSNs)是一种新型无机纳米材料,因具有独特的网状孔道结构、巨大的比表面积、孔径分布窄且可调节及易于表面修饰等特性,已用于药物控释系统的研究。MSNs载体的药物负载量与其介孔容积相关,表面经修饰后可实现药物的... 介孔二氧化硅纳米粒(MSNs)是一种新型无机纳米材料,因具有独特的网状孔道结构、巨大的比表面积、孔径分布窄且可调节及易于表面修饰等特性,已用于药物控释系统的研究。MSNs载体的药物负载量与其介孔容积相关,表面经修饰后可实现药物的控释和靶向传递。然而,随着MSNs载体与人体接触的机会和时间日益增加,其安全性也受到广泛关注。本文综合近10年来国内外的相关文献,归纳了MSNs在递药系统中的应用,并分析了其生物安全性的影响因素。 展开更多
关键词 介孔二氧化硅 载体 控释 靶向传递 生物安全性 综述
原文传递
红莲外皮原花青素的纯化与分析 被引量:7
6
作者 李绮丽 彭芳刚 +2 位作者 德明 珍宝 吴卫国 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第3期106-110,共5页
原花青素作为多酚的一大类广泛存在于天然植物中。红莲外皮原花青素粗提取物采用大孔树脂AB-8和聚酰胺柱进行两次纯化。纯化物通过红外光谱(infrared spectrum,IR)和电子喷雾离子化质谱(electrospray ionization-mass spectroscopy,ESI-... 原花青素作为多酚的一大类广泛存在于天然植物中。红莲外皮原花青素粗提取物采用大孔树脂AB-8和聚酰胺柱进行两次纯化。纯化物通过红外光谱(infrared spectrum,IR)和电子喷雾离子化质谱(electrospray ionization-mass spectroscopy,ESI-MS)对成分进行分析,并通过反相液相色谱-质谱(reverse phase high-performance liquid chromatography-mass spectroscopy,RP-HPLC-MS/MS)联用对组分进行分离鉴定。结果表明:纯化物中有9种原花青素单体和低聚体,其中包括儿茶素和表儿茶素(m/z 289)、棓儿茶素(m/z 305),4种原花青定二聚体的同分异构体(m/z 577)和2种原花青定四聚体的同分异构体(m/z 1 153)。 展开更多
关键词 莲子 原花青素 红外光谱 液质联用
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盐酸头孢吡肟的合成 被引量:5
7
作者 彭东明 王晓红 +4 位作者 艳飞 尹伟成 珍宝 张航 张姗姗 《中南大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第7期2405-2411,共7页
以7-氨基头孢烷酸(7-ACA)为原料,二氯甲烷和环己烷为溶剂,三甲基氯硅烷(TMSCl)为保护剂,与N-甲基吡咯烷(NMP)和三甲基碘硅烷(TMSI)制成的季铵盐中间体反应,脱保护后成盐得中间体7-氨基-3-(1-甲基-1-四氢吡咯)甲基-3-头孢-4-羧酸盐酸盐(7... 以7-氨基头孢烷酸(7-ACA)为原料,二氯甲烷和环己烷为溶剂,三甲基氯硅烷(TMSCl)为保护剂,与N-甲基吡咯烷(NMP)和三甲基碘硅烷(TMSI)制成的季铵盐中间体反应,脱保护后成盐得中间体7-氨基-3-(1-甲基-1-四氢吡咯)甲基-3-头孢-4-羧酸盐酸盐(7-MPCA),再与苯并噻唑硫醇活性酯反应,合成目标产物盐酸头孢吡肟。研究硅烷化反应、碘代反应和成盐反应的主要影响因素,进行工艺参数优化。采用红外光谱、元素分析、核磁共振谱和质谱对产物盐酸头孢吡肟进行结构表征。研究结果表明:该工艺原材料易得,反应条件温和,且操作简单,以7-ACA的质量计盐酸头孢吡肟的总收率为74.6%。 展开更多
关键词 7-氨基头孢烷酸 盐酸头孢吡肟 药物合成 抗生素
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药学类拔尖创新型人才培养模式的探索 被引量:1
8
作者 昭前 龚涛 +2 位作者 曾文彬 珍宝 艳飞 《药学教育》 2023年第6期11-14,共4页
医药行业技术、经济和社会国际化的发展,对药学类人才的培养提出了新要求。基于高校“双一流”建设背景,探索药学类拔尖创新型人才的培养模式。通过优化课程体系设置、深化教学方式改革、深入课程思政建设、搭建创新创业人才培养平台和... 医药行业技术、经济和社会国际化的发展,对药学类人才的培养提出了新要求。基于高校“双一流”建设背景,探索药学类拔尖创新型人才的培养模式。通过优化课程体系设置、深化教学方式改革、深入课程思政建设、搭建创新创业人才培养平台和强化校企合作等举措,构建以创新创业能力为核心、领军型药学类专业人才培养的新模式,以期为药学类人才培养提供一定借鉴。 展开更多
关键词 药学 拔尖创新型 人才培养 改革探索
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面向“双一流”的生物医药类研究生创新人才培养 被引量:3
9
作者 珍宝 曾文彬 艳飞 《广东化工》 CAS 2021年第7期227-228,共2页
"双一流"建设方案中将拔尖创新人才培养作为一项重要的建设任务,人才培养的基石是培养模式改革。拔尖人才培养必须注重创新思维和实践能力,面向学科前沿、面向国际一流。本研究着重从研究生培养方案、课程教学大纲、教学内容... "双一流"建设方案中将拔尖创新人才培养作为一项重要的建设任务,人才培养的基石是培养模式改革。拔尖人才培养必须注重创新思维和实践能力,面向学科前沿、面向国际一流。本研究着重从研究生培养方案、课程教学大纲、教学内容、教学方法及手段、考核方式、培养质量控制、校外平台与师资队伍建设等多方面进行教学改革与实践。探索药学、制药工程等生物医药类交叉学科如何围绕"双一流"建设,培养创新型研究生的新思路和新方法。 展开更多
关键词 “双一流”建设 创新人才培养 制药工程 药学
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功能化多壁碳纳米管对L02细胞的作用 被引量:1
10
作者 珍宝 周波 +4 位作者 王海燕 张海玲 兰霞 朱敦皖 冷希岗 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期449-455,共7页
目的探讨羧基化及羟基化多壁碳纳米管对肝细胞的毒性及相关机制。方法利用透射电镜、扫描电镜、X-射线光电子能谱仪对原始多壁碳纳米管、羧基化多壁碳纳米管和羟基化多壁碳纳米管进行表征。将浓度分别为12.5、25、50、100、200μg/ml的... 目的探讨羧基化及羟基化多壁碳纳米管对肝细胞的毒性及相关机制。方法利用透射电镜、扫描电镜、X-射线光电子能谱仪对原始多壁碳纳米管、羧基化多壁碳纳米管和羟基化多壁碳纳米管进行表征。将浓度分别为12.5、25、50、100、200μg/ml的3种碳纳米管分别与人正常肝细胞系L02细胞共育24、48、72h。采用水溶性四氮唑法进行细胞毒性评价,用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐法检测细胞内活性氧(ROS)的生成。结果透射电镜显示3种碳纳米管平均管径均为10~20nm,长度均为10~30μm;扫描电镜显示碳纳米管形貌相似;X-射线光电子能谱仪分析显示功能化多壁碳纳米管分别在289和286ev处特征峰峰值明显增高。水溶性四氮唑法检测显示碳纳米管的细胞毒性作用呈现浓度依赖性并与作用时间具有一定关系。羧基化多壁碳纳米管比原始多壁碳纳米管及羟基化多壁碳纳米管的细胞毒性小。诱导细胞内ROS升高的次序为原始多壁碳纳米管>羧基化多壁碳纳米管>羟基化多壁碳纳米管;碳纳米管诱导细胞内活性氧含量与共育时间有关:碳纳米管与细胞作用36h以内时,细胞内ROS含量随时间逐渐增加,36h后细胞内ROS含量随作用时间延长逐渐降低。结论羧基化多壁碳纳米管比原始多壁碳纳米管在低浓度时具有更好的生物相容性,羟基化多壁碳纳米管比原始多壁碳纳米管在48h后表现出稍好的生物相容性。不同化学表面性质的碳纳米管对细胞活力的影响不同,其与细胞的相互作用可能存在不同机制。 展开更多
关键词 多壁碳纳米管 化学修饰 细胞毒性
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双顺反子表达人组织因子途径抑制因子和绿色荧光蛋白重组病毒的构建及其在内皮祖细胞中表达 被引量:1
11
作者 王海燕 宋丽萍 +4 位作者 朱敦皖 周波 珍宝 楼莎 冷希岗 《国际生物医学工程杂志》 CAS 北大核心 2010年第2期65-69,I0001,共6页
目的 构建双顺反子表达人组织因子途径抑制因子(TFPI)与绿色荧光蛋白(GFP)的逆转录病毒表达载体pMSCV-TFPI-IRES-GFP,并观察其在大鼠内皮祖细胞(EPCs)中的表达,为进一步研究TEPI在预防血管再狭窄中的作用奠定基础.方法 将人全长TF... 目的 构建双顺反子表达人组织因子途径抑制因子(TFPI)与绿色荧光蛋白(GFP)的逆转录病毒表达载体pMSCV-TFPI-IRES-GFP,并观察其在大鼠内皮祖细胞(EPCs)中的表达,为进一步研究TEPI在预防血管再狭窄中的作用奠定基础.方法 将人全长TFPI cDNA亚克隆到逆转录病毒载体pMSCV-IRES-GFP中,获得定向插入重组子pMSCV-TFPI-IRES-GFP,采用酶切图谱分析和测序进行鉴定.用磷酸钙法经293T细胞包装,收集病毒上清,感染EPCs.用荧光显微镜和流式细胞术观察感染后细胞内GFP表达情况.RT-PCR检测EPCs中TFPI mRNA的表达水平,ELISA法检测EPCs细胞培养上清中TFPI蛋白的含量.结果 经限制性内切酶酶切图谱分析证实重组病毒中含有人TFPI的cDNA片段,基因测序结果与Genebank中TFPI cDNA序列相符.荧光显微镜观察及流式细胞仪检测显示,90%以上的感染细胞中存在GFP表达;RT-PCR分析显示,重组病毒感染细胞中TFPI mRNA水平明显增高;ELISA法检测发现,感染重组病毒的EPCs培养上清中有TFPI蛋白表达.结论 本研究成功构建重组pMSCV-TFPI-IRES-GFP真核表达载体,其在EPCs中能够同时表达TFPI和GFP,为TFPI基因结合血管内皮祖细胞进行血管再狭窄防治研究的进一步深入开展奠定了良好实验基础. 展开更多
关键词 内皮祖细胞 逆转录病毒载体 组织因子途径抑制因子
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金纳米粒在肿瘤治疗中应用的研究进展 被引量:1
12
作者 赵传通 珍宝 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期324-329,共6页
金纳米粒(AuNPs)具有独特的理化性质,包括良好的稳定性﹑生物相容性﹑比表面积大和易于表面修饰,可作为药物、基因和蛋白质等的递送载体,AuNPs还具有良好的光热效应和放射增敏功能,使其在肿瘤的光热治疗和放疗中具有广阔的应用前景。本... 金纳米粒(AuNPs)具有独特的理化性质,包括良好的稳定性﹑生物相容性﹑比表面积大和易于表面修饰,可作为药物、基因和蛋白质等的递送载体,AuNPs还具有良好的光热效应和放射增敏功能,使其在肿瘤的光热治疗和放疗中具有广阔的应用前景。本文总结了AuNPs递药系统的构建、细胞摄取、药物释放及其在肿瘤治疗中应用的最新进展。 展开更多
关键词 金纳米粒 肿瘤靶向递送 基因治疗 光热治疗 光动力治疗 放射治疗
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基于核酸适配体和有机纳米材料的肿瘤靶向递药系统研究进展 被引量:2
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作者 张逸敏 蔡馨梅 +11 位作者 周姗 程俊云 王莹 杨璐 宋南佳 王梦娜 李媛媛 炫均 李俏吟 孙泽恩 珍宝 殷刚 《国际生物医学工程杂志》 CAS 2018年第1期78-84,89,共8页
核酸适配体是能与靶物质特异性结合的DNA或RNA片段,由于其具有优良的特性,如结合力强、特异性高、物理尺寸小、可化学合成与修饰、生物相容性好及免疫原性低等特点,在生物医学研究领域显示出广阔的应用潜力。核酸适配体还可与细胞膜... 核酸适配体是能与靶物质特异性结合的DNA或RNA片段,由于其具有优良的特性,如结合力强、特异性高、物理尺寸小、可化学合成与修饰、生物相容性好及免疫原性低等特点,在生物医学研究领域显示出广阔的应用潜力。核酸适配体还可与细胞膜表面的受体特异性结合,并能介导纳米粒子内吞进入细胞,使其成为理想的药物靶向配体。有机纳米材料由于其良好的生物相容性、可降解性等特点,从而在纳米递药系统中具有较好的应用价值。对近3年来基于核酸适配体和有机纳米材料递药系统的最新研究进展作简要介绍。 展开更多
关键词 核酸适配体 有机纳米材料 靶向递药系统
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核酸适配体介导无机纳米递药系统在肿瘤靶向治疗中的研究进展
14
作者 贺芬 艳飞 珍宝 《生命科学仪器》 2017年第3期19-22,共4页
核酸适配体和靶物质具有良好的亲和力、高特异性等特性,在药物靶向递送系统研究领域具有很大的应用价值。到目前为止,不同种类的基于核酸适配体药物系统已被报道。本综述总结了核酸适配体介导无机纳米材料在靶向抗肿瘤的最新研究进展,... 核酸适配体和靶物质具有良好的亲和力、高特异性等特性,在药物靶向递送系统研究领域具有很大的应用价值。到目前为止,不同种类的基于核酸适配体药物系统已被报道。本综述总结了核酸适配体介导无机纳米材料在靶向抗肿瘤的最新研究进展,并对其存在的问题和未来的研究方向进行了展望。 展开更多
关键词 核酸适配体 无机纳米材料 递药系统 肿瘤靶向治疗
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姜黄素二聚体载药纳米粒的制备与性能研究 被引量:1
15
作者 文纳川 珍宝 +2 位作者 杜沛芳 侯姣姣 艳飞 《中南大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第9期2389-2395,共7页
为了提高抗肿瘤药物姜黄素载药效率,以姜黄素为单元合成新型姜黄素二聚体(CUR2-TK),并以聚乙二醇−聚乳酸羟基乙酸共聚物(PEG-PLGA)为载体,通过单乳液溶剂挥发法,制备姜黄素二聚体缓释纳米粒,研究不同药物CUR2-TK与聚合物PEG-PLGA的质量... 为了提高抗肿瘤药物姜黄素载药效率,以姜黄素为单元合成新型姜黄素二聚体(CUR2-TK),并以聚乙二醇−聚乳酸羟基乙酸共聚物(PEG-PLGA)为载体,通过单乳液溶剂挥发法,制备姜黄素二聚体缓释纳米粒,研究不同药物CUR2-TK与聚合物PEG-PLGA的质量比(m(CUR2-TK):m(PEG-PLGA))等对纳米粒性能的影响。研究结果表明:通过姜黄素二聚体构建的载药纳米粒具备极高的载药效率,在m(CUR2-TK):m(PEG-PLGA)为3:1时,载药量和包封率分别达到(61.9±2.9)%和(80.1±3.8)%,且纳米粒形貌规整均一,粒径可控在50~100 nm之间,释药时间达4 d以上。 展开更多
关键词 姜黄素二聚体 聚乙二醇聚乳酸羟基乙酸 纳米粒 药物传递体系
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应用纳米与分子探针技术对IgG抗原水平的检测
16
作者 周波 王海燕 +3 位作者 楼莎 珍宝 朱敦皖 冷希岗 《科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第22期38-43,共6页
人们研究并逐步认识了纳米金与DNA等相互作用的特性和条件,并对以纳米金为基础发展起来的生物条码技术进行了更加深入的研究与应用。基于纳米金的生物条码及其相关技术研究与应用日益广泛,并不断有创新,本研究应用纳米技术并结合分子探... 人们研究并逐步认识了纳米金与DNA等相互作用的特性和条件,并对以纳米金为基础发展起来的生物条码技术进行了更加深入的研究与应用。基于纳米金的生物条码及其相关技术研究与应用日益广泛,并不断有创新,本研究应用纳米技术并结合分子探针技术对低浓度的抗原水平进行检测。该生物条码技术常被用于检测某些蛋白、核酸、细胞或细胞因子的水平,并由此形成了不同于PCR、ELISA但仍具有高灵敏度特性的检测方法。通过磁性微球标记单抗以捕获、富集待测抗原,修饰多抗与亲和素的纳米金并结合分子信标探针起到信号扩增的作用。通过二硫键(—S—S—)分子信标探针茎部3’端的碱基T连接一生物素分子。待测抗原可将磁球与纳米金系统进行连接,然后应用二硫苏糖醇(DTT)将连接于纳米金上的MB切割下来,并与其环部完全互补配对的靶序列杂交后测定荧光强度。荧光强度与待测抗原水平(含量)相关。 展开更多
关键词 纳米技术 分子探针 磁性微球 纳米金 分子信标 IgG抗原 亲和素 生物素
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强塑性变形下Cu-Al合金材料的结构及性能分析
17
作者 赵天宇 于丽娜 珍宝 《世界有色金属》 2016年第10期179-179,181,共2页
本文将主要探讨和分析现在的强塑性变形下的Cu-Al合金材料的组成结构和其相关的性能。通过对不同方式塑性法合成的Cu-Al合金所具备的结构和其可以做到的拉伸性能进行对比研究。通过上述的研究结果表明在Cu-Al合金中其存在的错层将是影... 本文将主要探讨和分析现在的强塑性变形下的Cu-Al合金材料的组成结构和其相关的性能。通过对不同方式塑性法合成的Cu-Al合金所具备的结构和其可以做到的拉伸性能进行对比研究。通过上述的研究结果表明在Cu-Al合金中其存在的错层将是影响其相应特性的决定性因素。错层发生改变的时候其合金内的平均晶粒的大小和其所具备的拉伸性能也会随着改变。 展开更多
关键词 强塑性变形 CU-AL合金 错层
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熊去氧胆酸小檗红碱酯的制备
18
作者 龙硕 珍宝 +3 位作者 彭东明 晓钦 蒋婷 艳飞 《中南大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第12期3389-3395,共7页
采用桥连酯化法,对小檗碱进行熊去氧胆酸酯化修饰,合成新型化合物熊去氧胆酸小檗红碱酯,以提高小檗碱的降脂活性。首先以熊去氧胆酸为原料,1,2-二溴乙烷为桥连试剂,合成熊去氧胆酸-β-溴乙酯,再将其与小檗碱高温裂解后的产物小檗红碱反... 采用桥连酯化法,对小檗碱进行熊去氧胆酸酯化修饰,合成新型化合物熊去氧胆酸小檗红碱酯,以提高小檗碱的降脂活性。首先以熊去氧胆酸为原料,1,2-二溴乙烷为桥连试剂,合成熊去氧胆酸-β-溴乙酯,再将其与小檗碱高温裂解后的产物小檗红碱反应,合成目标产物;探究反应温度、反应时间、投料比和反应溶剂等参数;对化合物进行核磁共振谱和质谱表征分析。研究结果表明:酯化反应最优条件是温度为25℃,以二甲基甲酰胺(DMF)为溶剂、K2CO3为缚酸剂;在醚化反应中,当温度为60℃,以DMF为溶剂、KI为催化剂时,收率最大,总收率达53.0%。 展开更多
关键词 小檗红碱 熊去氧胆酸 酯化 亲核取代
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课堂练习题的优化组合
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作者 珍宝 《青海教育》 1997年第5期45-46,共2页
关键词 课堂练习题 分数应用题 解题方法 转化性 方体 优化组合 练习题设计 已知条件 由简到繁 教学效率
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人ARF4慢病毒表达载体的构建及其在卵巢癌细胞系SKOV3中的稳定表达
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作者 张逸敏 吴启惠 +8 位作者 任晓磊 曙光 王晶 程俊云 王莹 蔡馨梅 周姗 珍宝 殷刚 《国际生物医学工程杂志》 CAS 2017年第6期410-415,420,共7页
目的 建立稳定表达人ADP核糖基化因子-4(ARF4)的卵巢癌SKVO3细胞系.方法 构建pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro/ARF4真核表达载体;经测序验证后转染SKOV3细胞,运用实时定量PCR验证ARF4 mRNA的表达量;再将验证后的重组质粒与慢病毒包装质粒共转染HE... 目的 建立稳定表达人ADP核糖基化因子-4(ARF4)的卵巢癌SKVO3细胞系.方法 构建pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro/ARF4真核表达载体;经测序验证后转染SKOV3细胞,运用实时定量PCR验证ARF4 mRNA的表达量;再将验证后的重组质粒与慢病毒包装质粒共转染HEK-293T细胞进行包装,收集重组慢病毒颗粒LV-ARF4,感染SKOV3细胞后用嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞系;最后用实时定量PCR与Western Blot测定稳定表达的细胞系内ARF4的表达情况.结果 成功构建出pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro/ARF4真核表达载体;该载体在SKOV3细胞中可明显上调ARF4 mRNA的表达,并在HEK-293T细胞中成功包装成重组慢病毒颗粒.与对照组相比,实验组SKOV3细胞感染ARF4慢病毒载体后ARF4 mRNA及蛋白的相对表达水平均明显升高,差异均具有统计学意义(均P<0.001).结论 成功构建了重组质粒pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro/ARF4及慢病毒载体LV-ARF4,并建立了ARF4稳定转染的SKOV3细胞系,为进一步研究ARF4在卵巢癌中的生物学功能奠定了基础. 展开更多
关键词 基因克隆 慢病毒载体 ADP核糖基化因子-4 SKOV3细胞
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