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二氢嘧啶酶的分离纯化与性质研究 被引量：4
1
作者 黄红辉 刘猛六 胡卓逸 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期389-392,共4页
二氢嘧啶酶产生菌Pseudomonasputida 980 1经过超声波粉碎及分级盐析 ,DEAE 纤维素和羟基磷灰石柱层析 ,SephadexG 2 0 0凝胶过滤得到纯化 2 49倍的酶液。SDS PAGE显示为单带 ,单体分子量为 380 0 0 ,SephadexG 2 0 0凝胶过滤测得分子量... 二氢嘧啶酶产生菌Pseudomonasputida 980 1经过超声波粉碎及分级盐析 ,DEAE 纤维素和羟基磷灰石柱层析 ,SephadexG 2 0 0凝胶过滤得到纯化 2 49倍的酶液。SDS PAGE显示为单带 ,单体分子量为 380 0 0 ,SephadexG 2 0 0凝胶过滤测得分子量为 15 6 0 0 0。二氢嘧啶酶对苯海因的km 为 2 .39× 10 -2 mol/L ,其最适 pH和最适温度分别是 8.5～ 8.7和 34℃～ 35℃。 1mmol/L的EDTA和 β 巯基乙醇对酶活力有强烈的抑制作用。 展开更多
关键词 二氢嘧啶酶 苯海因 分离 纯化
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微孔比色法在猪胰腺PLA_2制备中的应用 被引量：5
2
作者 刘猛六 胡卓逸 徐龙川 《生物化学杂志》 CSCD 1997年第5期570-575,共6页
微孔比色法采用合成的磷脂类似物２－硫代十六酰乙基磷酸胆碱作底物，在多孔聚苯乙烯板的小孔中反应，并用酶联免疫检测器连续测定和记录吸收值．同时应用此法及滴定法检测酶活力，从猪胰腺中制备了一种分子量低（１４．３ｋＤ），对热... 微孔比色法采用合成的磷脂类似物２－硫代十六酰乙基磷酸胆碱作底物，在多孔聚苯乙烯板的小孔中反应，并用酶联免疫检测器连续测定和记录吸收值．同时应用此法及滴定法检测酶活力，从猪胰腺中制备了一种分子量低（１４．３ｋＤ），对热、酸稳定，活性依赖Ｃａ２＋的ＰＬＡ２．两种方法检测结果具有可比性，而微孔比色法同时可测多个样品，有节约样品，灵敏度较高等优点．微孔比色法特别适用于大量的样品测定，如拮抗剂筛选、临床样品及制备酶时层析级分的检测等． 展开更多
关键词 磷脂酶A2 胰腺 微孔比色法 制备
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人精子tPA和PAI-1的测定及精子上tPA的定位研究 被引量：3
3
作者 倪黎刚 郑均 +3 位作者 黄宇烽 徐建平 刘猛六 胡卓逸 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期22-24,共3页
目的 :人精子上组织型纤溶酶原原激活因子 (tPA)的分布及精子中tPA、纤溶酶激活物抑制因子 (PAI 1)活性研究。　方法 :应用底物显色法测定 6 1例人精子中tPA及其PAI 1的活性 ,其中正常对照组 2 0例 (已婚生育男子 ,经 2次精液分析正常者... 目的 :人精子上组织型纤溶酶原原激活因子 (tPA)的分布及精子中tPA、纤溶酶激活物抑制因子 (PAI 1)活性研究。　方法 :应用底物显色法测定 6 1例人精子中tPA及其PAI 1的活性 ,其中正常对照组 2 0例 (已婚生育男子 ,经 2次精液分析正常者 ) ,少弱畸精症组 41例 ;用免疫组化法进行精子表面膜上tPA定位分析。　结果 :正常对照组精子中tPA和PAI 1的活性分别为 (0 2 4± 0 0 4)IU/ 10 6精子和 (0 2 3± 0 0 3)AU/ 10 6精子 ,少弱畸精症组的tPA和PAI 1活性分别为 (0 12± 0 0 3)IU/ 10 6精子和 (0 35± 0 0 9)AU/ 10 6精子 ,经分析二者之间有极显著差异 (P <0 0 1) ;tPA主要分布在精子的顶体膜、赤道板、颈部和尾部。　结论 :正常健康人精子中的tPA和PAI 1活性有别于弱精症者 ,提示精子上的tPA和PAI 1活性可能与精子活力、精子形态以及精子数有关 ;精子的顶体膜、赤道板、颈部及尾部存在着tPA ,推测其与精子运行、获能等有关。 展开更多
关键词 精子 TPA PAI-1 测定
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棉酚抗生育新机制——对磷脂酶A_2活力的抑制作用(英文) 被引量：2
4
作者 刘猛六 徐卉平 胡卓逸 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期442-446,共5页
采用微孔比色法及荧光分析法 ,研究抗男性生育化合物棉酚与猪胰腺磷脂酶A2 (phospho lipaseA2 ,PLA2 ,EC3 1 1 4 )温育并透析前后对酶活力及荧光的影响 .结果表明 ,棉酚与PLA2 不可逆地结合明显地降低了PLA2 活力及荧光强度 .棉酚对酶... 采用微孔比色法及荧光分析法 ,研究抗男性生育化合物棉酚与猪胰腺磷脂酶A2 (phospho lipaseA2 ,PLA2 ,EC3 1 1 4 )温育并透析前后对酶活力及荧光的影响 .结果表明 ,棉酚与PLA2 不可逆地结合明显地降低了PLA2 活力及荧光强度 .棉酚对酶活力抑制作用的IC50 为 35μmol L ;当其浓度达到 80 μmol L时 ,能够完全抑制PLA2 ( 4 11μmol L)对合成底物 2 硫代十六酰乙基磷酸胆碱(HEPC ,0 .2 5mmol L)的水解作用 .PLA2 的最大激发波长与发射波长分别为 2 75nm ,34 3nm ,荧光强度与酶浓度呈良好的线性关系 .棉酚对PLA2 的荧光具有较强的淬灭作用 .由于PLA2 与男性生育密切相关 ,棉酚对PLA2 展开更多
关键词 棉酚 磷脂酶A 磷脂酶A2拮抗剂 微孔比色法 荧光分析法 抗生育作用 机制
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生物活性蛋白钙调素与磷脂酶A_2的高效毛细管电泳纯度分析 被引量：1
5
作者 范国荣 刘猛六 +2 位作者 张正行 胡卓逸 安登魁 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第5期292-295,共4页
采用高效毛细管电泳对猪脑中提取的钙调素与猪胰腺中提取的磷脂酶Ａ２进行分离分析。以Ｂｉｏ－Ｒａｄ２０ｃｍ×２５μｍｃｏａｔｅｄ石英毛细管为分离柱，ＵＶ２００ｎｍ为检测波长，选择０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液（ｐＨ３... 采用高效毛细管电泳对猪脑中提取的钙调素与猪胰腺中提取的磷脂酶Ａ２进行分离分析。以Ｂｉｏ－Ｒａｄ２０ｃｍ×２５μｍｃｏａｔｅｄ石英毛细管为分离柱，ＵＶ２００ｎｍ为检测波长，选择０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液（ｐＨ３．５）为钙调素电泳分离缓冲液体系，０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液（ｐＨ２．５，内含０．１％ＨＰＭＣ）为磷脂酶Ａ２电泳分离缓冲液体系，对多步分离纯化获得的钙调素与磷脂酶Ａ２进行纯度分析，同时为进一步研究钙调素与磷脂酶Ａ２的生物活性提供了有效的检测手段。 展开更多
关键词 钙调素 磷脂酶A2 高效毛细管电泳
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抗人精浆磷脂酶A2单克隆抗体细胞株的建立与鉴定
6
作者 王书奎 黄宇烽 +3 位作者 夏欣一 李保仝 王自正 刘猛六 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2002年第3期173-177,共5页
目的 :制备并鉴定人精浆磷脂酶A2 (PLA2 )的单克隆抗体 (McAb)。　方法 :通过PEG沉淀、SephacrylS 30 0柱层析、DEAE SephadexA 2 5柱层析及羟基磷灰石 (HA)柱层析分离纯化人精浆中的PLA2 ,并以SDS PAGE鉴定其分子量及蛋白浓度 ;免疫BAL... 目的 :制备并鉴定人精浆磷脂酶A2 (PLA2 )的单克隆抗体 (McAb)。　方法 :通过PEG沉淀、SephacrylS 30 0柱层析、DEAE SephadexA 2 5柱层析及羟基磷灰石 (HA)柱层析分离纯化人精浆中的PLA2 ,并以SDS PAGE鉴定其分子量及蛋白浓度 ;免疫BALB/C小鼠制备抗PLA2McAb ,通过ELISA技术、Western Blot方法鉴定其敏感性及特异性。　结果 :从精浆中提纯的PLA2的相对分子质量 (Mr)约为 3490 0 ,纯化倍数约为 2 4 5倍。制备的McAb经鼠Ig亚类分析为IgMKappa型 ,敏感性可达 1∶5 6～ 1∶5 8,Western Blot证明其特异结合的抗原即为PLA2蛋白酶。结论 :Mr为 3490 0的PLA2可能为一种新型PLA2。 展开更多
关键词 磷脂酶A2 纯化 单克隆抗体 鉴定 人精浆
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RP-HPLC法测定人精液中维生素E的含量
7
作者 刘猛六 王雷 +4 位作者 戴秀娟 胡卓逸 商学军 徐建平 黄宇烽 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期15-17,共3页
目的 :建立测定人精液维生素E含量的反相高效液相色谱法。　方法 :用正己烷萃取人精液维生素E ,氮气吹干 ,以甲醇定容 ;以维生素E作外标 ,用紫外检测仪检测 ,波长为 2 0 5nm。　结果 :线性关系为y =0 .30 2 9+0 .0 0 730x,r=0 .9994,回... 目的 :建立测定人精液维生素E含量的反相高效液相色谱法。　方法 :用正己烷萃取人精液维生素E ,氮气吹干 ,以甲醇定容 ;以维生素E作外标 ,用紫外检测仪检测 ,波长为 2 0 5nm。　结果 :线性关系为y =0 .30 2 9+0 .0 0 730x,r=0 .9994,回收率在 85 %～ 115 %之间 ,检测限为 4.5 35× 10 -2 μmol/L ,测定 1份样品约需 12min。　 结论 :本法与比色法或荧光法比较 ,测定人精液中维生素E含量准确 ,特异性强 ,灵敏度高 ;结果提示不育病人精子密度越高精液维生素E含量越高。 展开更多
关键词 RP-HPLC 维生素E 人精液 男性不育
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血清与精浆磷脂酶A2的活力测定与初步应用 被引量：7
8
作者 张文辉 李晓军 +2 位作者 武建国 刘猛六 胡卓逸 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第5期250-252,共3页
用自行合成的２－硫代十六酰乙基磷酸胆碱（２－ｔｈｉｏ－ｈｅｘａｄｅｃａｎｏｙｌｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ，ＨＥＰＣ）作底物建立了磷脂酶Ａ２（ＰｌＡ２）的活力测定法。健康人血清（ｎ＝８０）ＰｌＡ２活力的９５... 用自行合成的２－硫代十六酰乙基磷酸胆碱（２－ｔｈｉｏ－ｈｅｘａｄｅｃａｎｏｙｌｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ，ＨＥＰＣ）作底物建立了磷脂酶Ａ２（ＰｌＡ２）的活力测定法。健康人血清（ｎ＝８０）ＰｌＡ２活力的９５％可信限为０～５．６Ｕ／Ｌ，健康人精浆（ｎ＝２５）ＰｌＡ２活力９５％可信限为０～２．９Ｕ／Ｌ。以＞５．６Ｕ／Ｌ为血清ＰｌＡ２活力升高。急性胰腺炎患者，４名急性期者均升高，５名临床好转者为正常。其他疾病患者除个别外血清ＰｌＡ２活力均在正常范围内。以＞２．９Ｕ／Ｌ为精浆ＰｌＡ２活力升高，不育症男性（ｎ＝５１）中，４９％高于正常范围。 展开更多
关键词 磷脂酶A2 急性 胰腺炎 血清 精浆 不育症 男性
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磷脂酶A2的活力测定与临床初步应用 被引量：1
9
作者 张文辉 李晓军 +2 位作者 武建国 刘猛六 胡卓逸 《医学研究生学报》 CAS 1995年第3期82-83,共2页
磷脂酶Ａ２（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ２，ＰＬＡ２）是能催化和水解膜磷脂的磷脂酶中的一种，几乎存在于所有的细胞中，在血清、胰液、精浆、唾液、滑膜液中都可测得。酶蛋白由１２５个氨基酸的单一多肽链组成，分子量１２０００... 磷脂酶Ａ２（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ２，ＰＬＡ２）是能催化和水解膜磷脂的磷脂酶中的一种，几乎存在于所有的细胞中，在血清、胰液、精浆、唾液、滑膜液中都可测得。酶蛋白由１２５个氨基酸的单一多肽链组成，分子量１２０００～１５０００，等电点是９．２，最适... 展开更多
关键词 磷脂酶A2 急性胰腺炎 不育症
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