目的:探究冷诱导RNA结合蛋白(cold-inducible RNA-binding protein, CIRP)是否能通过TLR4/MyD88途径介导氧化应激促进脑缺血再灌注损伤的发生发展过程,目前尚无报道。本研究将为脑缺血再灌注损伤的治疗提供新的靶点,亦为临床急性缺血性...目的:探究冷诱导RNA结合蛋白(cold-inducible RNA-binding protein, CIRP)是否能通过TLR4/MyD88途径介导氧化应激促进脑缺血再灌注损伤的发生发展过程,目前尚无报道。本研究将为脑缺血再灌注损伤的治疗提供新的靶点,亦为临床急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke, AIS)患者术后缺血再灌注损伤的治疗应用提供了理论依据。方法:首先通过检测AIS患者术后外周血、构建HMC3细胞缺氧/复氧模型,观察缺血再灌注损伤对CIRP表达水平的影响;其次通过培养SH-SY5Y细胞,使用人重组CIRP蛋白(Recombinant human CIRP protein, rhCIRP)及C23干预,观察CIRP的表达及氧化应激水平。最后利用慢病毒敲减HMC3细胞的CIRP基因,再次构建细胞缺氧/复氧模型,探究CIRP通过TLR4/MyD88途径激活NADPH氧化酶,释放ROS上调Drp-1水平,进而促进线粒体分裂的分子机制。结果:AIS患者脑缺血再灌注后血清CIRP表达较术前显著升高。在人小胶质细胞HMC3缺氧/复氧模型中,细胞内CIRP表达水平显著升高且8小时后CIRP表达水平达到巅峰,并分泌到细胞外,激活炎症因子TNF-α、IL-6表达。rhCIRP可以作用于SH-SY5Y细胞促进TLR4、GP91、P47、DRP-1、MFN-2、Cleaved-caspase-3、TNF-α、IL-6的表达,介导氧化应激。而使用C23和敲减CIRP后则可以抑制上述蛋白和炎症因子的表达,保护组织细胞。结论:缺血再灌注损伤使小胶质细胞释放大量CIRP,分泌到细胞外,TLR-4/MyD88通路介导氧化应激,引起神经细胞缺血再灌注损伤。Objective: To explore whether CIRP can promote the occurrence and development of cerebral ischemia-reperfusion injury through TLR4/MyD88 pathway through oxidative stress, there is no report at present. This study will provide a new target for cerebral ischemia-reperfusion injury, and also provide a theoretical basis for the treatment and application of ischemia-reperfusion injury after acute ischemic stroke surgery. Methods: The effect of ischemia reperfusion in展开更多
文摘目的:探究冷诱导RNA结合蛋白(cold-inducible RNA-binding protein, CIRP)是否能通过TLR4/MyD88途径介导氧化应激促进脑缺血再灌注损伤的发生发展过程,目前尚无报道。本研究将为脑缺血再灌注损伤的治疗提供新的靶点,亦为临床急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke, AIS)患者术后缺血再灌注损伤的治疗应用提供了理论依据。方法:首先通过检测AIS患者术后外周血、构建HMC3细胞缺氧/复氧模型,观察缺血再灌注损伤对CIRP表达水平的影响;其次通过培养SH-SY5Y细胞,使用人重组CIRP蛋白(Recombinant human CIRP protein, rhCIRP)及C23干预,观察CIRP的表达及氧化应激水平。最后利用慢病毒敲减HMC3细胞的CIRP基因,再次构建细胞缺氧/复氧模型,探究CIRP通过TLR4/MyD88途径激活NADPH氧化酶,释放ROS上调Drp-1水平,进而促进线粒体分裂的分子机制。结果:AIS患者脑缺血再灌注后血清CIRP表达较术前显著升高。在人小胶质细胞HMC3缺氧/复氧模型中,细胞内CIRP表达水平显著升高且8小时后CIRP表达水平达到巅峰,并分泌到细胞外,激活炎症因子TNF-α、IL-6表达。rhCIRP可以作用于SH-SY5Y细胞促进TLR4、GP91、P47、DRP-1、MFN-2、Cleaved-caspase-3、TNF-α、IL-6的表达,介导氧化应激。而使用C23和敲减CIRP后则可以抑制上述蛋白和炎症因子的表达,保护组织细胞。结论:缺血再灌注损伤使小胶质细胞释放大量CIRP,分泌到细胞外,TLR-4/MyD88通路介导氧化应激,引起神经细胞缺血再灌注损伤。Objective: To explore whether CIRP can promote the occurrence and development of cerebral ischemia-reperfusion injury through TLR4/MyD88 pathway through oxidative stress, there is no report at present. This study will provide a new target for cerebral ischemia-reperfusion injury, and also provide a theoretical basis for the treatment and application of ischemia-reperfusion injury after acute ischemic stroke surgery. Methods: The effect of ischemia reperfusion in
