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冻存脐带血中内皮祖细胞的分离培养及生物学特性鉴定 被引量：3
1
作者 付亚茹 孙阳阳 +2 位作者 王洪星 刘小盾 曲廷瑜 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期215-220,共6页
目的:建立和开发一种新型的从冻存脐带血中分离培养内皮祖细胞(EPC)的方法,探讨其生物学特性,提高冻存脐带血分离获得EPC的成功率。方法:自液氮罐中收集公共库中2000年至2001年保存的12例冻存脐带血,37℃水浴锅中快速复苏后,磷酸缓冲盐... 目的:建立和开发一种新型的从冻存脐带血中分离培养内皮祖细胞(EPC)的方法,探讨其生物学特性,提高冻存脐带血分离获得EPC的成功率。方法:自液氮罐中收集公共库中2000年至2001年保存的12例冻存脐带血,37℃水浴锅中快速复苏后,磷酸缓冲盐溶液(PBS缓冲液)洗涤,获得总有核细胞(TNCs),将TNCs接种至培养皿中诱导扩增EPC。使用流式细胞术和免疫荧光方法鉴定EPC并确定纯度。采用下列方法体外鉴定内皮祖细胞的功能:荧光显微镜观察细胞特异性摄取Dil-Ac-LDL和FITC-UEA-I的功能、在基质胶中形成毛细管样结构的情况,ELISA法检测释放VEGF因子的功能。结果:培养3周后,出现1-5个鹅卵石铺路石样内皮祖细胞集落。体外培养第1-3代EPC,其表面CD31、CD34、CD144和VEGFR (CD309)标记阳性率分别为(92. 91±5. 20)%、(30. 0±23. 27)%、(88. 55±3. 83)%和(67. 21±12. 12)%。EPC细胞具有特异性内吞Dil-Ac-LDL和FITCUEA-I、形成毛细管结构,释放低浓度VEGF因子等功能。结论:采用本方法从冻存脐带血中分离EPC的稳定性与重复性高,从冻存的脐带血中分离EPC的成功率可提高至85%。该方法为临床应用丰富的内皮祖细胞奠定了基础。 展开更多
关键词 冻存脐带血 内皮祖细胞 细胞分离 生物学特性鉴定
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IFN-γ增强人脐带间充质干细胞的免疫抑制能力 被引量：2
2
作者 刘小盾 刘东 +5 位作者 臧传宝 张海燕 明奕 迟令龙 沈柏均 李栋 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期605-611,共7页
本研究旨在探讨IFN-γ对脐带间充质干细胞免疫抑制能力的影响。利用细胞因子刺激细胞表面受体的方法改变MSC的免疫抑制能力。用MSC与淋巴细胞共培养实验检测激活后MSC对淋巴细胞增殖抑制的变化。用荧光定量PCR实验和ELISA实验检测激活后... 本研究旨在探讨IFN-γ对脐带间充质干细胞免疫抑制能力的影响。利用细胞因子刺激细胞表面受体的方法改变MSC的免疫抑制能力。用MSC与淋巴细胞共培养实验检测激活后MSC对淋巴细胞增殖抑制的变化。用荧光定量PCR实验和ELISA实验检测激活后MSC基因和蛋白的表达变化情况。结果表明:IFN-γ可以增强脐带MSC的免疫抑制能力,IFN-γ激活后的MSC能更有效的抑制淋巴细胞的增殖,上调MSC细胞内免疫抑制基因IDO1,COX2和HLA-G等的表达和可溶性免疫抑制蛋白HLA-G、KYN、IL-10、PGE2等的分泌,并在细胞共培养实验中将间充质干细胞的免疫抑制功能提高2-7倍。结论:IFN-γ可有效提高MSC的免疫抑制能力。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 免疫抑制 IFN-Γ
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胎盘冻干粉对小鼠延缓衰老作用的研究 被引量：2
3
作者 宋航 臧传宝 +2 位作者 刘小盾 侯怀水 李栋 《中国生化药物杂志》 CAS 北大核心 2014年第1期65-67,共3页
目的研究胎盘冻干粉对小鼠延缓衰老的作用。方法将2月龄雌性小鼠随机分为5组:空白组、衰老组、阳性组、胎盘粉低剂量组和高剂量组。除空白组外,其余各组均采用皮卞注射相同剂量D—半乳糖42 d建立小鼠衰老模型,同时各组分别灌胃相应的药... 目的研究胎盘冻干粉对小鼠延缓衰老的作用。方法将2月龄雌性小鼠随机分为5组:空白组、衰老组、阳性组、胎盘粉低剂量组和高剂量组。除空白组外,其余各组均采用皮卞注射相同剂量D—半乳糖42 d建立小鼠衰老模型,同时各组分别灌胃相应的药物,最后检测小鼠机体内免疫力及生理调控相关指标。结果胎盘粉2个剂量组小鼠的胸腺指数和脾脏指数显著高于衰老组(P<0,05),大脑中的MDA含量显著低于衰老组(P<0.05),外周血中的CD4和(CD8细胞比例、血清中雌性激素(P和E 2)、免疫球蛋白(lgG)以及造血因子(EPO、G—CSF和M-CSF)的含量均显著高于衰老组(P<0.05)。结论胎盘冻干粉能够通过提高机体免疫力、改善生理调控来达到延缓衰老的作用。 展开更多
关键词 胎盘冻干粉 D-半乳糖 延缓衰老
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脐血源MHC限制性杀伤T细胞的扩增及功能研究 被引量：2
4
作者 明奕 张海燕 +5 位作者 王哲 刘小盾 臧传宝 宋航 戴晓宇 李栋 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期195-201,共7页
目的:本研究通过不同细胞因子的组合定向诱导脐血单个核细胞分化扩增杀伤性T细胞(CTL)并探讨其功能。方法:利用密度梯度离心法获得脐血单个核细胞(MNK),添加IL-2、IL-15、PHA-P和IFN-γ等多种因子,诱导分化并扩增CTL细胞;通过流式细胞... 目的:本研究通过不同细胞因子的组合定向诱导脐血单个核细胞分化扩增杀伤性T细胞(CTL)并探讨其功能。方法:利用密度梯度离心法获得脐血单个核细胞(MNK),添加IL-2、IL-15、PHA-P和IFN-γ等多种因子,诱导分化并扩增CTL细胞;通过流式细胞术、细胞杀伤实验及定量PCR技术检测其生物学功能。结果:经过15 d的培养细胞数量明显增多,细胞增殖率平均为(1 522±137)%。流式细胞仪检测显示,直接分离的脐血单个核细胞流式分型的结果为95%以上属CD3-CD8-,体外培养15 d后CD3+CD8+细胞的比例高达82.77±5.61,具有良好的杀瘤活性,直接提取的MNC细胞对He La细胞及K562细胞的杀伤效果平均值为(61.88±1.08)%,培养后的CTL细胞杀伤效果均能达到80%以上,平均值为(90.33±2.02)%,与对照组相比有显著提高;同时颗粒酶(Granzyme)A、颗粒酶B、GM-CSF、颗粒溶素(Granulysin)、IFN-γ、TGF-β、TNF-α和穿孔素(perforin))等相关细胞因子的mRNA表达水平均有不同程度增加,与对照组相比IFN-γ和TGF-β的表达显著上调(P<0.05),其余因子的表达极显著上调(P<0.01)。结论:脐血造血单个核细胞能体外分化为杀伤性T淋巴细胞,并可以大量扩增,脐血可以作为肿瘤过继免疫治疗所需T淋巴细胞的来源。 展开更多
关键词 脐血 杀伤性T细胞 细胞扩增 肿瘤过继免疫治疗
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利用析因设计法优化神经干细胞分化为多巴胺能神经元的诱导方案 被引量：1
5
作者 宋振涛 陈恒 +3 位作者 王帅 田振辉 刘小盾 曲廷瑜 《中华细胞与干细胞杂志（电子版）》 2017年第4期195-201,共7页
目的优化实验设计将人神经干细胞(h NSCs)高比例诱导分化为多巴胺能神经元。方法从a FGF、dbcAMP、普拉克索(PRX)、TPA和forskolin共计5种诱导因子中,使用单因素方法筛选出对h NSCs诱导为多巴胺能神经元有显著作用的诱导因子,显著性检... 目的优化实验设计将人神经干细胞(h NSCs)高比例诱导分化为多巴胺能神经元。方法从a FGF、dbcAMP、普拉克索(PRX)、TPA和forskolin共计5种诱导因子中,使用单因素方法筛选出对h NSCs诱导为多巴胺能神经元有显著作用的诱导因子,显著性检验使用student's t检验。之后使用析因设计方法对选出的显著因子的诱导作用进行定量评估,找出每个因子对h NSCs诱导为多巴胺能神经元的诱导规律,统计学显著性使用方差分析。最后使用最快上升法找到每个显著因子的最佳浓度。结果根据初步的单因素筛选实验,aFGF、dbcAMP、TPA被认为是对h NSCs诱导为多巴胺能神经元起诱导作用的因子。使用析因设计对aFGF、dbcAMP和TPA的因子效应进行建模,得出在初始的浓度下,aFGF和dbcAMP为阳性诱导因子,TPA为阴性诱导因子,并得出三者的浓度变化比例为0.29:0.90:-0.39。选取三者的步长分别为11 ng/ml、35μmol/L和-15 nmol/L,使用最快上升法优化出三者最佳的浓度分别为166 ng/ml、310μmol/L和10 nmol/L。最终多巴胺能神经元诱导比例可以达到(6.56±0.07)﹪,相比较对照提高了23.8﹪。结论析因设计法可以有效的优化h NSCs诱导分化为多巴胺能神经元。 展开更多
关键词 神经干细胞 多巴胺 神经元
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人中鼻甲来源嗅鞘细胞培养与鉴定的初步研究
6
作者 陈恒 宋振涛 +1 位作者 刘小盾 曲廷瑜 《中华细胞与干细胞杂志（电子版）》 2019年第5期262-266,共5页
目的探索一种从人中鼻甲分离培养嗅鞘细胞的方法并鉴定所获得的细胞。方法通过手术获取人中鼻甲黏膜组织,随后进行两步消化并剥离黏膜上皮组织,得到体积较小的组织块,再进行组织块原代(传代)培养并加压筛选,最终得到双极或多极样细胞并... 目的探索一种从人中鼻甲分离培养嗅鞘细胞的方法并鉴定所获得的细胞。方法通过手术获取人中鼻甲黏膜组织,随后进行两步消化并剥离黏膜上皮组织,得到体积较小的组织块,再进行组织块原代(传代)培养并加压筛选,最终得到双极或多极样细胞并对获得的细胞进行免疫荧光鉴定。上皮样细胞比例、S100β和p75阳性细胞比例用x±s表示,组间比较采用独立样本t检验。结果将不剥离上皮层与剥离上皮层培养的原代细胞中上皮样细胞的比例进行对比,发现上皮层组上皮样细胞比例为(92.23±3.93)﹪高于剥离上皮层组上皮样细胞的比例(77.63±2.97)﹪,差异具有统计学意义(t=5.129,P=0.007)。采用剥离上皮层法培养原代细胞,经过加压筛选的细胞呈现双极或多极样,符合嗅鞘细胞形态学特点。免疫荧光染色发现,S100β阳性细胞占总细胞量的(8.1±1.7)﹪,而p75阳性细胞占总细胞量的5﹪以下,达到国内外研究同等水平。结论通过使用两步消化法和加压筛选联合的方法从人中鼻甲粘膜组织中成功获得了人中鼻甲嗅鞘细胞,相比较传统方法,细胞分离培养周期明显缩短。 展开更多
关键词 中鼻甲 嗅鞘细胞 细胞培养 鉴定
原文传递
脐带间充质细胞输注治疗大鼠肝硬化模型后表达谱的变化
7
作者 张海燕 明奕 +3 位作者 刘小盾 臧传宝 迟令龙 李栋 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期519-524,共6页
目的 研究采用人脐带间充质细胞（UC-MSC）治疗肝硬化大鼠后,肝细胞中基因表达的变化. 方法 首先分离培养UC-MSC,然后鉴定其细胞表型以及向成骨细胞和脂肪细胞的分化能力.其次利用皮下注射四氯化碳方法建立大鼠肝硬化动物模型,将U C-MS... 目的 研究采用人脐带间充质细胞（UC-MSC）治疗肝硬化大鼠后,肝细胞中基因表达的变化. 方法 首先分离培养UC-MSC,然后鉴定其细胞表型以及向成骨细胞和脂肪细胞的分化能力.其次利用皮下注射四氯化碳方法建立大鼠肝硬化动物模型,将U C-MSC通过尾静脉注射途径对肝硬化大鼠进行治疗,利用血清学检测和组织学染色评价其治疗效果,最后提取肝脏RNA,进行表达谱芯片杂交并对结果进行统计分析,组间比较用t检验. 结果 细胞表型检测和诱导分化实验证明培养得到的贴壁细胞表型符合间充质细胞特征.血清学检测和组织病理学染色结果表明利用四氯化碳法成功建立了大鼠肝硬化模型,且U C-MSC治疗可以显著地改善肝损伤.芯片分析结果显示与对照组相比,脐带间充质细胞上调了补体凝血相关基因,下调细胞增殖、细胞周期和胶原合成等相关基因;肝功能生物化学指标检测显示球蛋白改善明显,分别为（33.9±1.5） g/L比（27.7±0.6） g/L,P=0.045;其他指标变化不明显. 结论 在脐带MSC治疗肝硬化逆转肝损伤的过程中,可能通过上调了补体凝血相关基因,抑制细胞增殖和胶原沉着发挥治疗作用. 展开更多
关键词 肝硬化 间质干细胞 基因芯片 细胞治疗
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脐血单个核细胞输注治疗大鼠肝硬化模型后肝脏基因表达谱的变化
8
作者 张海燕 明奕 +3 位作者 刘小盾 臧传宝 迟令龙 李栋 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2014年第23期3388-3395,共8页
目的:研究采用人脐血单个核细胞(humancord blood mononuclear cell,CB-MNC)治疗肝硬化大鼠后,其肝细胞中基因表达的变化.方法:首先分离CB-MNC,利用流式细胞术分析其CD34+细胞含量;然后利用四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)联合乙... 目的:研究采用人脐血单个核细胞(humancord blood mononuclear cell,CB-MNC)治疗肝硬化大鼠后,其肝细胞中基因表达的变化.方法:首先分离CB-MNC,利用流式细胞术分析其CD34+细胞含量;然后利用四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)联合乙醇方法建立大鼠肝硬化模型,将CB-MNC通过尾静脉注射对肝硬化大鼠进行治疗,通过血清学检测和组织学染色证明其治疗效果;提取肝脏RNA,进行表达谱芯片杂交并对结果进行统计分析.结果:血清学检测表明应用CCl4和乙醇造模后,谷草转氨酶和谷丙转氨酶显著升高(P<0.05).组织病理学染色结果表明大鼠肝硬化模型制作成功.与对照组相比,CB-MNC治疗可以显著地降低谷草转氨酶、谷丙转氨酶和转肽酶(P<0.05),且肝脏形态好转,肝细胞坏死和脂肪病变减少.基因芯片分析结果显示:与对照组相比,脐血单个核细胞调节了蛋白异源三聚化、氧化去甲基化、焦点黏连、白细胞跨内皮迁移、细胞外受体相互作用、补体凝血和P450对外源物代谢等相关基因.结论:CCl4和乙醇混合法可以成功建立大鼠肝硬化模型,而CB-MNC治疗可以显著地改善肝损伤.在CB-MNC治疗肝硬化逆转肝损伤的过程中,可能通过上调了补体凝血相关基因及过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路,下调焦点黏连、白细胞跨内皮迁移和细胞外基质受体相互作用等相关基因发挥治疗作用. 展开更多
关键词 人脐血单个核细胞 肝硬化 基因表达谱 细胞治疗
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