目的:检测肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白(actin filament-associated protein 1-like 2,A FA P-1L2)在不同分化程度胰腺癌细胞株中的表达,并观察其对下游磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶(phosphatidylinositol 3 kinase/protein kinase B,PI3K/...目的:检测肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白(actin filament-associated protein 1-like 2,A FA P-1L2)在不同分化程度胰腺癌细胞株中的表达,并观察其对下游磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶(phosphatidylinositol 3 kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)通路调控作用及对胰腺癌细胞的增殖、周期及凋亡的影响.方法:以Western blot及实时定量PCR检测(real-time quantitative PCR,q RT-PCR)法对不同分化程度胰腺癌细胞系PANC-1、Mia Pa Ca-2、Colo-357、BXPC-3、SW1990及CFPAC-1中AFAP-1L2表达进行检测;构建靶向AFAP-1L2的干扰质粒si AFAP-1L2,转染Mia Pa Ca-2细胞,以Western blot及q RTPCR法检测AFAP-1L2下调后PI3K/Akt通路蛋白及m RNA变化;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(methyl-thiazolyl-tetrazolium,MTT)法检测转染后Mia Pa Ca-2细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期及凋亡.结果:Western blot及q RT-PCR法显示,AFAP-1L2蛋白及m R N A表达水平在低分化胰腺癌细胞系中表达水平高于中分化及高分化细胞系.si AFAP-1L2转染后磷脂酰肌醇3激酶a亚单位(P I3K C A)蛋白在s i A FA P-1L2组的表达量明显低于A FA P-1L2组及小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)control组(F=9.280,P=0.0139),a蛋白激酶(a-Akt)在si AFAP-1L2细胞的表达量高于MOCK细胞及si RNA control细胞(F=7.719,P=0.0219),磷酸化a蛋白激酶(a-p A k t)在si AFAP-1L2细胞的表达量低于MOCK细胞及si RNA control细胞(F=5.507,P=0.0439).PI3KCAm RNA在si AFAP-1L2组的表达量明显低于AFAP-1L2组及si RNA control组(F=20.16,P=0.0022),a-Akt m RNA在si AFAP-1L2细胞的表达量高于MOCK细胞及siRNA control细胞(F=6.068,P=0.0362),a-p Akt m R N A在s i A FA P-1L2细胞的表达量低于MOCK细胞及si RNA control细胞(F=10.33,P=0.0114).MTT检测显示,在48、72及96h siAFAP-1L2干扰后Mia PaCa-2细胞增殖能力下降(F=3.924,P<0.05;F=6.812,P<0.01;F=7.003,P<0.01).流式细胞检测显示,si AFAP-1L2干扰后G1期细胞比例增高,G2及S期比例减少(F=4.87,F=5.26,F=4.94,均P<0.05),si AFAP展开更多
文摘目的:检测肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白(actin filament-associated protein 1-like 2,A FA P-1L2)在不同分化程度胰腺癌细胞株中的表达,并观察其对下游磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶(phosphatidylinositol 3 kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)通路调控作用及对胰腺癌细胞的增殖、周期及凋亡的影响.方法:以Western blot及实时定量PCR检测(real-time quantitative PCR,q RT-PCR)法对不同分化程度胰腺癌细胞系PANC-1、Mia Pa Ca-2、Colo-357、BXPC-3、SW1990及CFPAC-1中AFAP-1L2表达进行检测;构建靶向AFAP-1L2的干扰质粒si AFAP-1L2,转染Mia Pa Ca-2细胞,以Western blot及q RTPCR法检测AFAP-1L2下调后PI3K/Akt通路蛋白及m RNA变化;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(methyl-thiazolyl-tetrazolium,MTT)法检测转染后Mia Pa Ca-2细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期及凋亡.结果:Western blot及q RT-PCR法显示,AFAP-1L2蛋白及m R N A表达水平在低分化胰腺癌细胞系中表达水平高于中分化及高分化细胞系.si AFAP-1L2转染后磷脂酰肌醇3激酶a亚单位(P I3K C A)蛋白在s i A FA P-1L2组的表达量明显低于A FA P-1L2组及小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)control组(F=9.280,P=0.0139),a蛋白激酶(a-Akt)在si AFAP-1L2细胞的表达量高于MOCK细胞及si RNA control细胞(F=7.719,P=0.0219),磷酸化a蛋白激酶(a-p A k t)在si AFAP-1L2细胞的表达量低于MOCK细胞及si RNA control细胞(F=5.507,P=0.0439).PI3KCAm RNA在si AFAP-1L2组的表达量明显低于AFAP-1L2组及si RNA control组(F=20.16,P=0.0022),a-Akt m RNA在si AFAP-1L2细胞的表达量高于MOCK细胞及siRNA control细胞(F=6.068,P=0.0362),a-p Akt m R N A在s i A FA P-1L2细胞的表达量低于MOCK细胞及si RNA control细胞(F=10.33,P=0.0114).MTT检测显示,在48、72及96h siAFAP-1L2干扰后Mia PaCa-2细胞增殖能力下降(F=3.924,P<0.05;F=6.812,P<0.01;F=7.003,P<0.01).流式细胞检测显示,si AFAP-1L2干扰后G1期细胞比例增高,G2及S期比例减少(F=4.87,F=5.26,F=4.94,均P<0.05),si AFAP
