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PEDV双抗体夹心ELISA检测方法的建立
被引量：
12
1
作者
马宇聪
刘
增素
+8 位作者
王书博
周晗
姜艳萍
崔文
王丽
乔薪瑗
唐丽杰
徐义刚
李一经
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第9期1152-1159,共8页
为了快速检测猪流行性腹泻病毒,本研究以纯化的家兔抗猪流行性腹泻病毒多隆抗体为捕获抗体,以小鼠抗猪流行性腹泻单克隆抗体为检测抗体,并对单克隆抗体进行HRP标记,由此建立了双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测法,检测抗体的最佳工作浓度...
为了快速检测猪流行性腹泻病毒,本研究以纯化的家兔抗猪流行性腹泻病毒多隆抗体为捕获抗体,以小鼠抗猪流行性腹泻单克隆抗体为检测抗体,并对单克隆抗体进行HRP标记,由此建立了双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测法,检测抗体的最佳工作浓度为浓度为0.75ug/m L。当D450≥0.233且P/N≥2时判定为阳性。该方法特异性强,与猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒均无交叉反应,最低检测量为3.125×103TCID50/m L。该方法重复性较好:批间和批内重复率均小于10%,临床样品检测结果与RT-PCR方法比较,符合率为90.5%。上述结果表明,本研究建立的检测猪流行性腹泻病毒的双抗体夹心ELISA特异性强、灵敏度高,可用于对猪粪样中PEDV的检测。
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关键词
猪流行性腹泻病毒
单克隆抗体
双抗体夹心ELISA
原文传递
重组牛α干扰素的分泌表达及抗病毒活性分析
被引量：
2
2
作者
刘
增素
汪昭睿
+8 位作者
王雪莹
姜艳平
崔文
王丽
乔薪瑗
周晗
徐义刚
李一经
唐丽杰
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021年第4期1449-1456,共8页
本研究旨在利用乳酸乳球菌构建牛α干扰素(BoIFN-α)的分泌表达系统并分析其抗病毒活性。根据乳酸乳球菌MG1363密码子使用的偏好性,对BoIFN-α基因进行优化合成。将目的基因和乳酸乳球菌表达载体质粒pAMJ399分别进行SalⅠ和BglⅡ双酶切...
本研究旨在利用乳酸乳球菌构建牛α干扰素(BoIFN-α)的分泌表达系统并分析其抗病毒活性。根据乳酸乳球菌MG1363密码子使用的偏好性,对BoIFN-α基因进行优化合成。将目的基因和乳酸乳球菌表达载体质粒pAMJ399分别进行SalⅠ和BglⅡ双酶切,将胶回收产物进行连接后,转化大肠杆菌TG1感受态细胞,提取阳性质粒电转化乳酸乳球菌感受态细胞,用SDS-PAGE和Western blotting方法对表达蛋白进行分析和鉴定,同时将重组乳酸乳球菌培养28 h后取上清用PEG20000浓缩10倍左右,进行体外抗病毒试验。结果显示,试验成功构建了重组乳酸乳球菌pAMJ399-BoIFN-α/MG1363,重组菌上清和沉淀均出现约20 ku的目的条带,表明重组蛋白以分泌的形式同时存在于培养液的上清和沉淀中。浓缩后的重组BoIFN-α(rBoIFN-α)上清与水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)同时作用,用MDBK/VSV系统以微量细胞病变抑制法测定rBoIFN-α的效价为1.02×106 U/L;通过Alamer Blue法分析可知,加入rBoIFN-α后对细胞的活性影响较小;间接免疫荧光试验可见加入rBoIFN-α后细胞无绿色荧光,说明rBoIFN-α有良好的抗病毒效果;实时荧光定量PCR结果进一步证实rBoIFN-α具有一定的抗病毒效果。本试验构建了能分泌表达rBoIFN-α的乳酸乳球菌,通过一系列的体外抗病毒试验证明rBoIFN-α具有良好的抗病毒活性,试验结果为rBoIFN-α作为抗病毒药物、免疫增强剂的开发、肽类用药及临床应用提供新途径。
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关键词
牛α干扰素(BoIFN-α)
乳酸乳球菌
分泌表达
抗病毒活性
下载PDF
职称材料
仔猪自动化粥料饲喂系统
被引量：
1
3
作者
Graham Baker
类维青
刘
增素
《养猪》
2015年第1期24-24,共1页
饲喂粥料有助于弱仔多摄入养分和保持机体健康（图1）,这种方法虽然有效,但劳动强度很大。 猪天性喜食粥料甚于颗粒料和干粉料。 断奶是一头仔猪饱受应激的特殊时期,对其后的生产性能影响巨大。断奶时,仔猪必须同时面对数个挑战,最大...
饲喂粥料有助于弱仔多摄入养分和保持机体健康（图1）,这种方法虽然有效,但劳动强度很大。 猪天性喜食粥料甚于颗粒料和干粉料。 断奶是一头仔猪饱受应激的特殊时期,对其后的生产性能影响巨大。断奶时,仔猪必须同时面对数个挑战,最大的挑战是与母猪分离—无乳可食,无温暖、舒适、安全的社群环境可依。
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关键词
干粉料
机体健康
生产性能
小型猪场
肥育猪
喂食器
断奶期
原文作者
故常
物理形态
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职称材料
题名
PEDV双抗体夹心ELISA检测方法的建立
被引量：
12
1
作者
马宇聪
刘
增素
王书博
周晗
姜艳萍
崔文
王丽
乔薪瑗
唐丽杰
徐义刚
李一经
机构
东北农业大学动物医学学院
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第9期1152-1159,共8页
基金
国家重点研发计划项目（2016YFD0500704-3）
文摘
为了快速检测猪流行性腹泻病毒,本研究以纯化的家兔抗猪流行性腹泻病毒多隆抗体为捕获抗体,以小鼠抗猪流行性腹泻单克隆抗体为检测抗体,并对单克隆抗体进行HRP标记,由此建立了双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测法,检测抗体的最佳工作浓度为浓度为0.75ug/m L。当D450≥0.233且P/N≥2时判定为阳性。该方法特异性强,与猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒均无交叉反应,最低检测量为3.125×103TCID50/m L。该方法重复性较好:批间和批内重复率均小于10%,临床样品检测结果与RT-PCR方法比较,符合率为90.5%。上述结果表明,本研究建立的检测猪流行性腹泻病毒的双抗体夹心ELISA特异性强、灵敏度高,可用于对猪粪样中PEDV的检测。
关键词
猪流行性腹泻病毒
单克隆抗体
双抗体夹心ELISA
Keywords
porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)
monoclonal antibody
double antibody sandwich ELISA(DAS-ELISA)
分类号
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
重组牛α干扰素的分泌表达及抗病毒活性分析
被引量：
2
2
作者
刘
增素
汪昭睿
王雪莹
姜艳平
崔文
王丽
乔薪瑗
周晗
徐义刚
李一经
唐丽杰
机构
东北农业大学动物医学学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021年第4期1449-1456,共8页
基金
“十三五”国家重点研发计划(2017YFD0501000)。
文摘
本研究旨在利用乳酸乳球菌构建牛α干扰素(BoIFN-α)的分泌表达系统并分析其抗病毒活性。根据乳酸乳球菌MG1363密码子使用的偏好性,对BoIFN-α基因进行优化合成。将目的基因和乳酸乳球菌表达载体质粒pAMJ399分别进行SalⅠ和BglⅡ双酶切,将胶回收产物进行连接后,转化大肠杆菌TG1感受态细胞,提取阳性质粒电转化乳酸乳球菌感受态细胞,用SDS-PAGE和Western blotting方法对表达蛋白进行分析和鉴定,同时将重组乳酸乳球菌培养28 h后取上清用PEG20000浓缩10倍左右,进行体外抗病毒试验。结果显示,试验成功构建了重组乳酸乳球菌pAMJ399-BoIFN-α/MG1363,重组菌上清和沉淀均出现约20 ku的目的条带,表明重组蛋白以分泌的形式同时存在于培养液的上清和沉淀中。浓缩后的重组BoIFN-α(rBoIFN-α)上清与水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)同时作用,用MDBK/VSV系统以微量细胞病变抑制法测定rBoIFN-α的效价为1.02×106 U/L;通过Alamer Blue法分析可知,加入rBoIFN-α后对细胞的活性影响较小;间接免疫荧光试验可见加入rBoIFN-α后细胞无绿色荧光,说明rBoIFN-α有良好的抗病毒效果;实时荧光定量PCR结果进一步证实rBoIFN-α具有一定的抗病毒效果。本试验构建了能分泌表达rBoIFN-α的乳酸乳球菌,通过一系列的体外抗病毒试验证明rBoIFN-α具有良好的抗病毒活性,试验结果为rBoIFN-α作为抗病毒药物、免疫增强剂的开发、肽类用药及临床应用提供新途径。
关键词
牛α干扰素(BoIFN-α)
乳酸乳球菌
分泌表达
抗病毒活性
Keywords
BoIFN-α
Lactococcus lactis
secretory expression
antiviral activity
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
仔猪自动化粥料饲喂系统
被引量：
1
3
作者
Graham Baker
类维青
刘
增素
出处
《养猪》
2015年第1期24-24,共1页
文摘
饲喂粥料有助于弱仔多摄入养分和保持机体健康（图1）,这种方法虽然有效,但劳动强度很大。 猪天性喜食粥料甚于颗粒料和干粉料。 断奶是一头仔猪饱受应激的特殊时期,对其后的生产性能影响巨大。断奶时,仔猪必须同时面对数个挑战,最大的挑战是与母猪分离—无乳可食,无温暖、舒适、安全的社群环境可依。
关键词
干粉料
机体健康
生产性能
小型猪场
肥育猪
喂食器
断奶期
原文作者
故常
物理形态
分类号
S828.5 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
PEDV双抗体夹心ELISA检测方法的建立
马宇聪
刘
增素
王书博
周晗
姜艳萍
崔文
王丽
乔薪瑗
唐丽杰
徐义刚
李一经
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2019
12
原文传递
2
重组牛α干扰素的分泌表达及抗病毒活性分析
刘
增素
汪昭睿
王雪莹
姜艳平
崔文
王丽
乔薪瑗
周晗
徐义刚
李一经
唐丽杰
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021
2
下载PDF
职称材料
3
仔猪自动化粥料饲喂系统
Graham Baker
类维青
刘
增素
《养猪》
2015
1
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
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参考文献
引证文献
统计分析
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