猪伪狂犬病病毒新流行株的分离鉴定及抗原差异性分析 被引量：193

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作者 彭金美 安同庆 +7 位作者 赵鸿远 刘益民 陈家锃 冷超粮 孙艳 常丹 田志军 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期1-4,共4页

2011年以来我国多个省份的规模化猪场发生了新生仔猪出现神经症状和死亡的现象,为确定其是否为猪伪狂犬病病毒(PRV)感染所引发,我们利用PCR方法从死亡的新生仔猪脑组织中扩增PRV的gE基因,发现被检猪场均存在PRV野毒感染。gE基因序列分... 2011年以来我国多个省份的规模化猪场发生了新生仔猪出现神经症状和死亡的现象,为确定其是否为猪伪狂犬病病毒(PRV)感染所引发,我们利用PCR方法从死亡的新生仔猪脑组织中扩增PRV的gE基因,发现被检猪场均存在PRV野毒感染。gE基因序列分析表明,从5个省14个猪场的病料中扩增的gE基因高度同源,与以往发表的相关序列比对显示,这些分离株均属于一个相对独立的分支。病料接种Vero细胞能够产生典型的细胞病变,将命名为PRV HeN1分离株接种小鼠能够引起瘙痒、死亡等伪狂犬病症状,并且对小鼠的LD50(102.37TCID50)显著低于经典强毒PRV双城株(103.83TCID50)。此外,中和试验结果显示,PRV Bartha k61活疫苗免疫猪仅能诱导对HeN1分离株低水平的中和抗体,而HeN1分离株能够诱导较高水平的中和抗体,并具有更强的交叉中和能力。根据本实验结果推测,近期各猪场流行的PRV可能存在一定的抗原变异。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 鉴定 抗原差异

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猪伪狂犬病病毒变异株的分离鉴定及其gE基因的分子特征 被引量：88

2

作者 赵鸿远 彭金美 +9 位作者 安同庆 李琳 冷超粮 陈家锃 王倩 常丹 张秋月 蔡雪辉 童光志 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期506-509,共4页

2014年猪伪狂犬病(PR)在我国规模化猪场大范围发生,本实验室在吉林和黑龙江省发病猪场分离到2株PRV,命名为PRV-JL1和PRV-HLJ1。病毒在Vero细胞中能够产生典型的PRV细胞病变,将PRV-JL1以103LD50的剂量感染3只6月龄绵羊,接种羊在5 d^8 d... 2014年猪伪狂犬病(PR)在我国规模化猪场大范围发生,本实验室在吉林和黑龙江省发病猪场分离到2株PRV,命名为PRV-JL1和PRV-HLJ1。病毒在Vero细胞中能够产生典型的PRV细胞病变,将PRV-JL1以103LD50的剂量感染3只6月龄绵羊,接种羊在5 d^8 d内全部死亡,均出现典型的PR症状及组织病理学变化。将PRV-JL1及PRV-HLJ1与近3年来本实验室分离鉴定的及GenBank中登录的来源于国内10多个省份的32个PRV株和17个经典PRV株的gE核苷酸序列进行比对分析,结果表明:近3年分离的PRVs与本实验室之前分离的变异株PRV-HeN1的同源性在97.1%~99.5%,而与经典株PRV双城株(PRV-S)的同源性在96.6%~99.1%。以gE氨基酸序列建立的进化树分析结果显示,近3年分离的PRVs形成一个相对独立于经典株的新分支。以上结果表明变异株已成为我国主要流行的病毒株,而且变异株均在gE蛋白的第48位和第492位各存在1个天冬氨酸的插入。该插入突变可以作为鉴定PRV变异株的分子特征,其生物学意义有待于进一步研究。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 变异 鉴定 gE 分子特征

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2014年~2019年PRRSV主要流行毒株在我国的变化 被引量：42

3

作者 张洪亮 张文立 +14 位作者 许浒 宋帅杰 赵静 相丽润 冷超粮 李真 刘春晓 汤艳东 陈家锃 彭金美 王倩 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期512-516,共5页

为了研究2014年至2019年PRRSV在我国的流行变化情况,本研究分别检测了2014年6月~2019年8月全国17个省、市和自治区及某大型养猪集团2007份和338份疑似PRRSV感染的病料。结果显示,共检出PRRSV阳性病料650份,测定了486株ORF5基因、441株n... 为了研究2014年至2019年PRRSV在我国的流行变化情况,本研究分别检测了2014年6月~2019年8月全国17个省、市和自治区及某大型养猪集团2007份和338份疑似PRRSV感染的病料。结果显示,共检出PRRSV阳性病料650份,测定了486株ORF5基因、441株nsp2基因和122株全基因组序列。遗传演化分析显示,2014年~2019年共检测到6种基因亚型的PRRSV,分别是I型PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like PRRSV、NADC34-like PRRSV、QYYZ-like PRRSV和RespPRRS MLV-like PRRSV。经统计分析显示,2016年以前除检测到1株NADC30-like PRRSV外,其余全部是HP-PRRSV;2016年后HP-PRRSV检出比率逐渐降低,NADC30-like PRRSV检出比率逐渐升高,且2016年后已超过HP-PRRSV,成为我国主要的流行株。QYYZ-like PRRSV的检出数量增多,其广泛流行于我国的华南地区。其它类型的PRRSV检出比率较低,呈现散发或局部流行。此外,近年来,PRRSV的细胞嗜性已经发生明显变化,绝大多数的病毒株无法在体外分离培养。因此,我国养殖企业针对PRRSV流行株的变化应及时调整防控策略,同时加大对PRRSV生物学特性变化机制的研究。本研究对了解我国PRRSV的流行状况及防控具有重要的指导意义。 展开更多

关键词 PRRSV NADC30-like PRRSV 主要流行毒株 细胞嗜性

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2016年我国部分地区类NADC30新亚群猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传变异分析 被引量：32

4

作者 张洪亮 张晶 +12 位作者 李真 张文立 刘春晓 陈家锃 相丽润 冷超粮 彭金美 王倩 白云 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期675-680,共6页

为了解类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）在我国新的流行特点，本研究根据GenBank中美国2012年提交的PRRSV NADC30株全基因组序列设计合成8对引物，通过RT-PCR的方法对本实验室2016年从4个省搜集的临床样品中检测到的15株类NADC3... 为了解类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）在我国新的流行特点，本研究根据GenBank中美国2012年提交的PRRSV NADC30株全基因组序列设计合成8对引物，通过RT-PCR的方法对本实验室2016年从4个省搜集的临床样品中检测到的15株类NADC30 PRRSVs株进行了全基因组测序，并且结合参考株进行了序列分析。NSP2推导氨基酸的序列比对表明，15株PRRSVs均具有aa323～aa433＋aa484＋aa505～aa523 （111＋1＋19） 131个氨基酸缺失的分子特征；经RDP4和Simplot生物学软件分析表明，15株PRRSVs中14株为重组病毒株，参与重组的亲本病毒株为PRRSV NADC30株，提供重组基因片段的病毒株为HP-PRRSV或以VR2332为代表的经典PRRSV株，这些类NADC30重组病毒株的重组位置、重组的基因片段及重组片段长度均具有多样性，而且重组的位置多位于编码非结构蛋白或次要结构蛋白的基因区域；全基因组遗传演化分析表明，这些病毒株远离国内之前流行的HP-PRRSV，同源性仅为83.4 %～87.2 %，而与其它的类NADC30病毒株位于一个相对独立的分支，以上结果均表明这类病毒株已形成了一个新的亚群，命名为5亚群。本研究中不同地区PRRSV的核苷酸同源性差异较大，仅为88.6 %～99.6 %，并且只有2个病毒株可以感染PAM和MARC-145细胞。本研究表明，以基因缺失和基因重组多样性为主要特征的5亚群PRRSV已在我国流行，其生物学特性有待进一步研究。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 类NADC30 缺失 重组 5亚群

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非洲猪瘟暴发前后我国猪繁殖与呼吸综合征病毒的流行变化 被引量：17

5

作者 赵静 李超 +15 位作者 许浒 相丽润 汤艳东 孟凡丹 付军 龚帮俊 陈家锃 冷超粮 彭金美 王倩 周国辉 安同庆 童光志 蔡雪辉 张洪亮 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期349-356,共8页

为了研究非洲猪瘟(ASF)暴发后我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行变化,本研究经PCR检测了2017年1月~2020年12月全国18个省、市和自治区1374份疑似PRRSV感染的病料样品,并对其中阳性病料样品的ORF5、nsp2基因测序并统计阳性样品的... 为了研究非洲猪瘟(ASF)暴发后我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行变化,本研究经PCR检测了2017年1月~2020年12月全国18个省、市和自治区1374份疑似PRRSV感染的病料样品,并对其中阳性病料样品的ORF5、nsp2基因测序并统计阳性样品的检出率,分析不同地区在ASF暴发前后PRRSV阳性检出率的变化趋势;分别利用GraphPad Prism 8.0及ORF5基因的进化树分析ASF暴发前后我国各亚型PPRSV及各地区PPRSV的流行变化趋势;根据nsp2基因推导氨基酸序列分析其缺失特征。ORF5基因和nsp2基因测序及统计分析结果显示,共检出PRRSV阳性病料样品779份(779/1374),其中ASF暴发前397份,ASF暴发后382份。ASF暴发后(2019年~2020年)我国各地PRRSV阳性检出率均有上升,华北地区PRRSV阳性检出率由60.47%上升至66.33%;东北地区由52.76%上升至53.27%;华东地区由60.93%上升至62.59%;中南地区由53.43%上升至57.50%。ASF暴发前后我国各亚型及各地区PPRSV流行变化趋势统计分析结果显示,ASF暴发后,NADC30-like PRRSV作为主要流行株,其检出率显著增长,从47.36%上升至65.97%;NADC34-like PRRSV的检出率也明显增长,从1.76%上升至5.50%;但HP-PRRSV、VR2332-like PRRSV和QYYZ-like PRRSV的检出率明显降低,分别从34.01%降至20.68%、6.80%降至3.40%、7.30%降至0.52%。可见ASF暴发后,我国大部分地区(华北、东北、华东、中南)NADC30-like PRRSV的流行趋势有所上升,但HP-PRRSV的流行趋势明显下降,并且随着ASF的流行,除中南地区外,我国各地NADC34-like PRRSV检出率明显上升。ORF5基因的遗传演化分析结果显示,ASF暴发前(2017年~2018年)检测到6种基因亚型的PRRSV(NADC30-like PRRSV、HP-PRRSV、NADC34-like PRRSV、VR2332-like PRRSV、QYYZ-like PRRSV、Type I PRRSV),而ASF暴发后还检测到CH-1a like PRRSV。Nsp2氨基酸缺失特征分析结果显示,ASF暴发前后我国各亚型PRRSV Nsp2氨基酸序列特征均未发生变化。以上结果表明,ASF疫情的暴 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 非洲猪瘟 主要流行株

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白B表位诱导中和抗体能力的研究 被引量：13

6

作者 冷超粮 安同庆 +9 位作者 陈家锃 宫大庆 李登云 杨永倩 彭金美 张祎 郭娟娟 吴江 童光志 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期297-300,共4页

为证实GP5蛋白B表位是否具有诱导抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中和抗体的能力,本实验合成了PRRSV CH-1a株和高致病性PRRSV(HP-PRRSV)HuN4株B表位的短肽,分别免疫家兔制备两份特异性多肽抗血清。此外,将12头PRRSV及其抗体均为阴性的... 为证实GP5蛋白B表位是否具有诱导抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中和抗体的能力,本实验合成了PRRSV CH-1a株和高致病性PRRSV(HP-PRRSV)HuN4株B表位的短肽,分别免疫家兔制备两份特异性多肽抗血清。此外,将12头PRRSV及其抗体均为阴性的健康仔猪以HP-PRRSV HuN4疫苗毒株(HuN4-F112)进行基础免疫,然后用强毒株(HuN4-F5)进行多次接种,制备猪高免血清。间接免疫荧光检测(IFA)结果显示,两份多肽抗血清均能与PRRSV经典株和变异株发生特异性反应,IFA抗体效价无差异,表明两份血清没有显著差异。病毒中和试验结果表明,两份多肽抗血清均不具有中和PRRSV活性。间接ELISA和病毒中和试验结果表明,猪高免血清中针对B表位肽的ELISA抗体水平与血清抗PRRSV中和抗体之间没有正相关关系,而且B表位肽不能抑制中和抗体。以上结果表明HP-PRRSV B表位不能诱导产生中和抗体。 展开更多

关键词 HP-PRRSV GP5 B表位 中和抗体

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猪流行性腹泻病毒HeN21株的分离鉴定及致病性研究 被引量：8

7

作者 冷超粮 贾楠 +9 位作者 翟洪月 马秀秀 田想 宋佳静 史鸿飞 李娜 姚伦广 阚云超 张瑞 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1108-1115,共8页

为了解河南地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行及变异情况,本研究从该地区某疑似感染PEDV的发病猪场采集粪便样品,经RT-PCR检测并测序,结果显示该猪场为PEDV感染。将阳性样品接种Vero细胞进行病毒分离,并通过RT-PCR扩增、测序及间接免疫... 为了解河南地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行及变异情况,本研究从该地区某疑似感染PEDV的发病猪场采集粪便样品,经RT-PCR检测并测序,结果显示该猪场为PEDV感染。将阳性样品接种Vero细胞进行病毒分离,并通过RT-PCR扩增、测序及间接免疫荧光试验(IFA)鉴定,结果显示分离到一株PEDV,命名为HeN21株。经PCR分段扩增病毒全基因组,测序、拼接后的结果显示,该病毒基因组全长28036 bp。为进一步分析HeN21株的遗传演化特征,利用MegAlign分析HeN21株全基因组与GenBank中5株PEDV参考株全基因组序列的相似性;采用MEGA 11软件中NJ法构建HeN21株与GenBank中31株PEDV参考株S基因的系统发育树;采用MegAlign分析HeN21株S蛋白氨基酸序列的变异特征;进一步评价HeN21株对哺乳仔猪的致病性。相似性分析结果显示,HeN21株与PEDV参考株的相似性为96.6%~98.9%,其中与经典GIa亚型代表株CV777的相似性最低为96.6%,与GIIa亚型代表株AH2012和GIIb亚型代表株AJ1102的相似性均为98.5%。进化树结果显示,HeN21株与GIIa亚型PEDV聚为一支。S蛋白氨基酸序列分析结果显示,与经典株CV777相比,HeN21株在中和抗原表位类胶原酶消化区(COE)存在11个氨基酸突变,其中K635T是其特有的突变。致病性试验结果显示,3日龄健康仔猪最早于接种HeN21株后12 h出现腹泻和呕吐,随后症状加重并死亡。感染组仔猪的直肠拭子经RT-PCR检测和PCR产物测序,全部为PEDV阳性,且小肠肠壁薄而透明,完全丧失消化吸收功能。上述结果表明,PEDV在我国持续变异,且分离株具有较强的致病性,应高度重视。本研究报道的PEDV分离株为深入了解河南地区PED的流行及防控具有重要意义,并进一步丰富了PEDV病毒库,为开发设计新型疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 序列分析 遗传变异 致病性试验

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2016年我国3株欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及其全基因组特征分析 被引量：12

8

作者 张洪亮 张晶 +13 位作者 张文立 相丽润 宋帅杰 刘春晓 李真 彭金美 陈家锃 冷超粮 王倩 白云 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期513-517,共5页

2016年,本实验室共检测到3株基因1型(欧洲型)猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),分别命名为ZD1株、WK14株和WG9株,本研究对3株PRRSV进行了全基因组序列分析。遗传演化分析显示,3株PRRSV均属于基因1型I亚型,与基因1型代表株LV的核苷酸同源性... 2016年,本实验室共检测到3株基因1型(欧洲型)猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),分别命名为ZD1株、WK14株和WG9株,本研究对3株PRRSV进行了全基因组序列分析。遗传演化分析显示,3株PRRSV均属于基因1型I亚型,与基因1型代表株LV的核苷酸同源性为88.7%~88.9%,与基因2型代表株VR2332的核苷酸同源性为60.7%~60.8%。ORF3与ORF4推导氨基酸序列比对结果显示,ZD1株的ORF3提前26个氨基酸(aa)终止,这是首次报道基因1型PRRSV编码的结构蛋白存在提前终止现象,WK14株与WG9株在ORF3的245位存在1个氨基酸的缺失;3株PRRSV在ORF4的66位皆存在1个氨基酸的缺失。Simplot生物学重组软件分析表明,WK14株为重组病毒,供体病毒株为BJEU06-1,提供重组片段的病毒株为NVDC-FJ,重组位置位于第931~3 379位碱基处。ZD1株和WG9株未发现重组现象。本研究发现我国欧洲型PRRSV基因组在缺失、重组等方面正发生一些新的变化,有必要对该类病毒进行持续监测和深入研究。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 基因1型 缺失 重组

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中国与美国RFLP 1-4-4 lineage1C变异株同一分支PRRSV的全基因组序列分析 被引量：11

9

作者 许浒 李超 +13 位作者 相丽润 汤艳东 赵静 龚帮俊 李宛生 付军 彭金美 王倩 周国辉 冷超粮 安同庆 蔡雪辉 张洪亮 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期202-207,共6页

2020年美国报道了高致病性的RFLP 1-4-4 lineage 1C PRRSV变异株,其对猪的致死率达到17.5%。为了分析美国1-4-4 lineage1C PRRSV变异株与中国当前流行的PRRSV的关系,本研究对中国不同基因亚型的PRRSV与美国新发1-4-4 lineage1C PRRSV变... 2020年美国报道了高致病性的RFLP 1-4-4 lineage 1C PRRSV变异株,其对猪的致死率达到17.5%。为了分析美国1-4-4 lineage1C PRRSV变异株与中国当前流行的PRRSV的关系,本研究对中国不同基因亚型的PRRSV与美国新发1-4-4 lineage1C PRRSV变异株进行遗传演化分析,结果显示,中国类NADC34 PRRSV与美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株关系密切;其Nsp2推导氨基酸序列比对结果显示,中国类NADC34 PRRSV与美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株在Nsp2区域存在相同的分子特征,即100个氨基酸(aa328~aa427)的连续缺失。PRRSV基因重组分析结果显示,美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株是以类NADC34 IA14737-2016株为母本毒株,并由IA/2014/NADC34和NADC30病毒株提供重组基因片段的重组病毒,而中国早期的类NADC34 PRRSV是以IA/2014/NADC34株为母本毒株的重组病毒。美国早期的类NADC34 PRRSV对仔猪的致病力差异较大,而中国早期的类NADC34 PRRSV对仔猪多为中、低致病力。此外,中国HLJZD22-1812株与美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株具有类似的重组模式、相同的Nsp2缺失特征、相同的1-4-4 ORF5限制性片段长度多态性(RFLP)模式,且均属于lineage1C分支。本研究结果首次表明美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株与中国类NADC34(PRRSV)属于同一亚型分支,且具有一致的分子特征,提示类NADC34 PRRSV在我国的流行及演化情况需高度关注。 展开更多

关键词 1-4-4 PRRSV变异株 类NADC34 PRRSV 100个氨基酸缺失 重组病毒

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2016~2021年我国猪伪狂犬病病毒的分子流行病学调查与分析 被引量：8

10

作者 郭镇洋 赵静 +17 位作者 付军 许浒 李超 李宛生 孙琪 裴艳艳 龚帮俊 王倩 周国辉 汤艳东 冷超粮 王永杰 陈长青 安同庆 蔡雪辉 张洪亮 田志军 彭金美 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期122-128,155,共8页

为探究近几年猪伪狂犬病病毒(PRV)在我国的流行情况及遗传演化特征,本研究对2016年~2021年采自全国17个省、市和自治区的2299份临床样品经PCR检测,并利用PCR扩增阳性样品中的PRV gB、gE和gC基因并测序,采用MegAlign分析三者与GenBank登... 为探究近几年猪伪狂犬病病毒(PRV)在我国的流行情况及遗传演化特征,本研究对2016年~2021年采自全国17个省、市和自治区的2299份临床样品经PCR检测,并利用PCR扩增阳性样品中的PRV gB、gE和gC基因并测序,采用MegAlign分析三者与GenBank登录的PRV参考株相应基因序列的同源性;利用MEGA 7.0分别构建上述3个基因的遗传进化树,并采用MegAlign分析gB、gE和gC蛋白氨基酸序列的差异,分析其遗传演化及分子特征的变化。结果显示,共扩增出24份PRV阳性样品,阳性率约1.04%,且不同年份及不同地区均有PRV的检出。PRV gB、gE和gC基因序列的同源性及遗传进化分析结果显示,3个基因及其编码氨基酸序列均与2011年以来的PRV变异株同源性最高,且均属于基因Ⅱ型PRV变异株;氨基酸序列比对结果显示,与基因Ⅰ型PRV相比,所测PRV gB、gE和gC中均存在特征性氨基酸突变位点:gB氨基酸序列aa75~aa77连续缺失3个氨基酸(SPG),aa93~aa94连续插入2个氨基酸(DG);gE氨基酸序列在aa48和aa496各插入1个氨基酸(D);gC氨基酸序列在aa63~aa69连续插入7个氨基酸AAASTPA。此外,本研究通过比对国内外经典株以及2011年以来国内PRV gE蛋白的氨基酸序列,确定了不同亚型PRV(即指基因Ⅱ型PRV变异株和经典株)的分子特征即基因Ⅱ型PRV变异株:gE aa496为“D+”或aa496为“D-”+aa448“I”;基因Ⅱ型PRV经典株:gE为aa496“D-”+aa448“V/A”。上述结果表明,我国现阶段仍以基因Ⅱ型PRV变异株的流行为主,进一步明确了不同基因型和亚型PRV的分子特征,对了解我国PRV的流行现状及当前流行株的分子特征具有重要意义,为PRV诊断试剂的研发及PR的防控提供了参考。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病病毒 变异株 遗传演化 分子特征

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2015年我国部分地区2.1d新基因亚型猪瘟病毒的分子流行病学分析 被引量：10

11

作者 冯丽苹 张洪亮 +11 位作者 刘春晓 冷超粮 陈家锃 李真 彭金美 王倩 白云 张武超 安同庆 蔡雪辉 童光志 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期651-655,共5页

为了解猪瘟病毒（CSFV）在我国的流行情况，本研究对2015上半年来自4个省疑似猪瘟（csF）病料样品采用RT．PCR方法进行检测，28份样品中14份为CSFV阳性，并对这些阳性样品进行CSFVE2基因遗传进化分析。结果表明，14个病毒株中11个属于2... 为了解猪瘟病毒（CSFV）在我国的流行情况，本研究对2015上半年来自4个省疑似猪瘟（csF）病料样品采用RT．PCR方法进行检测，28份样品中14份为CSFV阳性，并对这些阳性样品进行CSFVE2基因遗传进化分析。结果表明，14个病毒株中11个属于2．1d新基因亚型，它们与CSFV代表株Shimen、HCLV和2．1b基因亚型病毒株的核苷酸同源性分别为82．8％～84．1％、81．1％～82．4％和92．6％～97．1％，氨基酸同源性分别为89．8％～91．2％、88．2％～89．8％和94．1％～98．9％，其余3个病毒株属于2．1b亚型。这些2．1d亚型新分离株在E2基因的4个氨基酸（R31、S34、K303和A331）上具有相同的分子特征。本研究结果与我们2014年CSFV流行病学研究结果一致，表明2．1d亚型病毒株已成为我国现阶段CSFV的主要流行株。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 新基因亚型 流行病学

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2017年我国输入性北美1-7-4分支PRRSV的基因组序列分析 被引量：10

12

作者 张洪亮 张文立 +10 位作者 相丽润 刘春晓 宋帅杰 汤艳东 冷超粮 彭金美 王倩 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期875-879,共5页

为揭示我国猪场中的新发猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的基因组特征及起源,本研究对辽宁省两个发病猪场检测到的两株1-7-4分支PRRSV (LNWK96和LNWK130)进行遗传演化及测序分析。遗传演化分析显示,两株1-7-4分支PRRSV在我国PRRSV基因分... 为揭示我国猪场中的新发猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的基因组特征及起源,本研究对辽宁省两个发病猪场检测到的两株1-7-4分支PRRSV (LNWK96和LNWK130)进行遗传演化及测序分析。遗传演化分析显示,两株1-7-4分支PRRSV在我国PRRSV基因分群中属于一个新亚群,即第7亚群。对LNWK96株进行了全基因组序列分析显示,与我国分离的PRRSV株的核苷酸同源性为82.3%～84.9%,与美国分离的1-7-4分支IA/2014/NADC34株的同源性最高为96.1%。重组分析显示LNWK96株是以1-7-4分支的病毒为母本株,ISU30和NADC30病毒株提供重组片段的重组病毒。推测该两株PRRSV极有可能是来自北美的输入性1-7-4分支PRRSV。本研究首次报道1-7-4分支的PRRSV在我国出现,该类病毒株在我国的流行趋势值得关注,其致病性及当前疫苗的保护效果需要进一步研究。 展开更多

关键词 PRRSV 1-7-4 重组 输入 分子特征

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高致病性PRRS活疫苗(HuN4-F112株)抗体对Ⅱ型不同亚群PRRSV的中和效果 被引量：9

13

作者 孟甄祥 安同庆 +12 位作者 陈家锃 宫大庆 冷超粮 刘飞 李登云 彭金美 孙艳 吴玉全 吴江 郭娟娟 杨永倩 童光志 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期401-404,共4页

为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)活疫苗(HuN4-F112株)诱导的抗体对II型不同亚群PRRSV的中和作用,本研究将10头PRRSV抗原、抗体阴性的6周龄仔猪,每头仔猪肌肉注射1头份疫苗(106.0TCID50/mL),每周采血并分离血清,检测该... 为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)活疫苗(HuN4-F112株)诱导的抗体对II型不同亚群PRRSV的中和作用,本研究将10头PRRSV抗原、抗体阴性的6周龄仔猪,每头仔猪肌肉注射1头份疫苗(106.0TCID50/mL),每周采血并分离血清,检测该血清对II型PRRSV第1、2、4亚群的代表病毒株勃林格PRRSV活疫苗(VR-2332株)、PRRSV活疫苗(CH-1R株)和HP-PRRSV活疫苗(HuN4-F112株)的中和效价。实验结果显示,仔猪免疫3周后开始产生针对HuN4-F112的中和抗体,11周至22周抗体水平达到高峰,抗体持续至少25周,但只有少数免疫猪在几个时间点的血清对VR-2332和CH-1R疫苗株具有血清交叉中和作用,而且中和效价较低。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 中和抗体 HuN4.F1 12

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卵黄抗体的应用及纯化研究进展 被引量：7

14

作者 李明亮 冷超粮 +2 位作者 宋安东 秦鑫鑫 阚云超 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第15期34-38,共5页

由于抗生素的滥用带来一系列环境问题,很多国家对其使用管制越来越严格,且随着科技发展,养殖业减抗无抗已逐步提上日程。卵黄抗体（immunoglobulin of yolk,IgY）因其具有无残留、不增加细菌耐药性等优点,替代抗生素的潜力巨大。文章主... 由于抗生素的滥用带来一系列环境问题,很多国家对其使用管制越来越严格,且随着科技发展,养殖业减抗无抗已逐步提上日程。卵黄抗体（immunoglobulin of yolk,IgY）因其具有无残留、不增加细菌耐药性等优点,替代抗生素的潜力巨大。文章主要介绍了IgY在人类疾病、禽病和猪病防治中的应用以及提取纯化方法研究进展。 展开更多

关键词 卵黄抗体 禽病 猪病 疾病防治 提纯

原文传递

豫西南猪主要病毒性传染病流行病学调查 被引量：6

15

作者 鲍印 翟洪月 +7 位作者 李慧敏 袁志乔 马玉静 丁雨善 阚云超 姚伦广 田志军 冷超粮 《河南农业科学》 北大核心 2021年第1期152-157,共6页

为了解豫西南地区规模化猪场主要病毒性疾病的流行情况和抗体水平,从而制订科学合理的疾病综合防控措施,采用PCR和ELISA方法对南阳、驻马店、信阳市2017—2019年57个猪场送检的723份病猪组织样品(淋巴结、肺脏、脾脏、肾脏、脑等)和247... 为了解豫西南地区规模化猪场主要病毒性疾病的流行情况和抗体水平,从而制订科学合理的疾病综合防控措施,采用PCR和ELISA方法对南阳、驻马店、信阳市2017—2019年57个猪场送检的723份病猪组织样品(淋巴结、肺脏、脾脏、肾脏、脑等)和2476份血液样品进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的抗原和抗体检测。结果表明,CSFV、PRRSV、PCV2和PRV的感染具有普遍性,病原平均阳性率分别达到了42.20%(192/455)、56.85%(328/577)、45.03%(136/302)和28.85%(73/253),且部分存在以PRRSV为主的混合感染。抗体检测结果显示,CSFV、PRRSV、PCV2、PRV gE和PRV gB抗体的平均阳性率分别为78.37%(1841/2349)、75.93%(1565/2061)、84.62%(682/806)、33.12%(627/1893)和94.00%(1504/1600)。此外,CSFV、PCV2和PRV的病原检出率在2019年大幅下降。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 猪圆环病毒2型 猪伪狂犬病病毒 病毒性传染病 流行病学调查

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一株不能被高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)疫苗抗血清中和的HP-PRRSV的分离鉴定 被引量：5

16

作者 陈家锃 白云 +11 位作者 常丹 张秋月 王倩 冷超粮 张武超 赵鸿远 叶超 李琳 田志军 彭金美 安同庆 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期174-177,共4页

为监测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的遗传变异及流行情况，本研究采用猪肺泡巨噬细胞培养分离PRRSV野毒株，从某疑似猪繁殖与呼吸综合征发病猪场的发病猪肺脏病料中分离了一株PRRSV，命名为HEL-12。并将该病毒测序分析，其基因组... 为监测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的遗传变异及流行情况，本研究采用猪肺泡巨噬细胞培养分离PRRSV野毒株，从某疑似猪繁殖与呼吸综合征发病猪场的发病猪肺脏病料中分离了一株PRRSV，命名为HEL-12。并将该病毒测序分析，其基因组序列已提交到NCBI （序列号：KJ019330）。基因序列比对显示，该分离株与经典株相比其NSP2蛋白存在HP-PRRSV 30个氨基酸缺失的典型特征，与HP-PRRSV代表株JXA1和HuN4株的同源性仅为97.3 %，其变异主要位于基因组编码的结构蛋白GP2～GP5和非结构蛋白NSP2。血清中和试验表明10份HP-PRRSV疫苗抗血清均不能中和该病毒株，表明HEL-12的抗原发生了较大变异，是一株新的HP-PRRSV变异株。本研究表明，PRRSV一直处于不断变异中，需要对其遗传变异持续监测。 展开更多

关键词 HP-PRRSV 遗传变异 病毒中和试验

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欧洲型PRRSV竞争ELISA抗体检测方法的建立及应用 被引量：5

17

作者 许浒 相丽润 +14 位作者 张文立 汤艳东 赵静 李超 龚邦俊 李宛生 付军 彭金美 王倩 周国辉 冷超粮 安同庆 蔡雪辉 张洪亮 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期617-623,共7页

为快速准确地监测1型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-1)在我国的流行情况,本研究以分子筛纯化灭活的PRRSV-1(ZD-1株)为包被抗原,利用PRRSV-1的特异性单克隆抗体(MAb EU-1)为竞争抗体,经条件优化,建立了检测PRRSV-1的竞争ELISA(EU-C-ELISA... 为快速准确地监测1型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-1)在我国的流行情况,本研究以分子筛纯化灭活的PRRSV-1(ZD-1株)为包被抗原,利用PRRSV-1的特异性单克隆抗体(MAb EU-1)为竞争抗体,经条件优化,建立了检测PRRSV-1的竞争ELISA(EU-C-ELISA)方法。反应条件优化结果显示,最佳抗原包被量为455 ng/孔,PRRSV-1 MAb EU-1的最佳稀释度为1:8。EU-C-ELISA结果判定标准:血清样品抑制率PI≥45%时判定为阳性,PI<45%判定为阴性。特异性试验结果显示,该方法仅能检测PRRSV-1阳性血清,与各谱系PRRSV-2及其他常见猪病毒和细菌阳性血清均无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法能检测出16倍稀释的阳性标准血清,并且最早可在PRRSV ZD-1株感染猪后第7 d检测到血清中PRRSV-1抗体阳转;批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%,对比试验结果显示该方法特异性和敏感性均显著优于现有试剂盒对PRRSV-1抗体的检测。利用该方法对2020年采自黑龙江、辽宁、河北、山东省10个猪场的432份临床血清样品进行检测,2个猪场检出PRRSV-1抗体阳性,猪场阳性率达20%,样品总阳性率为15.0%,显示PRRSV-1抗体已存在于我国部分地区猪群中。本研究在我国首次建立了PRRSV-1竞争ELISA抗体检测方法,为监测PRRS-1在我国的流行情况及科学防控该病提供了检测手段。 展开更多

关键词 1型猪繁殖与呼吸综合征病毒 竞争ELISA 流行病学调查

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)对类NADC30 PRRSV免疫保护效果的评价 被引量：5

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作者 张洪亮 相丽润 +13 位作者 许浒 宋帅杰 赵静 张文立 李真 汤艳东 陈家锃 冷超粮 王倩 彭金美 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期296-301,共6页

类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)已成为我国PRRSV的主要流行株,为了评价当前商品化疫苗对类NADC30 PRRSV的免疫保护效果,本研究将12头6周龄仔猪随机分为3组,免疫组和攻毒对照组各5头、空白对照组2头,免疫组肌注高致病性猪繁殖与... 类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)已成为我国PRRSV的主要流行株,为了评价当前商品化疫苗对类NADC30 PRRSV的免疫保护效果,本研究将12头6周龄仔猪随机分为3组,免疫组和攻毒对照组各5头、空白对照组2头,免疫组肌注高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)10^(5.0)TCID_(50)/头,免疫后21 d,免疫组和攻毒对照组每头各肌注2 mL和滴鼻2 mL类NADC30 PRRSV SD53-1603株(104.0TCID_(50)/mL)。攻毒后观察各组实验猪临床症状,可见攻毒对照组所有猪均发热,持续5 d9 d,免疫组仅2头猪发热1 d2 d。检测各组实验猪体重变化,结果显示,攻毒后免疫组和攻毒对照组体重增长均显著低于空白对照组(p<0.001),但攻毒14 d以后,免疫组体重增长显著高于攻毒对照组(p<0.05)。IDEXX ELISA测定各组猪血清中PRRSV的特异性抗体,结果显示免疫后14 d可以诱导免疫组仔猪产生良好的针对PRRSV的特异性抗体。利用荧光定量PCR测定血清和组织中的病毒载量,结果显示免疫组血清和组织中的病毒载量均极显著低于对照组(p<0.0001)。对PRRSV免疫后及攻毒后各组仔猪各脏器病理学观察,结果可见攻毒对照组与免疫组相比出现明显的剖检和组织病理学变化。以上结果表明,高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)对类NADC30 PRRSV可以提供一定的交叉保护,该研究为评价我国现有疫苗是否对类NADC30 PRRSV具有保护效果提供了参考依据。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 HuN4-F112 类NADC30 PRRSV 交叉保护

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2016年～2017年我国华北地区某规模化猪场经典美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及全基因组序列分析 被引量：5

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作者 刘春晓 张洪亮 +10 位作者 张文立 相丽润 李真 冷超粮 陈家锃 彭金美 王倩 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期691-696,共6页

为了解近期我国华北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及变异情况,本研究对该地区某猪场采集33份2016年~2017年疑似患PRRS猪病料样品进行PCR检测,对阳性样品进行病毒分离,并从分离株中选择两株病毒(SD158和SD192)进行全基因的序... 为了解近期我国华北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及变异情况,本研究对该地区某猪场采集33份2016年~2017年疑似患PRRS猪病料样品进行PCR检测,对阳性样品进行病毒分离,并从分离株中选择两株病毒(SD158和SD192)进行全基因的序列扩增及分析。结果显示,检测到13份PRRSV阳性病料样品,病原为经典美洲型PRRSV,但仅分离到11株病毒(4株感染MARC-145细胞,另外7株感染PAM细胞)。SD158和SD192株与Resp PRRS MLV株(疫苗株)的核苷酸同源性最高,分别为99.7%和99.4%。对这两株PRRSV与VR-2332、Resp PRRS MLV的各基因的推导氨基酸序列进行分析,结果显示在VR-2332与Resp PRRS MLV株22处差异氨基酸中,SD158株有15处、SD192株有14处氨基酸和Resp PRRS MLV株相同,但二者仅各有6处及7处氨基酸与VR-2332株一致,在鉴别PRRSV VR-2332株与Resp PRRS MLV株的7处可能与毒力相关的氨基酸位点时发现,SD158与SD192株各有5处基酸与VR-2332株相同。根据以上结果推测SD158与SD192株可能来源于PRRSV Resp PRRS MLV株,具有上述分子变化特征的PRRSV在我国的流行状况值得关注。 展开更多

关键词 经典猪繁殖与呼吸综合征病毒 病毒分离鉴定 流行病学

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中国新发L1A PRRSV变异株的出现与流行状况分析 被引量：1

20

作者 许浒 龚帮俊 +17 位作者 李超 孙琪 李宛生 赵静 郭镇洋 李金昊 张思钰 相丽润 彭金美 王倩 周国辉 冷超粮 汤艳东 赵鸿远 安同庆 蔡雪辉 张洪亮 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期779-786,共8页

2017年我国首次发现类NADC34 PRRSV,该类病毒属于L1A(Sublineage1.5)亚型。近年来,新发类NADC34 PRRSV在我国不断变异,已经成为危害我国养猪业重要的PRRSV亚型。为了确定新发类NADC34 PRRSV的流行特征,本研究从2021年~2023年37份新发类N... 2017年我国首次发现类NADC34 PRRSV,该类病毒属于L1A(Sublineage1.5)亚型。近年来,新发类NADC34 PRRSV在我国不断变异,已经成为危害我国养猪业重要的PRRSV亚型。为了确定新发类NADC34 PRRSV的流行特征,本研究从2021年~2023年37份新发类NADC34 PRRSV阳性病料样品中选择4份样品经PCR分段扩增PRRSV全基因组序列并测序,利用SeqMan软件拼接,获得了4株完整的PRRSV全基因组序列,相应的病毒分别命名为TZJ2165、TZJ2451、TZJ2756、WK621株。下载GenBank中所有中国类NADC34 PRRSV和美国L1C变异株的ORF5基因及NSP2基因序列,利用MEGA7.0构建上述PRRSV ORF5基因序列的遗传进化树,分析其遗传变异情况。利用Megalign软件分析各分支内ORF5基因序列的相似性,以及新发类NADC34 PRRSV NSP2氨基酸序列,分析其是否存在一致的氨基酸缺失特征。根据PRRSV ORF5基因的限制性片段多态性(RFLP)分类方法,对新发类NADC34 PRRSV的ORF5基因序列分类。利用Simplot软件分析新发类NADC34 PRRSV和L1C变异株全基因组序列中的重组事件。基于ORF5基因进化树结果显示,这4株新发类NADC34 PRRSV与之前分离的TZJ2007、BJ-20-06等12株PRRSV均属于L1A亚型,与早期类NADC34 PRRSV相比,这些病毒株形成了一个独立分支,将其命名为L1A变异株,且其ORF5基因序列的相似性≥93%。NSP2氨基酸序列比对分析发现,L1A变异株具有一致的131个氨基酸不连续缺失的分子特征。ORF5基因的RFLP模式分析结果显示,L1A变异株RFLP模式分为1-4-2、1-4-4、1-5-4、1-7-4和1-6-4,模式并不一致。重组分析结果显示,L1A变异株存在相似的重组模式,它们均是以NADC30株(类NADC30 PRRSV)为主要亲本,JXA1株(类HP-PRRSV)提供部分非结构蛋白基因区域、IA/2014/NADC34株(类NADC34 PRRSV)提供ORF2a~ORF6区域的重组病毒。目前L1A变异株已经在黑龙江、内蒙古、辽宁、北京、广西、江苏、四川、福建、山东、广东和山西等11个省份检出。通过� 展开更多

关键词 L1A PRRSV变异株 类NADC30 PRRSV 类NADC34 PRRSV HP-PRRSV 重组 出现与流行

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