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题名黄瓜Cu/Zn-SOD基因克隆及可溶性表达和纯化
被引量：1
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作者
陈梦瑶
冯超越
南天豪
陈星辉
冯雨彤
朱振洪
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机构
浙江中医药大学生命科学学院
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出处
《生物技术》
CAS
2019年第2期111-115,共5页
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文摘
[目的]克隆黄瓜Cu/Zn-SOD基因,并利用大肠杆菌进行可溶性表达、纯化及活性测定。[方法]采用Trizol法提取黄瓜表皮的总RNA,然后设计特异性引物,通过RT-PCR技术克隆获得黄瓜Cu/Zn-SOD基因。该基因与p GEX2T载体相连后,转化大肠杆菌BL21(DE3),摸索可溶性表达方法。利用GST亲和层析方法纯化目标蛋白,SOD酶活性测定采用邻苯三酚法。[结果]成功地克隆了全长为459 bp的黄瓜Cu/Zn-SOD基因,编码152个氨基酸。Protein Blast分析表明其结构域中分别包含Cu2+、Zn2+结合位点,为典型的Cu/Zn-SOD酶。目标蛋白可溶性表达条件是16℃、0. 1 mmol/L IPTG诱导20 h。SDS-PAGE分析表明GST亲和层析成功地获得重组黄瓜Cu/Zn-SOD。活性测定表明两次纯化的蛋白样品SOD酶活力分别为2 328. 9 U/m L、2 144. 7 U/m L。[结论]从黄瓜表皮中克隆获得Cu/Zn-SOD基因,该基因在大肠杆菌系统中获得可溶性表达,纯化后的重组蛋白具有较高的SOD酶活力。
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关键词
铜/锌-超氧化物歧化酶
基因克隆
可溶性表达
纯化
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Keywords
Cu/Zn-SOD
gene cloning
soluble expression
purification
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分类号
S642.2
[农业科学—蔬菜学]
Q943.2
[农业科学—园艺学]
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