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健脾化瘀方调控circβ-catenin/Wnt通路介导肝癌细胞上皮间质转化的机制 被引量：1
1
作者 方崇锴 王冀南 +6 位作者 刘慧琳 刘丽华 冯坤良 章颖 王俊岩 林宏通 钟崇 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期2513-2518,共6页
目的:探讨健脾化瘀方抑制肝癌细胞增殖和侵袭的作用及机制。方法:制备健脾化瘀方冻干粉,干预人肝癌HepG2细胞后,CCK-8试剂检测细胞活力,划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞的侵袭能力。qPCR检测circβ-catenin mRNA表达... 目的:探讨健脾化瘀方抑制肝癌细胞增殖和侵袭的作用及机制。方法:制备健脾化瘀方冻干粉,干预人肝癌HepG2细胞后,CCK-8试剂检测细胞活力,划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞的侵袭能力。qPCR检测circβ-catenin mRNA表达水平的变化,Western Blot检测细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达。免疫荧光检测细胞β-catenin、N-cadherin的表达情况。结果:健脾化瘀方抑制肝癌HepG2细胞的增殖,随着药物浓度的升高,细胞活力显著降低。与空载质粒(p-vector)组比较,转染circβ-catenin质粒后,细胞迁移能力和侵袭能力显著提高(P<0.01),circβ-catenin mRNA表达水平显著升高(P<0.01),Wnt2、β-catenin、Vimentin、N-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05,P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与p-vector组或circβ-catenin-OE组比较,健脾化瘀方干预后,抑制肝癌细胞发生EMT,下调Wnt2、β-catenin、Vimentin、N-cadherin蛋白水平(P<0.05,P<0.01),上调E-cadherin蛋白水平(P<0.01)。结论:健脾化瘀方能够抑制HepG2细胞的增殖及侵袭,其机制可能是通过调节circβ-catenin/Wnt通路介导EMT发挥作用。 展开更多
关键词 健脾化瘀方 肝癌 circβ-catenin WNT通路 上皮间质转化 机制 迁移 侵袭
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健脾化瘀方体外通过外泌体影响肝癌细胞的迁移、侵袭及上皮间质转化 被引量：7
2
作者 冯坤良 陈清莲 +1 位作者 谢春凤 钟崇 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1745-1751,共7页
目的探讨健脾化瘀方(JHD)通过外泌体对肝癌细胞迁移、侵袭及上皮间质转化(EMT)的影响。方法利用转化生长因子β1(TGF-β1)刺激MHCC97H细胞,构建肝癌细胞EMT模型。根据处理条件,将细胞分为4组,(1)对照组:不进行干预;(2)模型组:TGF-β1(10... 目的探讨健脾化瘀方(JHD)通过外泌体对肝癌细胞迁移、侵袭及上皮间质转化(EMT)的影响。方法利用转化生长因子β1(TGF-β1)刺激MHCC97H细胞,构建肝癌细胞EMT模型。根据处理条件,将细胞分为4组,(1)对照组:不进行干预;(2)模型组:TGF-β1(10 ng·mL^(-1));(3)JHD低浓度组:TGF-β1(10 ng·mL^(-1))+健脾化瘀方(2 mg·mL^(-1));(4)JHD高浓度组:TGF-β1(10 ng·mL^(-1))+健脾化瘀方(4 mg·mL^(-1))。干预48 h后,采用超速离心法提取各组细胞培养上清液的外泌体,通过透射电镜(TEM)、纳米颗粒追踪分析(NTA)、Western Blot法检测外泌体标志蛋白(CD63、CD81、HsP70、CD9),以及外泌体内吞实验对外泌体进行鉴定。将提取的4组外泌体分别与MHCC97H细胞共培养24 h/48 h后,分离MHCC97H细胞,进行划细胞划痕实验、Transwell细胞侵袭实验及Western Blot法检测EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)。结果透射电镜下观察到外泌体的形态呈囊泡状,分布不一,有单个分布,也有聚集成组,背景清晰,无明显污染物,各组外泌体形态相近,无明显差异,直径在30~140 nm之间;纳米颗粒追踪分析仪检测到4组外泌体粒径的峰值在130~150 nm之间,与电镜观察结果基本一致;各组均可检测到外泌体标志蛋白CD63、CD81、HsP70、CD9表达。被PKH26标记的外泌体可被MHCC97H细胞重新吸收内化。与对照组比较,模型组的MHCC97H细胞迁移能力(24、48 h)及侵袭能力均显著增强(P<0.01),E-cadherin蛋白表达显著下调(P<0.01),Vimentin、N-cadherin蛋白表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,JHD高、低浓度组的MHCC97H细胞迁移能力(24、48 h)及侵袭能力显著减弱(P<0.01),E-cadherin蛋白表达显著上调(P<0.01),Vimentin、N-cadherin蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论健脾化瘀方体外可通过外泌体抑制MHCC97H细胞的迁移、侵袭及上皮间质转化。 展开更多
关键词 健脾化瘀方 肝细胞癌 外泌体 上皮间质转化 迁移 侵袭
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健脾化瘀方对TGF-β1诱导的肝癌细胞迁移侵袭及上皮间质转化的影响 被引量：3
3
作者 谢春凤 陈清莲 +3 位作者 冯坤良 方崇锴 王冀南 钟崇 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期2270-2274,共5页
目的:探讨健脾化瘀方对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肝癌细胞MHCC-97H上皮间质转化(EMT)及侵袭转移能力的影响。方法:将不同浓度(0.5、1、2、4、8μmol/L)的健脾化瘀方作用于肝癌细胞MHCC-97H,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法评估细胞活力... 目的:探讨健脾化瘀方对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肝癌细胞MHCC-97H上皮间质转化(EMT)及侵袭转移能力的影响。方法:将不同浓度(0.5、1、2、4、8μmol/L)的健脾化瘀方作用于肝癌细胞MHCC-97H,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法评估细胞活力;TGF-β1诱导肝癌细胞建立EMT模型,倒置显微镜观察细胞形态的变化;根据加入不同浓度健脾化瘀方干预,将实验分为空白组、EMT组、EMT+健脾化瘀方2 mg/mL组(低浓度组)、EMT+健脾化瘀方4 mg/mL组(高浓度组);划痕法和Transwell实验检测肝癌细胞侵袭/迁移能力;Western Blot法检测EMT标志蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平。结果:健脾化瘀方能抑制肝癌细胞MHCC-97H的增殖,并呈一定的时间-剂量依赖关系(P<0.01)。显微镜下观察经过TGF-β1诱导后的肝癌细胞形态松散,呈梭形样改变。与空白组比较,EMT组的迁移/侵袭能力显著增强(P<0.01),给予药物干预后,高、低浓度组的迁移/侵袭能力较EMT组显著减弱(P<0.01)。与空白组比较,EMT组细胞中的E-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达显著升高(P<0.01);高、低浓度组E-cadherin蛋白表达显著上调(P<0.01),而N-cadherin和Vimentin蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论:健脾化瘀方能抑制TGF-β1诱导的肝癌细胞MHCC-97H的迁移/侵袭能力,其机制可能与抑制上皮间质转化有关。 展开更多
关键词 健脾化瘀方 肝细胞癌 上皮间质转化 转化生长因子Β1
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