大鼠肾小管上皮细胞的分离鉴定及其增殖活力分析 被引量：5

1

作者 刘朋飞 黄秀英 +6 位作者 董超 冯业童 吴昊昱 刘迪 吴璇 周余来 孙波 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期74-77,197,共4页

目的:建立一种大鼠肾小管上皮细胞的分离鉴定方法,分析所获得细胞的增殖活力,为肾损伤等肾脏疾病的体外分析实验提供理论基础和技术支持。方法:采用Ⅱ型胶原酶消化法分离肾小管节段,并用Percoll密度梯度离心法进一步纯化肾小管,常规条... 目的:建立一种大鼠肾小管上皮细胞的分离鉴定方法,分析所获得细胞的增殖活力,为肾损伤等肾脏疾病的体外分析实验提供理论基础和技术支持。方法:采用Ⅱ型胶原酶消化法分离肾小管节段,并用Percoll密度梯度离心法进一步纯化肾小管,常规条件下对肾小管节段进行贴壁培养,待细胞爬出后,用免疫组织化学方法检测细胞角质素-18(CK-18)的表达情况,采用流式细胞术对第0、1和2(P0、P1、P2)代细胞的CK-18表达情况进行分析,用CCK-8方法检测各代细胞的增殖活力。结果:肾小管节段培养24h后,可见细胞从节段内爬出;培养72h后,细胞呈铺路石样密集生长。随着传代进行,P0、P1和P2代细胞CK-18的表达效率分别为95.9%、91.5%和76.8%,肾小管上皮细胞逐渐死亡,P2代细胞较P1代细胞增殖活力明显减弱(P<0.05),同时培养体系中杂细胞增多。结论:该方法经济可靠、简便易行,但是所分离的肾小管上皮细胞只可在体外传代2次,不能长期培养,仅P0、P1代细胞可供体外分析实验使用。 展开更多

关键词 肾小管上皮细胞 分离 鉴定 增殖活力

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骨髓间充质干细胞联合维生素E对急性肾损伤炎症反应的抑制作用 被引量：4

2

作者 赵雷 冯业童 +2 位作者 董超 周余来 刘朋飞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1891-1895,1901,共6页

目的:探索骨髓间充质干细胞联合维生素E对急性肾损伤中炎症反应的抑制效果,开发针对急性肾损伤的新型治疗模式。方法:采用庆大霉素作为急性肾损伤药物,复制大鼠急性肾损伤模型,以骨髓间充质干细胞联合维生素E对急性肾损伤进行治疗,治疗... 目的:探索骨髓间充质干细胞联合维生素E对急性肾损伤中炎症反应的抑制效果,开发针对急性肾损伤的新型治疗模式。方法:采用庆大霉素作为急性肾损伤药物,复制大鼠急性肾损伤模型,以骨髓间充质干细胞联合维生素E对急性肾损伤进行治疗,治疗结束后,收集大鼠的血浆和肾脏组织,采用实时荧光定量PCR及ELISA方法,评价血浆及组织中炎症蛋白的表达。结果:通过骨髓间充质干细胞联合维生素E对大鼠急性肾损伤模型进行治疗后,大鼠血浆中的炎症蛋白显著降低;在肾脏组织中,与单一应用骨髓间充质干细胞或维生素E相比,二者联合在某些炎症蛋白的抑制方面具有更明显的效果。结论:骨髓间充质干细胞联合维生素E对急性肾损伤中炎症反应具有一定抑制效果,优于单一骨髓间充质干细胞或单一维生素E的治疗方式,所以,这种联合治疗模式在急性肾损伤的治疗方面更具有临床应用价值。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 维生素E 急性肾损伤 炎症反应

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结直肠癌细胞外泌体的制备及其促单核细胞增殖作用 被引量：4

3

作者 董超 刘迪 +4 位作者 冯业童 刘朋飞 吴璇 吴昊昱 周余来 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期472-476,共5页

目的:从结直肠癌细胞系中分离鉴定外泌体,初步研究结直肠癌来源的外泌体潜在的免疫学特性,为外泌体在结直肠癌免疫学治疗中的应用提供依据。方法:超速离心法从HCT116和SW480 2种结直肠癌细胞系培养上清中分离提取正常细胞外泌体和热休... 目的:从结直肠癌细胞系中分离鉴定外泌体,初步研究结直肠癌来源的外泌体潜在的免疫学特性,为外泌体在结直肠癌免疫学治疗中的应用提供依据。方法:超速离心法从HCT116和SW480 2种结直肠癌细胞系培养上清中分离提取正常细胞外泌体和热休克细胞外泌体,进一步用220nm的滤膜进行纯化获得纯度较高的外泌体。采用透射电镜观察所提取外泌体表征形态,聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析细胞和外泌体的蛋白组成,检测外泌体促进外周血单个核细胞(PBMCs)的增殖功能。结果:透射电镜下正常的外泌体和细胞热休克获得的外泌体形态相近,均呈现典型的圆形或椭圆形外泌体结构,直径为50～100nm。聚丙烯酰胺凝胶电泳,结直肠癌细胞裂解物与结直肠癌细胞系来源外泌体的蛋白组成不同,与未处理和经热休克处理的结直肠癌细胞比较,外泌体对PBMCs的增殖有更强的促进作用(P<0.05),热休克作用可使外泌体诱导的PBMCs的增殖程度显著升高(P<0.05)。结论 :超速离心法和滤膜过滤方法可有效地从结直肠癌细胞系中提取外泌体,细胞裂解物和外泌体的蛋白组成差异可能是造成免疫学特性差异的主要原因,将细胞经热休克处理可增强外泌体的免疫原性。 展开更多

关键词 结直肠肿瘤 外泌体 热休克 免疫治疗

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结肠癌源性exosomes的分离及其相关免疫学性质 被引量：4

4

作者 冯业童 刘朋飞 +5 位作者 吴昊昱 刘迪 董超 吴璇 周余来 孙波 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第12期1635-1637,1643,共4页

目的分离结肠癌细胞株的exosomes,并分析其在致敏抗原呈递细胞及激活相关效应细胞过程中的作用。方法差速离心法分离体外培养的正常exosomes和经热休克处理的sw1116细胞(Heat shocked sw1116,HS-sw1116)分泌的exosomes(Heat shocked exo... 目的分离结肠癌细胞株的exosomes,并分析其在致敏抗原呈递细胞及激活相关效应细胞过程中的作用。方法差速离心法分离体外培养的正常exosomes和经热休克处理的sw1116细胞(Heat shocked sw1116,HS-sw1116)分泌的exosomes(Heat shocked exosomes,HS-Exo),并在电子显微镜下观察exosomes和HS-Exo的形态结构;SDS-PAGE初步分析exosomes和HS-Exo的蛋白组分,CCK-8法检测其促外周血单个核细胞(Peripheral blood monouclear cells,PBMCs)增殖的能力。结果电子显微镜观察,exosomes和HS-Exo的形态学结构无明显差异,其平均直径约为150 nm;exosomes和HS-Exo的蛋白条带分布情况基本相同,在高相对分子质量区域蛋白分布较多;exosomes比sw1116细胞更易引起PBMCs的增殖反应,HS-sw1116细胞和HS-Exo促PBMCs增殖的作用比sw1116细胞和exosomes更明显(P<0.05)。结论结肠癌sw1116细胞株可分泌exosomes,其比肿瘤细胞更易引起PBMCs的增殖,热休克处理可进一步增强细胞和exosomes的促PBMCs增殖的能力,exosomes在结肠癌免疫治疗方面具有重要的应用价值。 展开更多

关键词 结肠癌 EXOSOMES 热休克 免疫治疗

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分子靶向药物在结直肠癌治疗方面的研究进展 被引量：2

5

作者 赵巍 陈焕 +1 位作者 冯业童 刘朋飞 《医学综述》 2012年第9期1322-1324,共3页

在消化系统中,结直肠癌是常见的恶性肿瘤,并且其发病率日渐提高。以手术为主,结合化疗、放疗的综合治疗方法,是结直肠癌的主要治疗模式,在过去和现在均发挥着不可替代的作用,但该治疗方法自身的弊端也不容忽视。而分子靶向药物的出现为... 在消化系统中,结直肠癌是常见的恶性肿瘤,并且其发病率日渐提高。以手术为主,结合化疗、放疗的综合治疗方法,是结直肠癌的主要治疗模式,在过去和现在均发挥着不可替代的作用,但该治疗方法自身的弊端也不容忽视。而分子靶向药物的出现为结直肠等肿瘤的治疗开辟了一个新方向,该药物在临床及临床前研究均取得了一定成果,已成为结直肠癌治疗的一条新途径。在此就近些年来分子靶向药物在结直肠癌治疗方面的相关进展予以综述。 展开更多

关键词 分子靶向药物 结直肠癌 靶向治疗

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NaF与H_2O_2对大鼠真皮成纤维细胞血管内皮生长因子表达的影响 被引量：2

6

作者 吴昊昱 吴璇 +6 位作者 魏振宏 刘朋飞 董超 冯业童 刘迪 石毅 孙波 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期948-951,F0003,共5页

目的:比较不同剂量的氟化钠(NaF)与过氧化氢(H2O2)对成纤维细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探索促进VEGF表达的简单有效的方法,为优化组织工程真皮培养条件提供理论参考。方法:酶消化法分离大鼠皮肤成纤维细胞,以不同剂量NaF(0.0... 目的:比较不同剂量的氟化钠(NaF)与过氧化氢(H2O2)对成纤维细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探索促进VEGF表达的简单有效的方法,为优化组织工程真皮培养条件提供理论参考。方法:酶消化法分离大鼠皮肤成纤维细胞,以不同剂量NaF(0.05和0.50 mmol.L-1)、H2O2(10 nmol.L-1和10μmol.L-1)以及两者联合(NaF 0.05mmol.L-1,H2O210μmol.L-1)分别作用于成纤维细胞,在第0、24及48h采用CCK-8法测定细胞的增殖活性,在第48小时采用ELISA法和免疫组织化学法测定其对VEGF表达的影响。结果:不同剂量NaF、H2O2以及两者联合作用对成纤维细胞增殖无抑制作用,与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);NaF实验组和H2O2实验组的VEGF表达量均明显提高,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),而NaF与H2O2两者联合作用效果最为明显,可提高40%(P<0.05)。结论:NaF与H2O2联合作用能在不影响成纤维细胞正常增殖的前提下,有效地促进VEGF的表达。 展开更多

关键词 成纤维细胞 血管内皮生长因子 氟 过氧化氢

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非灌流法分离大鼠肝星形细胞及其鉴定 被引量：1

7

作者 刘朋飞 周余来 +5 位作者 冯业童 吴昊昱 刘迪 董超 吴璇 石毅 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第9期1220-1222,共3页

目的采用非灌流法分离大鼠肝星形细胞(Hepatic stellate cell,HSC),并进行鉴定。方法采用非灌流法结合酶消化法分离大鼠肝脏细胞,密度梯度离心进一步分离HSC,油红染色检测HSC胞质中的脂滴,免疫组化法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-Smo... 目的采用非灌流法分离大鼠肝星形细胞(Hepatic stellate cell,HSC),并进行鉴定。方法采用非灌流法结合酶消化法分离大鼠肝脏细胞,密度梯度离心进一步分离HSC,油红染色检测HSC胞质中的脂滴,免疫组化法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)、结蛋白(Desmin)及神经胶质酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达。结果非灌流法结合酶消化法可成功分离大鼠HSC;密度梯度离心纯化的HSC经油红染色,细胞核周围可见红色脂滴;该细胞中α-SMA、结蛋白及GFAP的免疫组化染色结果均呈阳性,细胞着色率可达90%以上。结论成功建立了大鼠HSC的非灌流分离模式,所获得的HSC纯度较高,该方法稳定简便,具有一定的推广应用价值。 展开更多

关键词 肝星形细胞 非灌流 细胞分离

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Exosomes的生物学特性及其在肿瘤免疫治疗中应用的研究进展 被引量：1

8

作者 冯业童 刘朋飞 +1 位作者 董超 周余来 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第7期925-928,共4页

Exosomes是一种由活细胞分泌到细胞外的膜性小囊泡,来源于多囊体,大小为50～100 nm。Exosomes表面有大量与其结构和功能密切相关的蛋白质和脂质成分,多种细胞均可分泌Exosomes。Exosomes具有多种重要功能,尤其对肿瘤的免疫治疗具有重要... Exosomes是一种由活细胞分泌到细胞外的膜性小囊泡,来源于多囊体,大小为50～100 nm。Exosomes表面有大量与其结构和功能密切相关的蛋白质和脂质成分,多种细胞均可分泌Exosomes。Exosomes具有多种重要功能,尤其对肿瘤的免疫治疗具有重要作用。树突细胞和肿瘤细胞来源的Exosomes在肿瘤免疫治疗方面具有良好的治疗效果,已成为近年来肿瘤学研究的一个热点。本文对Exosomes的生物起源、生物学特性、生理功能及其在肿瘤诊断和免疫中的作用机制作一综述。 展开更多

关键词 EXOSOMES 肿瘤 免疫治疗

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诱导性多能干细胞重编程诱导方式的研究进展

9

作者 赵巍 陈焕 +1 位作者 冯业童 刘朋飞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第5期653-656,共4页

2006年,研究人员将4个转录因子(Oct4、Sox2、cMyc和Klf4)通过逆转录病毒导入已分化的小鼠皮肤成纤维细胞,进而获得了类似于胚胎干细胞的多能性干细胞,称之为"诱导性多能干细胞"(Induced pluripotent stem cells,iPS cells)。... 2006年,研究人员将4个转录因子(Oct4、Sox2、cMyc和Klf4)通过逆转录病毒导入已分化的小鼠皮肤成纤维细胞,进而获得了类似于胚胎干细胞的多能性干细胞,称之为"诱导性多能干细胞"(Induced pluripotent stem cells,iPS cells)。这种方法可稳定地将高度分化的成体细胞重编程为具有多能性的干细胞,应用于疾病治疗,可避免传统胚胎干细胞应用所受到的伦理道德等社会因素的限制。因此,该技术的诞生在很大程度上推进了干细胞理论及临床应用研究的发展。目前,有多种途径诱导体细胞重编程为iPS细胞,本文就近年iPS细胞重编程的诱导方式作一简要综述。 展开更多

关键词 多能干细胞 重编程 诱导方式

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牙髓干细胞在再生医学中的研究进展

10

作者 郑伟 刘朋飞 +2 位作者 冯业童 董超 周余来 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1997-1998,共2页

干细胞是一类具有自我复制能力和一定分化潜能的细胞,在一定条件下,它可以分化成多种具有不同功能的细胞。根据干细胞所处的发育阶段及其功能学特性,可将其进一步分为胚胎干细胞和成体干细胞。因此,干细胞在组织工程、再生医学中有着重... 干细胞是一类具有自我复制能力和一定分化潜能的细胞,在一定条件下,它可以分化成多种具有不同功能的细胞。根据干细胞所处的发育阶段及其功能学特性,可将其进一步分为胚胎干细胞和成体干细胞。因此,干细胞在组织工程、再生医学中有着重要的应用价值。目前。 展开更多

关键词 牙髓干细胞 再生医学 分化

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过表达IGF-1对脐带间充质干细胞氧化损伤的抑制作用

11

作者 赵雷 陈昕 +1 位作者 冯业童 刘朋飞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期160-166,共7页

目的:分析过表达胰岛素样生长因子1(IGF-1)对脐带间充质干细胞(UC-MSCs)氧化损伤的抑制作用,开发UC-MSCs新的应用模式。方法:通过酶消化法,从脐带组织中分离UC-MSCs,并采用流式细胞术对细胞的表面特异标志物进行鉴定,通过逆转录病毒感... 目的:分析过表达胰岛素样生长因子1(IGF-1)对脐带间充质干细胞(UC-MSCs)氧化损伤的抑制作用,开发UC-MSCs新的应用模式。方法:通过酶消化法,从脐带组织中分离UC-MSCs,并采用流式细胞术对细胞的表面特异标志物进行鉴定,通过逆转录病毒感染体系,构建过表达IGF-1的UC-MSCs(UC-MSCs-IGF-1),并进一步通过实时荧光定量PCR和流式细胞术对UC-MSCs-IGF-1的IGF-1表达水平进行评价,同时分析UC-MSCs-IGF-1的表面标志物及成骨成脂分化能力;用不同浓度的H_2O_2(0μmol/L、10μmol/L、50μmol/L和100μmol/L)处理细胞,分析UC-MSCs-IGF-1在增殖活力维持、抗氧化损伤和抗凋亡方面的优势。结果:UC-MSCs表面标志物CD29、CD90和CD105的表达均呈阳性,而CD34的表达为阴性,符合正常间充质干细胞的表型特征;实时荧光定量PCR和流式细胞术结果表明,应用逆转录病毒感染体系构建的UC-MSCs-IGF-1在IGF-1表达方面远高于正常UC-MSCs,同时干细胞表型与UC-MSCs一致,且具备正常的成脂成骨分化能力;在H_2O_2的氧化损伤作用下,与UC-MSCs相比,UC-MSCs-IGF-1具有较强的增殖活力和抗氧化、抗凋亡功能,同时细胞中的SOD活性略高于UC-MSCs。结论:过表达IGF-1对UC-MSCs的氧化损伤及氧化引起的凋亡均具有一定的防护作用,与正常UC-MSCs相比,UC-MSCsIGF-1可能在临床应用方面具有一定的优势。 展开更多

关键词 脐带间充质干细胞 胰岛素样生长因子1 氧化损伤 细胞凋亡

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诱导性多能干细胞免疫原性的研究进展

12

作者 赵巍 冯业童 刘朋飞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第7期1040-1042,1046,共4页

2006年,研究人员将一系列转录因子导入小鼠成纤维细胞中,诱导出了一种类似于胚胎干细胞状态的细胞,称为"诱导性多能干细胞"(induced pluripotent stem cell,简称iPS细胞)。iPS细胞在具有高度自我更新和分化能力的同时,进一步... 2006年,研究人员将一系列转录因子导入小鼠成纤维细胞中,诱导出了一种类似于胚胎干细胞状态的细胞,称为"诱导性多能干细胞"(induced pluripotent stem cell,简称iPS细胞)。iPS细胞在具有高度自我更新和分化能力的同时,进一步避免了传统胚胎干细胞的伦理学问题,特别是该技术使干细胞自体化移植更易实现,在很大程度上推进了干细胞技术的临床应用。目前,在iPS细胞的诱导方式和诱导效率方面,已取得了较大进展,但在iPS细胞的诱导过程以及再分化过程中,细胞针对于自体的免疫原性是否发生改变,目前尚不明确。本文就近年来iPS细胞免疫原性的研究进展作一简要综述。 展开更多

关键词 诱导性多能干细胞 重编程 再分化 免疫原性

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骨髓间充质干细胞在肾衰竭治疗方面的研究进展

13

作者 王海霞 赵巍 +1 位作者 冯业童 刘朋飞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期574-577,共4页

肾衰竭(kidney failure,KF)是临床常见肾脏疾病,常由肾毒性物质或肾脏严重缺血等因素引起,根据其发病时程,可进一步分为急性肾衰竭(acute kidney failure,AKF)和慢性肾衰竭(chronic kidney failure,CKF)。近年来,随着各项医疗技术的发展... 肾衰竭(kidney failure,KF)是临床常见肾脏疾病,常由肾毒性物质或肾脏严重缺血等因素引起,根据其发病时程,可进一步分为急性肾衰竭(acute kidney failure,AKF)和慢性肾衰竭(chronic kidney failure,CKF)。近年来,随着各项医疗技术的发展,许多疾病均得到了有效控制,但是,KF这种疾病尚未得到有效治疗,相关的死亡率也未得到明显改善,其发病率甚至有逐年增高的趋势。目前,相关研究表明,骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)对KF具有一定的治疗作用。本文就近年来BMSCs在KF治疗方面的研究进展作一综述。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 肾衰竭 生物治疗

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牙周膜干细胞在再生医学中的研究进展

14

作者 郑伟 刘朋飞 +2 位作者 冯业童 董超 周余来 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1546-1548,共3页

牙周膜干细胞（periodontalligamentstemcell，pDLSC）是来源于牙周膜的一类成体干细胞，具有较强的自我更新能力，并且可以进一步分化成为多种具有不同功能特性的细胞。目前研究表明，牙周组织疾病在中老年人中具有较高的发生率，PDLS... 牙周膜干细胞（periodontalligamentstemcell，pDLSC）是来源于牙周膜的一类成体干细胞，具有较强的自我更新能力，并且可以进一步分化成为多种具有不同功能特性的细胞。目前研究表明，牙周组织疾病在中老年人中具有较高的发生率，PDLSC在维持牙周膜功能稳定、修复牙源组织损伤和实现功能性细胞更新等方面具有重要意义，该类成体干细胞是牙周组织再生最为直接可靠的一类种子细胞，也是牙周组织疾病细胞治疗和基因治疗模式最为重要的细胞学基础，在组织工程与再生医学中有着重要的应用前景。 展开更多

关键词 牙周膜干细胞 再生医学 分化

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