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塞内卡病毒广西分离株的初步分离与鉴定 被引量：3
1
作者 牛晨霞 王豪 +10 位作者 农作荣 全东群 曾悦 任同伟 王玉旭 王景隆 刘畅 陈樱 欧阳康 黄伟坚 韦祖樟 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第2期20-26,共7页
为了确诊一例疑似SVA感染的临床病例,本试验将从广西地区某猪场母猪和肥育猪鼻及蹄部采集的出现典型水泡性病变的猪水泡液进行无菌处理后接种PK-15细胞,连续传代培养,通过细胞病变、RT-PCR扩增、基因序列测定、TCID_(50)和间接免疫荧光... 为了确诊一例疑似SVA感染的临床病例,本试验将从广西地区某猪场母猪和肥育猪鼻及蹄部采集的出现典型水泡性病变的猪水泡液进行无菌处理后接种PK-15细胞,连续传代培养,通过细胞病变、RT-PCR扩增、基因序列测定、TCID_(50)和间接免疫荧光等方法对分离得到的病毒进行鉴定。结果显示:该病毒株在PK-15细胞上生长良好,可见明显细胞病变;接种PK-15细胞进行TCID_(50)测定,病毒滴度达到10^(-6.75)/mL;间接免疫荧光试验结果显示,接种第4代细胞培养物的BHK-21细胞出现特异的绿色荧光;扩增和测定了VP1基因序列后进行同源性及遗传进化分析,发现该毒株与Senecavirus病毒属中的病毒成员同源性最高,与之前2017年报道的广东分离株SVA-CH-GDYS02-2017和SVA-CH-GDLZ01-2017位于较近的进化分支内。以上结果表明,已成功从样品中分离到了SVA,且该毒株可以在PK-15和BHK-21细胞上进行增殖。本研究成功分离到一株SVA,为后续塞内卡病毒的诊断和疫苗研制提供试验材料。 展开更多
关键词 塞内卡病毒 水疱性疾病 分离鉴定 序列分析
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A型塞内卡病毒VP1蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备 被引量：3
2
作者 农作荣 王豪 +8 位作者 牛晨霞 全东群 曾悦 任同伟 王玉旭 陈樱 欧阳康 黄伟坚 韦祖樟 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第1期120-126,共7页
A型塞内卡病毒(SVA)是一种新发传染病病原。研究旨在对SVA的衣壳蛋白VP1进行原核表达,并制备其多克隆抗体。以SVA广西分离株SVA-GX01(GenBank登录号:MK039162)RNA为模版,通过RT-PCR扩增结构蛋白VP1基因,构建重组质粒pET-32a-VP1并转化... A型塞内卡病毒(SVA)是一种新发传染病病原。研究旨在对SVA的衣壳蛋白VP1进行原核表达,并制备其多克隆抗体。以SVA广西分离株SVA-GX01(GenBank登录号:MK039162)RNA为模版,通过RT-PCR扩增结构蛋白VP1基因,构建重组质粒pET-32a-VP1并转化表达菌株大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。在非变性条件下,将纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。纯化的多克隆抗体进行间接ELISA测定效价,同时进行Western blot与间接免疫荧光分析。结果表明,重组蛋白pET-32a-VP1在大肠杆菌BL21(DE3)以可溶性与包涵体两种形式表达,分子量约为49 kDa。纯化后多克隆抗体效价高达1∶64000。Western blot与间接免疫荧光(IFA)分析显示,多克隆抗体能跟SVA抗原特异性结合。重组SVA-VP1蛋白及其多克隆抗体的成功制备为猪塞内卡病毒血清学检测方法的建立提供了良好的生物材料。 展开更多
关键词 A型塞内卡 结构蛋白 VP1 原核表达 多克隆抗体
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2016—2021年广西部分地区猪盖他病毒血清学回顾性调查 被引量：1
3
作者 闵湘菱 任同伟 +5 位作者 农作荣 王豪 陈樱 欧阳康 黄伟坚 韦祖樟 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第5期145-151,共7页
为了解近几年广西壮族自治区地区猪盖他病毒(GETV)的感染和流行情况。本研究从广西壮族自治区12个市区的61个猪场收集来自2016—2021年的猪血清样品574份,采用中和试验(NT)方法进行GETV血清流行病学调查。NT结果表明,阳性猪场26个,猪场... 为了解近几年广西壮族自治区地区猪盖他病毒(GETV)的感染和流行情况。本研究从广西壮族自治区12个市区的61个猪场收集来自2016—2021年的猪血清样品574份,采用中和试验(NT)方法进行GETV血清流行病学调查。NT结果表明,阳性猪场26个,猪场阳性率为42.62%,有10个市区的129份血清为GETV中和抗体阳性,血清总体阳性率为22.47%,几何平均效价(GMT)为1∶141.76。百色市GETV中和抗体阳性率显著高于梧州市、来宾市、柳州市(P<0.05),河池市、防城港市、玉林市、百色市阳性血清GMT显著高于钦州市、桂林市、梧州市、南宁市(P<0.05);检测样品中2021年GETV中和抗体阳性率显著高于2016—2019年和2020年(P<0.05),2016—2019年阳性血清GMT显著高于2020年和2021年(P<0.05)。选择NT法结果中GETV中和抗体阳性样品129份,阴性样品190份,用IFA法重新检测是否有GETV抗体,两种方法针对阳性和阴性结果的Kappa系数为0.746(μ=13.32,P<0.01),一致性强度好。以上结果表明,广西壮族自治区部分地区猪场可能已经存在着GETV的感染,不同地区阳性率存在差异,部分地区猪群GETV中和抗体效价较高,有必要做好该地区GETV的监测及防控。 展开更多
关键词 盖他病毒 中和试验 间接免疫荧光试验 血清流行病学调查
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表达O型口蹄疫病毒VP1蛋白的重组塞内卡病毒的构建与鉴定 被引量：1
4
作者 黄凯 王豪 +7 位作者 牛晨霞 农作荣 莫勇芳 刘文波 陈樱 欧阳康 黄伟坚 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2023年第1期1-7,共7页
A型塞内卡病毒(SVA)是近年来新流行的一种传染性病原,与口蹄疫病毒(FMDV)具有相似的基因组结构,所致临床症状也十分相似。为了研发一种新型的基因工程活载体疫苗,用于预防塞内卡病毒感染和口蹄疫,以SVA全长感染性克隆pSVA-GX01为基础,在... A型塞内卡病毒(SVA)是近年来新流行的一种传染性病原,与口蹄疫病毒(FMDV)具有相似的基因组结构,所致临床症状也十分相似。为了研发一种新型的基因工程活载体疫苗,用于预防塞内卡病毒感染和口蹄疫,以SVA全长感染性克隆pSVA-GX01为基础,在SVA 2A与2B基因之间插入O型FMDV的VP1基因,经双酶切及测序鉴定,成功获得了重组质粒pSVA-FMDV-VP1-O。将重组质粒转染BHK-21细胞,拯救获得重组病毒rSVA-FMDV-VP1-O,间接免疫荧光试验鉴定显示,该重组病毒可在细胞中表达O型FMDV的VP1蛋白。对该重组病毒进行体外生长增殖特性以及遗传稳定性分析表明,重组毒株和亲本毒株在BHK-21细胞上具有相似的增殖特性,插入的FMDV VP1基因可在细胞传代过程中稳定存在6代。研究结果为开发以塞内卡病毒为载体构建表达口蹄疫病毒VP1蛋白的重组基因工程活载体疫苗提供了参考。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒 口蹄疫病毒 VP1蛋白 重组病毒
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盖他病毒Cap和E2蛋白多克隆抗体的制备
5
作者 莫清荣 任同伟 +6 位作者 农作荣 王豪 黄静 陈樱 欧阳康 黄伟坚 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2022年第9期44-49,共6页
为了制备盖他病毒(Getah virus,GETV)结构蛋白Cap和E2的多克隆抗体,将Cap和E2克隆到原核表达载体pET-32a中,然后将构建的表达质粒pET-32a-Cap/E2转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导蛋白表达,非变性条件下用Ni-NTA琼脂糖树脂纯化... 为了制备盖他病毒(Getah virus,GETV)结构蛋白Cap和E2的多克隆抗体,将Cap和E2克隆到原核表达载体pET-32a中,然后将构建的表达质粒pET-32a-Cap/E2转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导蛋白表达,非变性条件下用Ni-NTA琼脂糖树脂纯化重组pET-32a-Cap/E2蛋白。用纯化的重组蛋白多次接种新西兰大白兔,从而制备多克隆抗体,后续进行效价测定、Western blot与间接免疫荧光试验(IFA)验证抗体与病毒蛋白的反应。结果表明,Western blot与IFA显示制备的兔多克隆抗体能够与GETV抗原特异性结合;效价测定表明了制备的兔多克隆抗体Cap和E2效价均可达到1∶64000。研究制备的多克隆抗体特异性良好,为GETV检测制剂的研发提供了良好的生物材料,为GETV蛋白功能的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 盖他病毒 CAP蛋白 E2蛋白 原核表达 多克隆抗体
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