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锡兰钩虫HPI基因的原核表达与生物信息学分析 被引量：1
1
作者 黄岳 刘云秋 +4 位作者 颜欣欣 杭建雄 冉荣坤 孙永祥 李国清 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期706-710,共5页
目的克隆表达锡兰钩虫血小板抑制剂(hookworm platelet inhibitor, HPI)基因,并研究其编码蛋白的生物学特性。方法 以锡兰钩虫cDNA 为模板,参考已公布的犬钩虫血小板抑制剂(AcaHPI)基因序列设计特异性引物,运用RT-PCR 扩增其AceHPI基因... 目的克隆表达锡兰钩虫血小板抑制剂(hookworm platelet inhibitor, HPI)基因,并研究其编码蛋白的生物学特性。方法 以锡兰钩虫cDNA 为模板,参考已公布的犬钩虫血小板抑制剂(AcaHPI)基因序列设计特异性引物,运用RT-PCR 扩增其AceHPI基因序列,并将其连接至pET-28a表达载体,诱导其表达并纯化。利用在线软件对其编码蛋白的氨基酸序列进行同源性比对和生物信息学分析。结果 锡兰钩虫AceHPI基因的ORF序列全长603 bp,编码200个氨基酸,与犬钩虫AcaHPI氨基酸序列同源性为91%。构建的重组表达质粒pET28a-AceHPI经诱导表达与纯化,获得了分子质量约为26 kDa的可溶性融合蛋白。预测分析表明该蛋白为疏水蛋白,前17个氨基酸为信号肽序列且无跨膜结构域。结论 成功克隆表达了AceHPI基因并对其编码氨基酸进行了生物信息学分析,为进一步研究AceHPI在感染宿主体内的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 锡兰钩虫 钩虫血小板抑制剂 原核表达 序列分析
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锡兰钩虫TIMP基因的序列分析与原核表达 被引量：1
2
作者 颜欣欣 杭建雄 +7 位作者 刘云秋 黄岳 冉荣坤 赵琪 何龙 李秀 刘菊玫 李国清 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期969-972,共4页
为表达锡兰钩虫金属蛋白酶组织抑制剂(Ace-TIMP)重组蛋白,本实验根据GenBank中锡兰钩虫TIMP (ANCCEY-04405)基因序列设计引物扩增犬源锡兰钩虫Ace-TIMP基因,利用生物信息学软件对其序列鉴定;根据编码的氨基酸序列进行遗传进化关系分析;... 为表达锡兰钩虫金属蛋白酶组织抑制剂(Ace-TIMP)重组蛋白,本实验根据GenBank中锡兰钩虫TIMP (ANCCEY-04405)基因序列设计引物扩增犬源锡兰钩虫Ace-TIMP基因,利用生物信息学软件对其序列鉴定;根据编码的氨基酸序列进行遗传进化关系分析;构建其重组表达质粒p ET-32a-Ace-TIMP-MP,转化大肠杆菌,并经诱导表达。结果显示,Ace-TIMP基因ORF为648 bp,编码215个氨基酸,包含16个氨基酸的信号肽,具有TIMP家族Cys-X-Cys特征性序列。进化树分析显示Ace-TIMP与犬钩虫TMP-2位于同一分支。经诱导表达与纯化,获得了分子质量约为42 ku的可溶性融合蛋白。本实验克隆了Ace-TIMP基因并利用原核表达系统表达了可溶性的重组蛋白,为Ace-TIMP生物学活性的研究和免疫潜能的评价奠定了基础。 展开更多
关键词 锡兰钩虫 金属蛋白酶组织抑制剂 基因克隆 原核表达 序列分析
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锡兰钩虫谷胱甘肽-S-转移酶基因的克隆表达与免疫原性分析 被引量：1
3
作者 杭建雄 黄岳 +7 位作者 颜欣欣 刘云秋 赵琪 何龙 冉荣坤 李秀 刘菊枚 李国清 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1361-1365,共5页
为了克隆表达锡兰钩虫谷胱甘肽-S-转移酶(Ace-GST)基因,制备多克隆抗体并分析其免疫原性,为疫苗候选分子的筛选奠定基础。根据GenBank上锡兰钩虫GST基因序列设计引物,利用RT-PCR法扩增Ace-GST基因,将扩增产物克隆至pET-32a载体并转入E.c... 为了克隆表达锡兰钩虫谷胱甘肽-S-转移酶(Ace-GST)基因,制备多克隆抗体并分析其免疫原性,为疫苗候选分子的筛选奠定基础。根据GenBank上锡兰钩虫GST基因序列设计引物,利用RT-PCR法扩增Ace-GST基因,将扩增产物克隆至pET-32a载体并转入E.coli BL21(DE3)宿主菌表达,重组蛋白纯化后免疫昆明小鼠,分别用间接ELISA法和MTT法检测免疫鼠血清IgG抗体水平与脾淋巴细胞增殖情况。结果显示Ace-GST基因ORF全长468 bp,编码155个氨基酸,与ν类GSTs聚为同一分支;重组Ace-GST相对分子质量为36000,可诱导产生特异性IgG抗体,并能显著刺激免疫小鼠脾淋巴细胞增殖。结果表明重组Ace-GST蛋白能诱导昆明小鼠产生特异性免疫应答,具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 锡兰钩虫 谷胱甘肽-S-转移酶 基因克隆 原核表达 免疫原性
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