CXC族趋化因子5在肝癌细胞中的表达及其作用 被引量：6

1

作者 徐晓晶 杨毕伟 +3 位作者 公方晓 黄佩新 吴伟忠 夏景林 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第38期2716-2719,共4页

目的探讨CXC族趋化因子（CXCL）5在肝癌细胞中的表达及其对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法利用实时定量PCR（RT—PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测4种转移潜能依次递增的肝癌细胞（HepG2、SMMC7721、MHCC97L和MHCC97H）中CX... 目的探讨CXC族趋化因子（CXCL）5在肝癌细胞中的表达及其对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法利用实时定量PCR（RT—PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测4种转移潜能依次递增的肝癌细胞（HepG2、SMMC7721、MHCC97L和MHCC97H）中CXCL5的mRNA和蛋白水平；选取低表达CXCL5的HepG2细胞为实验对象，接受外源性CXCL5刺激；实验分4组：CXCL5浓度分别为0、0．1、1．0、10．0nmol／L；利用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖情况；利用Transwell小室和基质胶观察CXCL5对细胞迁移和侵袭的影响。采用SPSS16．0统计软件进行数据分析，多组均数之间比较采用单因素方差分析（ANOVA），两两比较采用LSD检验。结果HepG2、SMMC7721、MHCC97L和MHCC97H中CXCL5的mRNA相对表达量分别为：0．002％±0．000％、0．005％±0．000％、1．030％±0．070％、0．980％±0．190％（F=33．88，P〈0．01）；蛋白分泌量分别为：14．3±0．4、25．7±1．4、82．8±3．2、98．94-1．7（F：447．08，P〈0．01）。CCK-8结果示细胞增殖随CXCL5浓度升高而增强，但差异无统计学意义（F〈1．00，P〉0．05）；0、0．1、1．0、10．0nmol／L组迁移细胞数分别为（29±3）、（56±16）、（113±7）、（130±15）个（F=51．94，P〈0．01）；侵袭细胞数分别为（17．3±1．8）、（33．0±3．2）、（65．7±4．4）、（94．3±3．5）个（F=104．13，P〈0．01）。结论转移潜能高的肝癌细胞能够高表达CXCL5；转移潜能低的肝癌细胞在受到外源性CXCL5刺激后，细胞增殖、迁移和侵袭能力均升高，提示CXCL5可能与肝癌的转移有关。 展开更多

关键词 癌 肝细胞 细胞运动 肿瘤侵润 趋化因子 CXC

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微小RNA-224通过靶向抑制p21参与调控脂多糖诱导的肺微血管内皮细胞损伤研究 被引量：5

2

作者 洪军 刘景全 +5 位作者 公方晓 江玲芝 莫世静 陈敏华 杨向红 孙仁华 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期81-83,共3页

目的探讨miR-224在脂多糖(LPS)诱导的肺微血管内皮细胞(PMVEC)损伤中的作用及机制。方法分离清洁级BALB/c小鼠(购自浙江大学实验动物中心)原代PMVEC并体外培养,使用1.0 mg/L LPS处理PMVEC以诱导细胞损伤。通过转染miR-224抑制序列或p21... 目的探讨miR-224在脂多糖(LPS)诱导的肺微血管内皮细胞(PMVEC)损伤中的作用及机制。方法分离清洁级BALB/c小鼠(购自浙江大学实验动物中心)原代PMVEC并体外培养,使用1.0 mg/L LPS处理PMVEC以诱导细胞损伤。通过转染miR-224抑制序列或p21的小干扰RNA(siRNA)序列分别下调PMVEC的微小RNA-224(miR-224)及p21表达水平。采用细胞计数试剂盒法及流式细胞仪检测PMVEC的细胞活力变化及凋亡率变化。实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测PMVEC的miR-224及p21表达水平。使用双荧光素酶报告实验分析miR-224及p21的靶向关系。两组间的均数比较采用t检验,多组间的均数两两比较在采用单因素方差分析基础上使用最小显著差异法(LSD)检验。结果与未经任何处理的PMVEC比较,LPS处理后细胞相对细胞活力降低至(42.333±7.586)%,凋亡率提高至(32.141±2.449)%,miR-224表达增加至1.791±0.167,p21 mRNA水平降低至0.527±0.058,以上差异有统计学意义(t=8.532、7.261、7.113及8.467,P值均<0.01)。与单纯LPS处理的细胞比较,miR-224下调的细胞在LPS处理后的相对细胞活力增加且凋亡率显著降低,差异有统计学意义(F=62.618、32.643,P<0.01)。抑制p21表达会消除miR-224下调带来的这种保护作用。结论miR-224可能通过靶向抑制p21参与调控LPS诱导的PMVEC损伤。抑制miR-224可能有助于脓毒症后急性肺损伤或急性呼吸窘迫综合征的防治。 展开更多

关键词 脓毒症 脂多糖 内皮细胞 急性肺损伤 急性呼吸窘迫综合征 微小RNA P21

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LncRNA TUG1通过调控microRNA-132-3p/SIRT1减轻脂多糖诱导的小肠上皮细胞损伤 被引量：4

3

作者 刘景全 邵自强 +6 位作者 林宗斌 蔡涵晖 公方晓 莫世静 洪军 杨向红 孙仁华 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期435-442,共8页

目的探讨LncRNA-TUG1在脂多糖(LPS)诱导的小肠黏膜上皮细胞损伤中的作用和机制。方法使用LPS处理HIEC-6人类小肠黏膜上皮细胞24 h构建脓毒症损伤模型。全转录组RNA测序分析LPS处理后HIEC-6细胞中的mRNA、microRNA及lncRNA表达变化。实... 目的探讨LncRNA-TUG1在脂多糖(LPS)诱导的小肠黏膜上皮细胞损伤中的作用和机制。方法使用LPS处理HIEC-6人类小肠黏膜上皮细胞24 h构建脓毒症损伤模型。全转录组RNA测序分析LPS处理后HIEC-6细胞中的mRNA、microRNA及lncRNA表达变化。实时荧光定量(qRT-PCR)及western blot检测LncRNA-TUG1、microRNA-132-3p(miR-132-3p)、SIRT1 mRNA及SIRT1蛋白的表达在LPS处理后HIEC-6细胞中的表达变化。体外转染技术改变LncRNA-TUG1、microRNA-132-3p及SIRT1的表达水平。qRT-PCR及western blot分析LncRNA-TUG1对miR-132-3p及SIRT1的表达调控。CCK-8及流式细胞术分析LncRNA-TUG1、miR-132-3p及SIRT1对HIEC-6细胞增殖和凋亡的影响。双荧光素酶报告分析验证LncRNA-TUG1、miR-132-3p及SIRT1之间的靶向关系。统计学分析采用SPSS 17.0进行,两组间的差异比较采用独立样本t检验。结果RNA测序结果显示LPS处理后的HIEC-6细胞中出现LncRNA-TUG1及SIRT1表达降低(t=3.26,P<0.05以及t=2.55,P<0.05),但是miR-132-3p表达升高(t=4.12,P<0.05)。在体外细胞实验中,LPS处理后HIEC-6细胞后,LncRNA-TUG1及SIRT1表达降低(t=5.69,P<0.05以及t=5.712,P<0.05),而miR-132-3p表达升高(t=3.88,P<0.05)。LncRNA-TUG1过表达能够增加LPS处理后细胞的增殖率(t=6.55,P<0.05)同时降低其凋亡率(t=3.94,P<0.05)。上调LncRNA-TUG1可以降低miR-132-3p的表达(t=4.66,P<0.05),同时增加SIRT1 mRNA(t=3.91,P<0.05)及蛋白的水平。转染miR-132-3p mimic可以抑制SIRT1 mRNA(t=4.08,P<0.05)及蛋白的水平。在LPS处理的细胞中,与仅转染pcDNA3.1-LncRNA-TUG的细胞相比,共转染miR-132-3pmimic和siRNA-SIRT1的细胞增殖率较低(t=4.55,P<0.05以及t=5.67,P<0.05),凋亡率较高t=3.90,P<0.05以及t=4.22,P<0.05)。结论lncRNA-TUG1可能作为ceRNA调控miR-132-3p/SIRT1从而减轻LPS造成的HIEC-6细胞损伤。干预lncRNA-TUG1/microRNA-132-3p/SIRT1调控通路可能成为防治脓毒症引起小肠损伤的潜在策略。 展开更多

关键词 脓毒症 lncRNA MICRORNA 小肠上皮细胞 脂多糖 竞争性内源RNA SIRT1 增殖 凋亡

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let-7c对HCCLM3细胞增殖的影响 被引量：4

4

作者 公方晓 夏景林 +2 位作者 杨毕伟 徐晓晶 吴伟忠 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期853-856,共4页

目的用瞬时转染的方法研究let-7c对人肝癌细胞HCCLM3增殖的影响并探讨其机制。方法用脂质体2000将miRNA转染人人肝癌细胞HCCLM3，设let-7c组转染let-7c，设对照组转染阴性对照miRNA，设空白组不做任何转染。用细胞计数试剂盒CCK-8检测... 目的用瞬时转染的方法研究let-7c对人肝癌细胞HCCLM3增殖的影响并探讨其机制。方法用脂质体2000将miRNA转染人人肝癌细胞HCCLM3，设let-7c组转染let-7c，设对照组转染阴性对照miRNA，设空白组不做任何转染。用细胞计数试剂盒CCK-8检测转染后细胞生长增殖的变化，用流式细胞术检测各组细胞周期分布的差异。用Westernblot和实时荧光PCR检测转染后细胞周期蛋白（cyclin）D1及其mRNA表达的变化。多组数据的两两比较采用LSD法。结果let-7c组细胞在转染后48、72h时的吸光度值分别为0．70±0．05、0．77±0．09，低于空白组的0．97±0．10、1．21±0．12和对照组的0．91±0．07、1．12±0．09，各组比较，F值分别为14．431、21．146，P值均〈0．01，差异均有统计学意义。转染后72h，let-7c使癌细胞处在Gt期的细胞比例增加。空白组、对照组、let-7c组G1期的细胞比例分别为43．53％±0．86％、44．82％±0．77％、54．52％±0．13％，各组比较，F=240．739，P〈0．01，差异有统计学意义。let-7c能抑制cyclinD1及其mRNA的表达，空白组、对照组、let-7c组cyclinD1的表达水平分别为0．48±0．09、0．47±0．06、0．23±0．06，各组比较，F=11．316，P〈0．01，差异有统计学意义；mRNA的相对表达量分别为1．03％±0．29％、1．01％±0．11％、0．63％±0．14％，各组比较，F=6．315，P〈0．05，差异有统计学意义。结论let-7c能抑制HCCLM3细胞的增殖，并使细胞停留在G1期的细胞比例增加。导致这种现象的机制可能为let-7c抑制cyclin D1及其mRNA的表达。 展开更多

关键词 癌 肝细胞 细胞周期蛋白D1 细胞增殖

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MicroRNA与肿瘤干细胞 被引量：3

5

作者 公方晓 夏景林 《中国临床医学》 2010年第5期692-694,共3页

关键词 MICRORNA 肿瘤干细胞 调控基因表达 非翻译区 miRNA 核糖核酸 小RNA 碱基序列

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关注肾恢复——再谈做好急性肾损伤的防治策略 被引量：3

6

作者 公方晓 杨向红 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2020年第1期1-6,共6页

急性肾损伤(AKI)是全球常见的危重病临床综合征,其发病率高,并与患者不良的短期和长期预后息息相关,不仅增加了患者的病死率,而且可能导致慢性肾疾病(CKD)、终末期肾病(ESRD)和心血管不良事件的发生,造成了全球巨大的疾病负担。但AKI亦... 急性肾损伤(AKI)是全球常见的危重病临床综合征,其发病率高,并与患者不良的短期和长期预后息息相关,不仅增加了患者的病死率,而且可能导致慢性肾疾病(CKD)、终末期肾病(ESRD)和心血管不良事件的发生,造成了全球巨大的疾病负担。但AKI亦是一种可预防、可治疗的临床综合征,随着临床研究的不断探索,关注肾的恢复成为AKI防治的新靶点。文章从AKI后肾恢复的影响因素着手,从AKI早期风险预测、基于生物标志物的AKI早期识别、AKI电子预警、AKI集束化防治、规范化急性肾替代治疗等方面结合最新进展,阐述如何做好急性肾损伤的防治,以促进肾恢复。 展开更多

关键词 急性肾损伤 肾恢复 风险 生物标志物 电子预警 集束化治疗 肾替代治疗

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体外膜肺氧合并发血流感染病原菌及耐药性分析 被引量：3

7

作者 李茜 孙仁华 +3 位作者 洪军 胡秀平 呼邦传 公方晓 《中国现代医生》 2015年第30期18-21,共4页

目的了解重症医学科(ICU)中体外膜肺氧合(ECMO)治疗过程中并发血流感染病原菌的分布、耐药性特点以及可能的发病危险因素。方法选择2006年9月~2015年6月接受ECMO治疗并确诊发生血流感染的患者,对血培养分离到的病原菌进行鉴定和药敏学分... 目的了解重症医学科(ICU)中体外膜肺氧合(ECMO)治疗过程中并发血流感染病原菌的分布、耐药性特点以及可能的发病危险因素。方法选择2006年9月~2015年6月接受ECMO治疗并确诊发生血流感染的患者,对血培养分离到的病原菌进行鉴定和药敏学分析,并分析评价感染发生可能的危险因素。结果 ECMO患者发生血流感染的血培养共分离出7株病原菌,其中革兰阴性(G^-)杆菌5株,占71.4%,革兰阳性(G^+)球菌2株,占28.6%;G-杆菌如肺炎克雷伯菌肺炎亚种、乙酸钙鲍氏复合不动杆菌、铜绿假单胞菌及大肠埃希菌对各种常用抗菌药物耐药严重,2株G^+球菌分别为表皮葡萄球菌和头状葡萄球菌,对苯唑西林均耐药,但对万古霉素均敏感。ECMO时间≥7 d、置管部位出血等有可能是ECMO并发血流感染的危险因素。结论 G^-杆菌是ECMO治疗中并发血流感染的主要病原菌,且对多种抗菌药物耐药,G^+球菌敏感性尚可,应根据病原学及药敏结果合理用药,ECMO治疗期间应对发生血流感染的可能危险因素应实行重点监控并积极避免。 展开更多

关键词 体外膜氧合作用 血流感染 病原 抗生素耐受性 危险因素

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miR-20a-5p通过调控细胞周期蛋白D1抑制肾小管上皮细胞增殖 被引量：2

8

作者 公方晓 孙仁华 +1 位作者 徐云祥 呼邦传 《中国现代医生》 2016年第20期1-5,共5页

目的观察miR-20a-5p对肾小管上皮细胞增殖的影响，并验证其对细胞周期蛋白D1（cyclinD1）的靶向调控作用。方法使用Lipofectamine^TM 2000脂质体将微小RNA（miRNA）转染入人肾小管上皮细胞HK-2，实验分为3组。miR-20a-5p组转染miR-20a-5... 目的观察miR-20a-5p对肾小管上皮细胞增殖的影响，并验证其对细胞周期蛋白D1（cyclinD1）的靶向调控作用。方法使用Lipofectamine^TM 2000脂质体将微小RNA（miRNA）转染入人肾小管上皮细胞HK-2，实验分为3组。miR-20a-5p组转染miR-20a-5p，对照组转染阴性对照miRNA，空白组未做任何转染。CCK-8实验检测转染后各组细胞的吸光度值，流式细胞术检测各组的细胞周期变化。Westernblot检测各组细胞cyclinD1的蛋白表达情况。构建荧光素酶报告基因，内含cyclinD1的3’端非翻译区（3’UTR），双荧光素酶报告基因实验验证miR-20a-5p对3’UTR的直接结合作用。结果MiR-20a-5p组在转染后48—120h的吸光度值均低于对照组和空白组（P〈0．05），另外两组差异无统计学意义（P〉0.05）。转染后72h，miR-20a-5P组处于G1期的比例为（63．89±3．61）％，高于另外两组（P〈0．05），而另外两组差异无统计学意义（P〉0．05）。转染后48h，miR-20a-5p组的cyclinD1蛋白表达减少（P〈0．05）。与阴性对照miRNA相此，miR-20a-5p能抑制荧光素酶的活性（P〈0．05）。结论miR-20a-5p能抑制肾小管上皮细胞的增殖，并将细胞阻滞在G1期，其可能机制是miR-20a-5p抑制cyclinD1的表达，cyclinD1是miR-20a-5p的直接靶基因。 展开更多

关键词 细胞周期蛋白D1 细胞增殖 肾小管 微RNAS

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消退素D1抑制自噬减轻猪心肺复苏后脑损伤的机制研究

9

作者 叶森 公方晓 +2 位作者 张润 汪正权 洪军 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1085-1090,共6页

目的探讨消退素D1(resolvin D1,RvD1)通过调控自噬途径减轻猪心肺复苏(cardiopulmonary resuscitation,CPR)后脑损伤的作用机制。方法国产雄性白猪19头,体质量30~41 kg。应用随机数字表法,将实验动物分为3组,即假手术(sham,S)组(n=5)、... 目的探讨消退素D1(resolvin D1,RvD1)通过调控自噬途径减轻猪心肺复苏(cardiopulmonary resuscitation,CPR)后脑损伤的作用机制。方法国产雄性白猪19头,体质量30~41 kg。应用随机数字表法,将实验动物分为3组,即假手术(sham,S)组(n=5)、CPR组(n=7)与RvD1组(n=7)。S组动物仅进行气管插管、血管置管等操作准备,CPR组和RvD1组动物经右心室电刺激诱发心脏骤停8 min后CPR 5 min的方法建立实验模型。于复苏后5 min时,RvD1组动物经股静脉注射RvD10.6μg/kg,S组和CPR组动物给予等量溶媒。于复苏后1、3、6和24 h时,采集静脉血标本,应用ELISA法检测神经元特异度烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)和S100β蛋白(S100βprotein,S100β)。复苏后24 h进行神经功能缺损评分(neurological deficit score,NDS),然后安乐死并获取大脑皮层组织,应用western blot法检测磷酸化磷酸腺苷活化蛋白激酶(phosphorylated AMP-activated protein kinase,p-AMPK)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin,p-mTOR)、微管相关轻链蛋白3 II(microtubule-associated protein light chain 3,LC3Ⅱ)和p62。三组间比较应用单因素方差分析和Bonferroni事后检验。结果与S组相比,CPR组和RvD1组动物复苏后24 h NDS显著升高,血清NSE和S100β显著增加(均P<0.05)。然而,与CPR组相比,RvD1组动物复苏后24 h NDS显著降低[(182±34)和(124±18),P<0.05],在复苏3 h后血清NSE和S100β浓度显著减少[NSE(ng/mL):3 h为(23.1±3.8)和(18.0±2.2),6 h为(27.3±2.9)和(19.8±1.4),24 h为(28.1±1.3)和(15.1±2.1);S100β(pg/mL):3 h为(1611±208)和(1322±100),6 h为(1825±197)和(1410±102),24 h为(1613±138)和(1183±139),均P<0.05]。与S组相比,CPR组和RvD1组动物在复苏后24 h脑皮层p-AMPK与LC3II表达显著增加,p-mTOR与p62表达显著减少(均P<0.05)。然而,与CPR组相比,RvD1组动物在复苏后24 h脑皮层p-AMPK与LC3Ⅱ表达显著减少、同时p-mTOR与p62表达显著增加[p-AMPK:(0.28±0.08)� 展开更多

关键词 心脏骤停 心肺复苏 脑损伤 消退素D1 磷酸腺苷活化蛋白激酶 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 自噬 猪

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微小RNAlet-7c通过靶定细胞周期蛋白依赖激酶6抑制肝癌细胞增殖 被引量：1

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作者 公方晓 孙仁华 +1 位作者 夏景林 杨毕伟 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2698-2701,共4页

目的观察微小RNA（miRNA，miR）let-7c对肝癌细胞增殖的影响并验证其靶基因。方法实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）检测人肝癌细胞MHCC-97L、HepG2、HCCLM3、SMMC-7721及人肝细胞L02中let-7c的表达。使用Lipofectamine^TM 2000脂... 目的观察微小RNA（miRNA，miR）let-7c对肝癌细胞增殖的影响并验证其靶基因。方法实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）检测人肝癌细胞MHCC-97L、HepG2、HCCLM3、SMMC-7721及人肝细胞L02中let-7c的表达。使用Lipofectamine^TM 2000脂质体将miRNA转染人HCCLM3细胞，设转染let-7c的细胞为let-7c组，转染阴性对照miRNA的细胞为对照组，空白组未进行转染，细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测let-7c对细胞增殖的影响，流式细胞术检验各组细胞周期的差异，Westernblot检测转染后细胞周期蛋白依赖激酶6（CDK6）的蛋白表达情况。将CDK6的3’端非编码区（3’-UTR）连接人pMIR-REPORT荧光素酶载体，建成荧光素酶报告基因。将miRNA、荧光素酶报告基因、海肾荧光素酶质粒共转染人293T细胞，检测转染后荧光素酶的活性，验证let-7c对3’-UTR的结合作用。结果肝癌细胞MHCC07L、HepG2、HCCLM3、SMMC-7721中的let-7c表达量均低于L02，表达量分别为（3．22±0．08）×10^-4、（2．34±0．11）×10^-4、（1．854-0．03）×1010^-4、（3．03±0．11）×10^-4及（4．37±0．09）×10^-4（P〈0．05）。let-7c组细胞在转染后48、72、96h的吸光度值均低于对照组及空白组（P〈0．05），而对照组与空白组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。转染后72h，let-7c组细胞处于G1期的比例为（56．95±2．40）％，均高于另外两组（P〈0．05），而另外两组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。转染后48h，let-7c组CDK6蛋白的表达量均低于另外两组（P〈0．05），而另外两组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。双荧光素酶报告基因检测发现let-7c与对照miRNA比较，能抑制荧光素酶的活性（P〈0．05）。结论let-7c在肝癌细胞中的表达低于正常肝细胞，let-7c能抑制肝癌细胞的增殖，并使细胞阻滞于G1期，CDK6是其调控的靶基因。 展开更多

关键词 癌 肝细胞 微小RNAS 细胞周期蛋白依赖激酶6 let-7c

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无水乙醇对肝脏射频消融增效作用的实验研究

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作者 杨毕伟 王耀辉 +2 位作者 夏景林 公方晓 徐小晶 《中国临床医学》 2009年第6期860-862,共3页

目的:研究不同治疗方法下集束型cool-tip水冷射频针在离体牛肝上的消融范围,为临床制定消融方案和改善局部疗效提供实验依据。方法:使用美国cool-tip射频治疗仪和集束型中空冷循环消融电极,对离体牛肝进行消融。实验分为3组,Ⅰ组:射频... 目的:研究不同治疗方法下集束型cool-tip水冷射频针在离体牛肝上的消融范围,为临床制定消融方案和改善局部疗效提供实验依据。方法:使用美国cool-tip射频治疗仪和集束型中空冷循环消融电极,对离体牛肝进行消融。实验分为3组,Ⅰ组:射频消融组(对照组);Ⅱ组:联合无水乙醇注射组;Ⅲ组:延长消融时间组。消融结束后沿针道切开牛肝,观测组织凝固性坏死形态和范围。结果:牛肝上射频消融后的凝固性坏死灶多呈类圆形;Ⅱ组和Ⅲ组形成的消融体积较其对照组显著增大(P<0.05)。结论:联合无水乙醇注射和适当延长射频消融时间可以增大射频消融的坏死范围。 展开更多

关键词 射频消融 坏死范围

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