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银杏内酯B对肌萎缩侧索硬化细胞模型的保护作用及其机制 被引量：2
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作者 廖群 杨碧莹 +1 位作者 杜宝新 候晓妹 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第15期33-38,共6页
目的:探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对肌萎缩侧索硬化细胞模型c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路及细胞凋亡的影响。方法:通过含过表达人突变超氧化物歧化酶1(SOD1)G93A基因(hSOD1G93A)和过表达人野生SODWT基因(hSOD1WT)与空质粒的慢病... 目的:探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对肌萎缩侧索硬化细胞模型c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路及细胞凋亡的影响。方法:通过含过表达人突变超氧化物歧化酶1(SOD1)G93A基因(hSOD1G93A)和过表达人野生SODWT基因(hSOD1WT)与空质粒的慢病毒感染NSC34细胞,经一定浓度的嘌呤霉素筛选,倒置荧光显微镜下观察慢病毒的转染效率和细胞形态的变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检验感染细胞是否过表达SOD1蛋白,建立hSOD1G93A-NSC34细胞系后给予GB,细胞培养分组为正常组、模型组、不同浓度GB组(25,50,75,100 mg·L-1)组,48 h后噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,筛选出最佳药物浓度,后续实验分组为以正常组,模型组,75 mg?L-1 GB组,SP600125组,75 mg·L-1GB+SP600125组,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化(p-)JNK,c-Jun,p-c-Jun,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的表达。结果:与正常的NSC34细胞比较,hSOD1G93ANSC34组细胞胞体变圆,突触减少、变短,而hSOD1WT NSC34组细胞和空质粒组细胞形态学未发生明显变化,与正常组比较,hSOD1G93ANSC34组,hSOD1WTNSC3组细胞内SOD1蛋白水平显著升高(P<0.01),肌萎缩侧索硬化(ALS)细胞模型成功建立。与正常组比较,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01);与模型组比较,给予不同浓度GB后,细胞存活率均显著升高(P<0.01),药物质量浓度为75 mg·L-1时细胞存活率显著升高(P<0.01)。后续实验,与正常组比较,模型组凋亡率,p-JNK,p-c-Jun,cleaved Caspase-3蛋白表达量显著升高(P<0.01);与模型组比较,75 mg·L-1GB组,SP600125组,75 mg·L-1GB+SP600125组凋亡率,p-JNK,p-c-Jun,cleaved Caspase-3蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:GB对肌萎缩侧索硬化细胞模型具有抑制细胞凋亡的保护作用,这种保护作用可能是通过JNK信号通路实现的。 展开更多
关键词 超氧化物歧化酶1(hSOD1)G93A 肌萎缩侧索硬化 银杏内酯B 凋亡 c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路
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