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小麦PAL蛋白的提取、纯化及活性测定
1
作者 管非凡 刘孝晨 +2 位作者 修志静 诸葛祥林 杨海灵 《农业科学》 2018年第3期156-163,共8页
在本研究中,我们构建了PAL基因家族在9种陆地植物中的系统发育树,发现小麦PAL基因家族发生了明显的基因扩张:在这9种陆地植物中,小麦PAL基因家族成员数量最多,达到26个。基因表达模式热图显示,相对于成熟组织,小麦PAL基因在幼嫩组织中... 在本研究中,我们构建了PAL基因家族在9种陆地植物中的系统发育树,发现小麦PAL基因家族发生了明显的基因扩张:在这9种陆地植物中,小麦PAL基因家族成员数量最多,达到26个。基因表达模式热图显示,相对于成熟组织,小麦PAL基因在幼嫩组织中的表达量较高。高纯度的小麦PAL蛋白从小麦嫩叶中提取和纯化,并对其进行了活性测定。本研究为小麦PAL基因家族的进一步研究提供了技术支持。 展开更多
关键词 苯丙氨酸解氨酶 系统进化树 表达模式 蛋白提取 SDS-PAGE电泳 活性测定
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毛果杨赤霉素氧化酶基因家族鉴定与功能分析
2
作者 修志静 管非凡 +2 位作者 诸葛祥林 王一鸣 杨海灵 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期137-146,172,共11页
【目的】赤霉素氧化酶(GAox)是不同赤霉素之间相互转化的关键酶,属于2-酮戊二酸依赖性双加氧酶基因家族(2ODD),选择毛果杨GAox基因家族为研究对象,探究木本植物GAox基因家族成员的进化关系和功能分化机制。【方法】在Phytozome和PLAZA... 【目的】赤霉素氧化酶(GAox)是不同赤霉素之间相互转化的关键酶,属于2-酮戊二酸依赖性双加氧酶基因家族(2ODD),选择毛果杨GAox基因家族为研究对象,探究木本植物GAox基因家族成员的进化关系和功能分化机制。【方法】在Phytozome和PLAZA数据库中搜索到水稻、拟南芥和毛果杨2ODD基因,通过系统进化分析确认毛果杨2ODD基因中参与赤霉素代谢的GAox基因,然后整合基因组定位、基因结构、基因表达模式和酶生化活性等数据对GAox基因家族进行研究。【结果】从毛果杨基因组中鉴定得到124个2ODD成员,通过系统进化分析确认其中包含27个GAox基因,它们可能参与到赤霉素合成。毛果杨27个GAox基因分成4个亚家族,分别是C20-GA2ox、GA20ox、C19-GA2ox和GA3ox。基因组定位的结果发现27个毛果杨GAox基因分散定位在19条染色体中的14条染色体上,其中有11对GAoxs基因是由基因组的大片段重复产生的。酶学活性测定的结果表明,PtGA2ox3和PtGA2ox5催化GA1生成GA8,GA9生成GA51,而PtGA20ox6、PtGA20ox7和PtGA20ox8催化GA15生成GA24,GA24生成GA9,GA53生成GA20,显示该基因家族成员在底物特异性方面发生了变化。其中PtGA2ox3对GA9的活性是PtGA2ox5的104倍,但是PtGA2ox3和PtGA2ox5具有相似的三维结构。通过活性中心的序列比对发现,PtGA2ox3存在多个非极性氨基酸,PtGA2ox5存在多个带羟基的氨基酸,推测PtGA2ox3活性中心位置附近的非极性基团是引起其催化活性高的原因。【结论】毛果杨GAox基因家族的基本特征、进化关系和部分基因的功能得到了初步解析,为加深对毛果杨赤霉素代谢途径的了解提供新的视角。 展开更多
关键词 毛果杨 赤霉素 基因家族 2ODD GA氧化酶 生化活性
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