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粉尘螨α-烯醇化酶基因的克隆表达、纯化及其N端B细胞表位的初步鉴定 被引量：1
1
作者 罗文丽 邱聪龄 +3 位作者 余炜嘉 刘志刚 吉坤美 蔡泽浪 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期649-654,共6页
目的克隆表达粉尘螨(Dermatophagoides farinae)α-烯醇化酶(alpha-enolase,ENOA)基因,初步研究其N端B细胞表位与自身免疫性疾病的关系。方法 1设计特异性引物,从文库中克隆ENOA cDNA;2通过BamH I/EcoR I双酶切位点,将ENOA基因克隆至pET... 目的克隆表达粉尘螨(Dermatophagoides farinae)α-烯醇化酶(alpha-enolase,ENOA)基因,初步研究其N端B细胞表位与自身免疫性疾病的关系。方法 1设计特异性引物,从文库中克隆ENOA cDNA;2通过BamH I/EcoR I双酶切位点,将ENOA基因克隆至pET-His原核表达载体,表达纯化,获得了重组ENOA蛋白;3测定重组ENOA酶活性;4通过Swiss-Model软件模拟ENOA蛋白3D结构,并分析其潜在的N端B细胞表位;合成ENOA的N端表位肽,测定其与类风湿性关节炎患者血清IgG的反应性。结果 1克隆了ENOA全长cDNA(GenBank登录号KJ421213.1);2成功构建了pETHis-ENOA表达载体,经纯化获得了重组ENOA蛋白。3重组蛋白具有烯醇化酶活性;4瓜氨酸修饰的合成表位肽与类风湿性关节患者血清IgG-ELISA呈阳性反应,与健康对照组血清均不呈反应(P<0.05)。结论本课题首次克隆表达的重组ENOA蛋白具有烯醇化酶活性;其N端B细胞表位与类风湿性关节炎相关。本研究为尘螨与自身免疫性疾病的相关性研究提供了新的思路。 展开更多
关键词 粉尘螨 α-烯醇化酶 类风湿性关节 表位
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