基于网络药理学和分子对接分析赤芍抗氧化应激作用的活性成分及其机制 被引量：8

1

作者 豆佳红 王梓颖 +5 位作者 杨娟 周炜炜 张同存 何红鹏 戴小枫 李秀梅 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期1229-1240,共12页

【目的】利用网络药理学及分子对接技术分析赤芍抗氧化应激作用的有效活性成分及其分子机制。【方法】运用TCMSP数据库搜集赤芍的活性成分和靶点,借助UniProt数据库对靶点进行基因名转化;通过GeneCards和OMIM数据库检索氧化应激的相关基... 【目的】利用网络药理学及分子对接技术分析赤芍抗氧化应激作用的有效活性成分及其分子机制。【方法】运用TCMSP数据库搜集赤芍的活性成分和靶点,借助UniProt数据库对靶点进行基因名转化;通过GeneCards和OMIM数据库检索氧化应激的相关基因,利用Veeny在线平台获得赤芍与氧化应激的交集靶点,将交集靶点上传至STRING数据库和Cytoscape 3.8.0软件建立蛋白互作(PPI)网络图和赤芍-靶点-氧化应激可视化网络并进行拓扑学分析,筛选关键靶点;运用Metascape数据库对关键靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析,确定赤芍发挥抗氧化应激作用的活性成分和信号通路;运用AutoDock和PyMol软件对赤芍发挥抗氧化应激作用的核心靶点进行分子对接验证。【结果】共筛选到12个赤芍活性成分,包括黄芩素、β-谷甾醇、鞣花酸、豆甾醇、(+)-儿茶素等;赤芍活性成分与氧化应激靶点分别有76和4873个,其中赤芍与氧化应激交集靶点共69个,包括蛋白激酶B(AKT1)、转录因子AP-1(JUN)、细胞肿瘤抗原p53(TP53)、肿瘤坏死因子(TNF)和半胱氨酸蛋白酶-3(CASP3)等;GO功能和KEGG通路富集结果提示,赤芍抗氧化应激与磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)、核因子κB(NF-κB)等多个信号通路有关;分子对接结果表明,赤芍主要活性成分黄芩素、β-谷甾醇与核心靶点有较好的结合能力。【结论】赤芍可能通过黄芩素、β-谷甾醇、鞣花酸等活性成分调控PI3K-Akt、NF-κB、白细胞介素-17(IL17)等信号通路中的关键靶点来发挥抗氧化应激作用。 展开更多

关键词 赤芍 抗氧化应激 作用机制 网络药理学 分子对接

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以肌动蛋白为标准化参数在甲状腺乳头状癌中c-fos表达的研究 被引量：5

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作者 吕枚 方佩华 +4 位作者 何红鹏 郑荣秀 张志友 杨立平 肖茜 《天津医科大学学报》 2002年第1期7-10,共4页

目的 :引入细胞管家基因 (β-actin)作为多重扩增的内参照物以达到资料比较的标准化 ,用于研究c -fos在甲状腺乳头状癌中的表达。方法 :14例甲状腺乳头状癌组织标本 ;21例正常对照包括3例乳头状癌病变旁正常甲状腺组织和18例腺瘤病变旁... 目的 :引入细胞管家基因 (β-actin)作为多重扩增的内参照物以达到资料比较的标准化 ,用于研究c -fos在甲状腺乳头状癌中的表达。方法 :14例甲状腺乳头状癌组织标本 ;21例正常对照包括3例乳头状癌病变旁正常甲状腺组织和18例腺瘤病变旁正常甲状腺组织。采用Trizol法提取总RNA ,逆转录 -聚合酶链反应法 (RT -PCR)获取cDNA ,多重聚合酶链反应 (MultiplePCR)法同时扩增371bp的c -fos和227bp的β-actin。扩增产物行1.5%琼脂糖凝胶电泳 ,用UVP凝胶成像分析系统的GelBase/GelBiot -Pro分析软件获取各标本c-fos和β-actin的密度值 ,计算两者的比值。结果 :正常对照和乳头状癌组c -fos/β-actin比值分别为 (x±s) :0.6845±0.0753和0.5938±0.0969 ,两组存在着显著差异(t=2.954,P<0.01) ;经自身配对t检验 ,3例患者的癌变组织明显低于与此癌病变旁的正常组织(t=9.205 ,P<0.05)。结论 :c -fos在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显低于正常对照。 展开更多

关键词 甲状腺乳头状癌 原癌基因C-FOS Β-肌动蛋白

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基于体外发酵模型分析植物多糖对T2DM患者肠道菌群及代谢的影响 被引量：5

3

作者 贾丽娜 马倩 +8 位作者 王新月 葛艳艳 王楠 何红鹏 罗学刚 朱立颖 贾卫国 郝力壮 齐威 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第2期248-261,共14页

通过体外发酵模型,利用高通量测序及代谢组学技术,研究5种植物多糖(黄芪多糖、苍术多糖、玄参多糖、红枣多糖和乌梅多糖)对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者肠道微生物及其代谢产物的影响。结果表明,植物多糖能够显著改善... 通过体外发酵模型,利用高通量测序及代谢组学技术,研究5种植物多糖(黄芪多糖、苍术多糖、玄参多糖、红枣多糖和乌梅多糖)对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者肠道微生物及其代谢产物的影响。结果表明,植物多糖能够显著改善糖尿病人肠道菌群结构,并且5种多糖均能够富集Faecalibacterium、Roseburia,抑制Escherichia。植物多糖处理能够调节气体介质含量、短链脂肪酸含量,改变T2DM患者肠道菌群的氨基酸、短链脂肪酸代谢途径,其中黄芪多糖、苍术多糖和玄参多糖对短链脂肪酸总量调节作用显著,对乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、异丁酸和异戊酸含量具有一定的调节作用;黄芪多糖、苍术多糖、玄参多糖和红枣多糖均能够提高T2DM患者的总气体介质含量以及CO_(2)和CH_(4)含量,乌梅多糖降低了总气体介质含量和H_(2)S含量。研究结果为植物多糖的筛选与利用及其靶向调节肠道微生物提供了理论基础。 展开更多

关键词 植物多糖 2型糖尿病 肠道菌群 代谢物质

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MALAT1通过竞争miR-124上调SMYD3并促进乳腺癌细胞增殖与迁移 被引量：8

4

作者 徐曼丽 王畅 +3 位作者 王楠 何红鹏 张同存 罗学刚 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期344-351,共8页

为了探究lncRNA MALAT1是否会通过与组蛋白甲基化酶SMYD3间的相互调控对乳腺癌细胞的增殖和迁移产生影响,采用siRNA敲低MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞中的内源性MALAT1后,然后应用划痕和MTT法检测细胞迁移和增殖情况;实时定量PCR(Realtim... 为了探究lncRNA MALAT1是否会通过与组蛋白甲基化酶SMYD3间的相互调控对乳腺癌细胞的增殖和迁移产生影响,采用siRNA敲低MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞中的内源性MALAT1后,然后应用划痕和MTT法检测细胞迁移和增殖情况;实时定量PCR(RealtimePCR)、免疫蛋白印迹(Westernblot)等方法检测si-MALAT1对miRNA-124、SMYD3及其下游基因mRNA及蛋白质水平的影响。结果显示:siRNA靶向敲低MALAT1后可降低乳腺癌细胞的迁移和增殖速度,同时抑制SMYD3及其下游靶基因N-cadherin、MYL9、MMP9、CYR61等的转录表达,并上调miR-124。miR-124的过表达可降低SMYD3在乳腺癌细胞中的表达,且MALAT1的敲低可以缓解miR-124抑制剂对SMYD3蛋白质水平表达的促进作用。此外,转染外源质粒使SMYD3过表达可激活MALAT1转录,反之siRNA干扰SMYD3后则会下调MALAT1。研究结果表明:lncRNAMALAT1可以作为miR-124的ceRNA调控SMYD3,同时SMYD3可反馈性激活MALAT1的转录,这一相互调控作用将影响到乳腺癌细胞的增殖与迁移能力。 展开更多

关键词 乳腺癌细胞 lncRNAMALAT1 SMYD3 miR-124

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293T细胞生产慢病毒工艺优化

5

作者 李欣 高驰 +4 位作者 顾力行 曾毅 姚頔 何红鹏 张同存 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期554-564,共11页

随着细胞治疗的快速发展,大规模慢病毒的生产成为工艺环节中的瓶颈,因此,优化293T高滴度和高纯度的CAR慢病毒载体生产工艺显得至关重要。本研究旨在优化包装慢病毒的293T贴壁细胞,节省时间,节约成本,提高慢病毒包装的能力。同时对优化... 随着细胞治疗的快速发展,大规模慢病毒的生产成为工艺环节中的瓶颈,因此,优化293T高滴度和高纯度的CAR慢病毒载体生产工艺显得至关重要。本研究旨在优化包装慢病毒的293T贴壁细胞,节省时间,节约成本,提高慢病毒包装的能力。同时对优化慢病毒载体中出现悬浮细胞结团生长的现象进行探索,检测其影响结团的因素。分别采用快速、慢速驯化方式将293T贴壁细胞驯化为悬浮培养,并比较其细胞形态、细胞密度、细胞活率、慢病毒包装能力和冻存复苏后稳定一致性,筛选出最优的悬浮驯化条件。通过调节Ca^(2+)浓度和EDTA添加量来研究比较细胞结团生长状况。结果证明,使用无血清培养基OPM-293 CD05溶剂(medium)可以将293T贴壁细胞快速驯化为293T悬浮细胞,并能制备出慢病毒滴度且优于贴壁细胞的包装滴度(^(*)P<0.05)。Ca^(2+)浓度会影响细胞结团大小,添加EDTA能有效分离分散非必要的细胞抱团生长。研究结果显示,传统293T贴壁细胞可以使用无血清培养基OPM-293 CD05溶剂快速驯化成悬浮细胞;在一定范围内,Ca^(2+)浓度越高细胞所结团块及粒径越大,EDTA添加量越高细胞所结团块及粒径变小。这为优化慢病毒载体包装工艺和悬浮培养条件,同时为体外规模化细胞培养放大和生产奠定了理论基础,具有一定的实用价值。 展开更多

关键词 慢病毒载体 293T细胞 悬浮驯化 悬浮细胞培养 结团

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HPV18间隔序列介导真核基因以双顺反子形式表达

6

作者 张煜豪 孙小强 +3 位作者 鲍正好 李雨彤 刘佳艺 何红鹏 《天津科技大学学报》 CAS 2024年第4期9-14,25,共7页

HPV18是一种DNA病毒,其E6和E7基因可读框(ORF)相隔8个核苷酸,以双顺反子形式在宫颈癌细胞HeLa细胞中表达E6和E7蛋白。为探究此间隔序列是否在基因双顺反子表达中发挥关键作用,利用此序列构建2个双顺反子表达质粒,转染人胚胎肾细胞HEK293... HPV18是一种DNA病毒,其E6和E7基因可读框(ORF)相隔8个核苷酸,以双顺反子形式在宫颈癌细胞HeLa细胞中表达E6和E7蛋白。为探究此间隔序列是否在基因双顺反子表达中发挥关键作用,利用此序列构建2个双顺反子表达质粒,转染人胚胎肾细胞HEK293T细胞,检测上下游2个ORF表达水平。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)结果显示2个ORF同时转录,免疫印迹(Western blot)结果显示2个蛋白同时表达,荧光显微镜结果进一步显示红色荧光蛋白(RFP)和绿色荧光蛋白(GFP)共表达。以上结果证明HPV18 E6和E7基因间隔序列可在上游ORF翻译结束后重新启动下游ORF翻译。此现象在真核细胞中比较罕见,分子机制可能与核糖体重新结合有关,值得进一步探究。 展开更多

关键词 翻译起始 多顺反子 HPV 基因表达 核糖体结合序列 真核细胞

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一个新型检测人甲状腺过氧化物酶抗体ELISA技术的临床应用 被引量：4

7

作者 张艳丽 方佩华 +1 位作者 何红鹏 李宁 《天津医药》 CAS 北大核心 2008年第5期337-339,共3页

目的:以重组人甲状腺过氧化物酶(hTPO)为抗原检测人甲状腺过氧化物酶抗体(hTPOAb)的ELISA用于甲状腺疾病临床检测。方法:用该法测定552例正常人,各类甲状腺疾病患者592人次,包括Graves病(GD)364人次(初诊64例及复诊300人次),桥本氏病(HT... 目的:以重组人甲状腺过氧化物酶(hTPO)为抗原检测人甲状腺过氧化物酶抗体(hTPOAb)的ELISA用于甲状腺疾病临床检测。方法:用该法测定552例正常人,各类甲状腺疾病患者592人次,包括Graves病(GD)364人次(初诊64例及复诊300人次),桥本氏病(HT)142例,单纯甲状腺肿34例,亚急性甲状腺炎23例,结节性甲状腺肿19例,腺瘤10例。结果:确立本法阳性切限为A405值P95为0.74,测定各类甲状腺疾病患者hTPOAbA405值结果以中位数(M)表示,HT为1.19,阳性率87.32%;Graves’病治疗前是0.51,阳性率26.56%,治疗后为0.62,阳性率30.67%;亚急性甲状腺炎为0.48,阳性率为17.39%;单纯甲状腺肿为0.58,阳性率为0;结节性甲状腺肿为0.69,阳性率21.05%;腺瘤为0.68,阳性率20%。HT患者血清hTPOAb阳性率明显高于其他各组(P<0.01)。结论:以重组hTPO为抗原建立的ELISA法特异、稳定、简便,可以常规应用于临床,并可作为HT的特异性诊断手段。 展开更多

关键词 碘化物过氧化物酶 酶联免疫吸附测定 自身抗体 甲状腺炎 自身免疫性 格雷夫斯病

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含铁牛血肽改善大鼠缺铁性贫血的效果评价

8

作者 鲍正好 王阿琴 +3 位作者 许月新 刘菲菲 余钧 何红鹏 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期27-33,共7页

为开发牛血肽相关功能性产品提供理论依据,作者研究了含铁牛血肽对于大鼠缺铁性贫血的治疗效果。以低铁鼠粮饲喂初离乳雌性SD大鼠3周,建立缺铁性贫血模型。以含铁鼠粮为正常对照,以生血宁为阳性对照,用含铁牛血肽灌胃至血红蛋白质质量... 为开发牛血肽相关功能性产品提供理论依据,作者研究了含铁牛血肽对于大鼠缺铁性贫血的治疗效果。以低铁鼠粮饲喂初离乳雌性SD大鼠3周,建立缺铁性贫血模型。以含铁鼠粮为正常对照,以生血宁为阳性对照,用含铁牛血肽灌胃至血红蛋白质质量浓度达到100 g/L以上。结果表明:含铁牛血肽显著地改善了缺铁性贫血引起的大鼠体质量以及白细胞、红细胞、血红蛋白和红细胞压积等血常规指标的下降,同时改善铁代谢指标血清铁和血清铁蛋白。低剂量牛血肽效果相当于生血宁,中高剂量牛血肽效果优于生血宁,证明饲喂含铁牛血肽可以改善大鼠缺铁性贫血。 展开更多

关键词 含铁牛血肽 血红素铁 缺铁性贫血 大鼠

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乳酸片球菌HAO2018胞外多糖的生物活性研究

9

作者 蒋佳芸 赵崇杰 +6 位作者 李雪宁 何红鹏 李军训 张晓元 陈勉 刘飞 王楠 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第22期27-32,共6页

以一株从酱香型白酒酒醅中筛选分离的乳酸片球菌Pediococcus acidilactici HAO2018为研究对象,探究菌株耐酸、耐胆盐特性及耐药性;用乙醇沉淀法提取该菌株胞外多糖(exopolysaccharides,EPS),对其抗氧化、抗菌、抗肿瘤等生物活性进行评... 以一株从酱香型白酒酒醅中筛选分离的乳酸片球菌Pediococcus acidilactici HAO2018为研究对象,探究菌株耐酸、耐胆盐特性及耐药性;用乙醇沉淀法提取该菌株胞外多糖(exopolysaccharides,EPS),对其抗氧化、抗菌、抗肿瘤等生物活性进行评价。结果表明,乳酸片球菌HAO2018具有较好的耐酸、耐胆盐能力,对卡那霉素等多种抗生素敏感,对万古霉素、复方新诺明不敏感;其EPS的DPPH自由基、羟自由基清除率以及还原能力均以浓度依赖的方式增加,当EPS质量浓度为1.0 mg/mL时,对DPPH的清除率为(68.46±4.16)%,当EPS质量浓度为10.0 mg/mL时,还原力以及羟自由基清除率分别为(54.10±0.15)%、(83.43±3.87)%;HAO2018的EPS对食源性致病菌志贺氏菌和阪崎克罗诺杆菌具有显著的抑制效果;EPS的抗肿瘤活性呈现浓度依赖性,0.5~2 mg/mL的EPS作用48 h和72 h时显著地抑制HT-29细胞的增殖。该研究对乳酸片球菌胞外多糖的综合开发利用提供一定理论基础。 展开更多

关键词 乳酸片球菌 胞外多糖 抗氧化活性 抑菌活性 抗肿瘤活性

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本科生全程导师制的实践探索 被引量：4

10

作者 何红鹏 《科技风》 2021年第3期173-174,共2页

国内多数高校实行了本科生全程导师制,这是一种促进生师交流,强化因材施教,提高本科生培养效率的教育方式。尽管在全程导师制施行初期会出现导师职责不明确、考核方法不完善等问题,但是经过几年的实践探索证明全程导师制对本科生规划大... 国内多数高校实行了本科生全程导师制,这是一种促进生师交流,强化因材施教,提高本科生培养效率的教育方式。尽管在全程导师制施行初期会出现导师职责不明确、考核方法不完善等问题,但是经过几年的实践探索证明全程导师制对本科生规划大学生活、制定学习目标、提高创新能力、及时心理疏导等多方面具有明显的优势。 展开更多

关键词 教育改革 本科生 全程导师制 创新人才培养

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阴道益生菌制剂在女性生殖道疾病治疗中的应用研究概述 被引量：3

11

作者 何红鹏 李伟强 +3 位作者 高歌 赵蕾 郭昌林 刘浩成 《天津科技大学学报》 CAS 2021年第6期75-80,共6页

健康育龄女性下生殖道分布着大量的微生物,其中的优势菌群是维持阴道酸性环境的乳杆菌.女性生殖道微生态紊乱与下生殖道感染、生殖道恶性肿瘤、不孕等关系密切.应用阴道益生菌制剂是改善生殖道微生态紊乱的有效方法.研究证明,口服或阴... 健康育龄女性下生殖道分布着大量的微生物,其中的优势菌群是维持阴道酸性环境的乳杆菌.女性生殖道微生态紊乱与下生殖道感染、生殖道恶性肿瘤、不孕等关系密切.应用阴道益生菌制剂是改善生殖道微生态紊乱的有效方法.研究证明,口服或阴道外用益生菌制剂具有辅助治疗下生殖道感染、辅助清除高危型人乳头瘤病毒、改善孕妇阴道微生态环境以及预防早产等作用.本文对阴道益生菌制剂在女性生殖道疾病治疗中的基础和临床研究进展进行综述,探讨阴道益生菌制剂相关的问题. 展开更多

关键词 阴道益生菌 乳杆菌 下生殖道感染 生殖道恶性肿瘤 女性生殖健康

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革兰氏阳性菌细胞外囊泡的研究现状 被引量：2

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作者 葛艳艳 李子涵 +5 位作者 王新月 罗学刚 王楠 何红鹏 张同存 齐威 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期1462-1474,共13页

细胞外囊泡(EVs),也称为膜小泡,是真核细胞和细菌分泌的囊泡状小体。它通过携带蛋白质、DNA、RNA和各种代谢物进行细胞间物质的交流传递。根据内容物的不同发挥不同的生理功能,如传递营养物质、参与免疫反应、治疗癌症等。目前大多数研... 细胞外囊泡(EVs),也称为膜小泡,是真核细胞和细菌分泌的囊泡状小体。它通过携带蛋白质、DNA、RNA和各种代谢物进行细胞间物质的交流传递。根据内容物的不同发挥不同的生理功能,如传递营养物质、参与免疫反应、治疗癌症等。目前大多数研究专注于真核细胞和革兰氏阴性菌囊泡的探索,而对革兰氏阳性菌中分泌的囊泡研究较少。这篇综述总结了目前对于革兰氏阳性细菌EVs的产生、内容物成分、生理功能、改造等方面的研究成果,并探讨了未来革兰氏阳性菌囊泡需研究的关键领域。 展开更多

关键词 细胞外囊泡 革兰氏阳性菌 生理功能 相互作用 免疫

原文传递

Graves'病和Hashimot病患者可溶性细胞间粘附分子-1的研究 被引量：1

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作者 吕枚 方佩华 +4 位作者 张志友 侯秉璋 郑荣秀 何红鹏 肖茜 《天津医科大学学报》 2001年第4期485-487,491,共4页

目的 :研究单纯甲状腺肿、Graves'病和Hashimot病患者血清sICAM -1的含量。方法 :用本室研制的sICAM -1RIA ,检测本市400例正常人以及1020例患有单纯性甲肿、Graves'病或者Hashimoto病患者血清sICAM -1含量 ,进行比较分析。结... 目的 :研究单纯甲状腺肿、Graves'病和Hashimot病患者血清sICAM -1的含量。方法 :用本室研制的sICAM -1RIA ,检测本市400例正常人以及1020例患有单纯性甲肿、Graves'病或者Hashimoto病患者血清sICAM -1含量 ,进行比较分析。结果 :正常人检测结果 (x±s)为 :168.43±36.23μg/L。单纯性甲肿组与正常组无显著性差别 (P>0.05) ,两种自身免疫性甲状腺疾病 (Graves'病和Hashimoto)均明显高于正常组和单纯性甲肿组(P<0.05)。3种治疗均可降低Graves'病患者sICAM -1含量 (P<0.05)。Graves'病停药复发组sICAM -1含量明显高于药物治疗后甲状腺功能恢复正常的Graves'病组(P<0.05)。结论 :sICAM -1RIA可用于临床检测自身免疫性甲状腺疾病 ;血清sICAM -1含量可作为自身免疫性甲状腺疾病诊断的一个参考指标 ,并在临床评价Graves'病的疗效、停药和复发等方面具有重要意义。 展开更多

关键词 可溶性细胞间粘附分子-1 放免法 Graves'病 Hashimoto病

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人甲状腺过氧化物酶抗原决定簇基因在大肠杆菌的表达及临床测定应用 被引量：1

14

作者 方佩华 何红鹏 吕枚 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期217-220,共4页

目的　表达有抗原活性的人甲状腺过氧化物酶 (hTPO)片段 ,并将表达产物用于临床测试。方法　将hTPO抗原决定簇基因连入 pGEX 4T 3,然后转入E .coliBL2 1,异丙基 β D 硫代半乳糖苷诱导表达。表达产物谷胱甘肽巯基转移酶 (GST) hTPO经... 目的　表达有抗原活性的人甲状腺过氧化物酶 (hTPO)片段 ,并将表达产物用于临床测试。方法　将hTPO抗原决定簇基因连入 pGEX 4T 3,然后转入E .coliBL2 1,异丙基 β D 硫代半乳糖苷诱导表达。表达产物谷胱甘肽巯基转移酶 (GST) hTPO经亲和层析纯化 ,并鉴定免疫学活性。以GST hTPO为抗原建立检测血清TPO抗体 (Ab)的ELISA方法。用此方法检测一批自身免疫性甲状腺疾病 (AITD)患者血清TPOAb ,用病理学方法观察同批患者甲状腺组织中HLA DR抗原、树突状细胞及淋巴细胞浸润程度。结果　成功地表达了hTPO抗原决定簇基因 ,纯化产物GST hTPO纯度高 ,有良好的免疫学活性 ,以此抗原建立的ELISA方法有良好的重复性 ,CV在 5 .93 %～ 7.5 9%之间。ELISA方法与RIA方法比较 ,检测结果显著相关 (n =37,r =0 .6 13,P <0 .0 0 1)。血清TPOAb水平及HLA DR抗原、树突状细胞分布随甲状腺组织淋巴细胞浸润程度加重呈逐渐增多趋势。结论　原核表达产物GST hTPO可用于建立TPOAb常规检测方法 ; 展开更多

关键词 基因表达 碘化物过氧化物酶 自身免疫疾病 甲状腺过氧化物酶抗体 甲状腺 AITD

原文传递

SAHA对HeLa细胞增殖、凋亡、衰老以及迁移的影响 被引量：1

15

作者 张朦朦 刘雪娜 +2 位作者 来永巍 刘玥 何红鹏 《天津科技大学学报》 CAS 2020年第3期16-21,39,共7页

为研究HDAC抑制剂SAHA对宫颈癌HeLa细胞肿瘤生物学特性的影响,使用SAHA处理HeLa细胞后,在显微镜下观察细胞形态,台盼蓝染色法检测细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡,β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老,划痕实验和小室迁移实验检测细胞迁移能... 为研究HDAC抑制剂SAHA对宫颈癌HeLa细胞肿瘤生物学特性的影响,使用SAHA处理HeLa细胞后,在显微镜下观察细胞形态,台盼蓝染色法检测细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡,β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老,划痕实验和小室迁移实验检测细胞迁移能力,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和免疫印迹(Western blot)检测基因表达.结果显示:SAHA处理HeLa细胞后,细胞增殖能力下降,发生衰老,同时在分子水平上促进p21基因表达;抑制细胞迁移,在分子水平上迁移相关基因MYL9表达水平下降;SAHA处理的细胞没有表现出明显凋亡现象.本研究结果提示SAHA可能通过促进p21和MYL9基因表达发挥抑制细胞增殖、促进细胞衰老和降低细胞迁移能力的作用. 展开更多

关键词 SAHA 宫颈癌 细胞增殖 细胞凋亡 细胞衰老 细胞迁移

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共表达细胞因子IL-7和趋化因子CCL19/CCL21的第4代anti-CD19 CAR-T细胞的开发与应用 被引量：1

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作者 赵文静 于琪英 +6 位作者 胡浩 顾潮江 王楠 何红鹏 罗学刚 马文建 张同存 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期348-357,共10页

目的初步探讨共表达细胞因子IL-7和趋化因子CCL19或CCL21的anti-CD19 CAR-T细胞的功能特性及其在体外对人CD19^+急性淋巴细胞白血病(B-ALL)的杀伤效果,旨在优化CAR-T细胞各项功能,增强其对血液瘤、实体瘤的治疗效果。方法通过亚克隆技... 目的初步探讨共表达细胞因子IL-7和趋化因子CCL19或CCL21的anti-CD19 CAR-T细胞的功能特性及其在体外对人CD19^+急性淋巴细胞白血病(B-ALL)的杀伤效果,旨在优化CAR-T细胞各项功能,增强其对血液瘤、实体瘤的治疗效果。方法通过亚克隆技术获得重组慢病毒质粒,慢病毒包装,转导原代T细胞获得2种第4代anti-CD19CAR-T细胞,分别命名为7×19 CAR-T细胞、7×21 CAR-T细胞。借助流式细胞仪和相关试剂盒检测了细胞CAR分子的转导效率、CAR-T细胞的趋化能力、增殖及凋亡情况等;钙黄绿素释放法检测CAR-T细胞的杀伤作用;共培养法检测CAR-T细胞因子的释放情况;2种第4代anti-CD19 CAR-T细胞组皆于原代T细胞、常规anti-CD19 CAR-T细胞作比较。结果7×19 CAR-T、7×21 CAR-T细胞的功能特性皆有显著提高,主要表现在细胞增殖速度加快、细胞凋亡速率明显变慢、炎症因子IFN-γ、肿瘤坏死因子TNF-α的分泌量皆有所增加;且体外杀伤实验表明阳性率约40%的7×19 CAR-T、7×21 CAR-T细胞对CD19^+肿瘤细胞Raji的杀伤效率高于阳性率约50%anti-CD19 CAR-T细胞(P<0.01);结论实验数据显示共表达细胞因子IL-7和趋化因子CCL19或CCL21的第4代anti-CD19 CAR-T细胞即7×19 CAR-T和7×21 CAR-T细胞相比第3代anti-CD19 CAR-T细胞和T细胞在趋化能力、细胞增殖、细胞凋亡、体外杀瘤效果以及细胞炎症因子的释放能力等方面皆有显著改善,初步证明了7×19 CAR-T细胞和7×21 CAR-T细胞的各项功能有所优化,对CD19^+人急性淋巴细胞白血病治疗效果得到改善,为开发靶向CD19的新型CAR-T细胞提供了新思路,这种模式也为其它类型CAR-T细胞的开发开创了典范。 展开更多

关键词 嵌合抗原受体 第4代anti-CD19 CAR-T细胞 细胞因子IL-7 趋化因子CCL19/CCL21 急性B淋巴细胞白血病

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人促甲状腺素受体膜外区蛋白在原核系统表达及其生物活性鉴定 被引量：1

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作者 吕枚 方佩华 何红鹏 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期308-312,共5页

为研究重组人促甲状腺素受体 (hTSHR)膜外区表达产物及其生物活性与免疫活性 ,将hT SHR膜外区编码基因 (编码第 3～ 4 2 0位氨基酸 )重组到表达型质粒pGEX 4T 3上 ,测序结果表明序列正确 ,未改变读码框架 .然后转入E .coliAd4 94进行诱... 为研究重组人促甲状腺素受体 (hTSHR)膜外区表达产物及其生物活性与免疫活性 ,将hT SHR膜外区编码基因 (编码第 3～ 4 2 0位氨基酸 )重组到表达型质粒pGEX 4T 3上 ,测序结果表明序列正确 ,未改变读码框架 .然后转入E .coliAd4 94进行诱导表达 .纯化后的表达产物经SDS PAGE、Western印迹及放射受体法分别检测其分子量、免疫活性和生物活性 .重组TSHR3～ 4 2 0 膜外区蛋白 (简称TSHR3～ 4 2 0 )产率为 15 9～ 2 0 2 μg L培养基 ,分子量为 4 8.9kD ;融合蛋白 (简称GST TSHR3～ 4 2 0 )分子量为 75 .4kD .两种表达产物都可与TSHRAb反应 ;TSHR3～ 4 2 0 可与12 5I TSH结合 . 展开更多

关键词 人促甲状腺素受体 膜外区蛋白 原核系统 表达 生物活性 鉴定

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乳酸乳球菌双组分系统调控有氧呼吸的研究

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作者 李子涵 葛艳艳 +6 位作者 郭耀华 王楠 何红鹏 罗学刚 马文建 郝力壮 齐威 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期3753-3769,共17页

【背景】乳酸乳球菌作为食品行业的代表性菌株,如何通过双组分系统响应环境因子与代谢调控的分子机制研究,对发酵食品产业和益生菌制剂行业有着重要的意义。【目的】探究乳酸乳球菌双组分系统对有氧呼吸代谢调控的相关网络,为乳酸菌适... 【背景】乳酸乳球菌作为食品行业的代表性菌株,如何通过双组分系统响应环境因子与代谢调控的分子机制研究,对发酵食品产业和益生菌制剂行业有着重要的意义。【目的】探究乳酸乳球菌双组分系统对有氧呼吸代谢调控的相关网络,为乳酸菌适应性代谢研究提供新思路。【方法】采用生物信息学方法,系统性地分析乳酸乳球菌双组分系统组氨酸激酶和反应调节因子的结构域组成及预测双组分系统功能,筛选出与有氧呼吸有潜在联系的双组分,并进一步通过基因转录表达和非靶向代谢组学验证。【结果】以乳酸乳球菌的代表菌株NZ9000为例构建相互作用蛋白网络,显示双组分系统与丙酮酸代谢网络关键连接点为丙酮酸铁氧还蛋白氧化还原酶(nifJ)。在不同的生长时期,Lactococcus lactis NZ9000双组分转录表达在延滞期变化显著。与厌氧培养相比,有氧培养和有氧呼吸培养的菌体双组分呈现下调趋势。双组分系统参与乳酸菌氧化应激和血红素胁迫过程。【结论】明确乳酸乳球菌参与有氧呼吸的双组分系统以及代谢通路,有助于提高发酵剂、益生菌剂的存活率和竞争力。 展开更多

关键词 乳酸乳球菌 双组分系统 有氧呼吸 适应性机制

原文传递

抑制DNMT3A促进E2F1诱导间充质干细胞向动脉内皮细胞分化及血管生成 被引量：1

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作者 苏凯悦 车丽娜 +5 位作者 李凤娇 段晓昶 李栋 何红鹏 张同存 王楠 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1972-1979,共8页

目的:探讨敲减DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)的表达是否促进细胞周期相关转录因子E2F转录因子1(E2F1)诱导人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)向动脉内皮细胞分化及血管形成。方法:体外培养hUCMSCs,将细胞分为对照组、E2F1过表达组(E2F1组)、DNMT3A... 目的:探讨敲减DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)的表达是否促进细胞周期相关转录因子E2F转录因子1(E2F1)诱导人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)向动脉内皮细胞分化及血管形成。方法:体外培养hUCMSCs,将细胞分为对照组、E2F1过表达组(E2F1组)、DNMT3A敲减组(siDNMT3A组)和联合诱导组(E2F1+siDNMT3A组);倒置显微镜下观察细胞形态变化;采用RT-qPCR和Western blot检测动脉特异性标志物ephrin-B2和HEY2的mRNA及蛋白水平;成管实验检测分化后hUCMSCs的体外管状结构形成能力;裸鼠基质胶塞实验结合CD31染色检测分化后hUCMSCs的体内生成血管情况。结果:RT-qPCR和Western blot结果显示,与对照组相比,siDNMT3A组ephrin-B2和HEY2的mRNA及蛋白水平均显著升高(P<0.01);与siDNMT3A组相比,E2F1+siDNMT3A组HEY2和ephrin-B2的mRNA及蛋白水平进一步升高(P<0.01)。体内和体外成管实验证明,除对照组外,其他3个诱导组的细胞均可形成管腔样结构,其中E2F1+siDNMT3A组的成管能力最强。结论:与单一过表达E2F1或敲减DNMT3A比较,敲减DNMT3A表达同时过表达E2F1的hUCMSCs向动脉内皮细胞分化和血管形成能力更强。 展开更多

关键词 E2F转录因子1 DNA甲基转移酶3A 间充质干细胞 血管生成

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高危型人乳头瘤病毒HPV18 E6和E7基因的克隆与表达 被引量：1

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作者 来永巍 何红鹏 +3 位作者 刘翔 范红艳 姚佳宏 王艳春 《中国研究型医院》 2018年第4期23-28,共6页

目的:HPV18 E6和E7是两个病毒癌基因,存在于宫颈癌He La细胞中。采用双酶切和同源重组两种不同的策略克隆HPV18 E6、HPV18 E7和HPV18 E6-E7串联表达质粒,研究两者在细胞癌变中的作用。方法:首先,从He La细胞中提取RNA,RT-PCR获取E6和E7... 目的:HPV18 E6和E7是两个病毒癌基因,存在于宫颈癌He La细胞中。采用双酶切和同源重组两种不同的策略克隆HPV18 E6、HPV18 E7和HPV18 E6-E7串联表达质粒,研究两者在细胞癌变中的作用。方法:首先,从He La细胞中提取RNA,RT-PCR获取E6和E7编码序列,分别用双酶切连接法或同源重组的方法连入不同载体质粒。然后,从He La细胞中提取DNA,PCR法扩增E6-E7编码序列,酶切连接法构建重组表达质粒。结果:经测序正确的质粒转染He La细胞,使用RT-PCR法或者Western-blot法检测目的基因转录与表达均显著升高。结论:HPV18 E6、E7和E6-E7三个表达质粒构建成功,均可在He La细胞中正确表达。 展开更多

关键词 HPV18 E6、E7 基因克隆 质粒构建 基因表达

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