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结核分枝杆菌耐受活性氧和活性氮基因的研究进展 被引量：1
1
作者 付鑫 王爱妍 +3 位作者 丁峰山 何时义 杨东君 凌敏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期854-858,共5页
活性氧和活性氮是生物体新陈代谢过程的中间产物,性质活泼,具有强氧化性。激活的巨噬细胞内存在大量的活性氧和活性氮,能够破坏病原菌的生物膜,改变蛋白质的功能,损害DNA的遗传信息,最终抑制或杀死入侵的病原微生物。结核分枝杆菌侵入机... 活性氧和活性氮是生物体新陈代谢过程的中间产物,性质活泼,具有强氧化性。激活的巨噬细胞内存在大量的活性氧和活性氮,能够破坏病原菌的生物膜,改变蛋白质的功能,损害DNA的遗传信息,最终抑制或杀死入侵的病原微生物。结核分枝杆菌侵入机体,主要在巨噬细胞内存活并大量繁殖。在氧化和氮化胁迫下,结核分枝杆菌基因在转录水平会发生明显改变,帮助结核分枝杆菌逃逸巨噬细胞的杀伤作用。本文综述了结核分枝杆菌耐受活性氧和活性氮基因的研究进展,并总结了各基因之间的调控通路。 展开更多
关键词 活性氧 活性氮 巨噬细胞 结核分枝杆菌
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鸟分枝杆菌PhoP功能分析及其基因突变株的构建
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作者 何时义 丁峰山 +3 位作者 王爱妍 付鑫 杨东君 凌敏 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1966-1972,共7页
【目的】对鸟分枝杆菌PhoP的功能进行分析及构建PhoP基因突变株,为深入研究PhoP的调控机制打下基础。【方法】利用PCR扩增出鸟分枝杆菌PhoP DNA结合区(PhoPC)编码序列,与表达载体p GEX-4T-3连接后,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中表达GST-Ph... 【目的】对鸟分枝杆菌PhoP的功能进行分析及构建PhoP基因突变株,为深入研究PhoP的调控机制打下基础。【方法】利用PCR扩增出鸟分枝杆菌PhoP DNA结合区(PhoPC)编码序列,与表达载体p GEX-4T-3连接后,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中表达GST-PhoPC融合蛋白。用凝血酶去除GST标签,制备PhoPC蛋白;利用PCR扩增出鸟分枝杆菌PhoP基因及其下游基因MAV0127、PhoU和Amt的启动子片段,采用凝胶迁移率移动试验(EMSA)分别检测PhoPC与PhoP、MAV0127、PhoU和Amt的启动子结合的情况。通过PCR扩增PhoP基因上、下游片段,构建PhoP基因缺失性同源核苷酸片段,与自杀质粒p GMB151连接后,通过电转化导入鸟分枝杆菌进行同源交换,利用PCR筛选出PhoP基因缺失突变株。【结果】EMSA结果显示,鸟分枝杆菌PhoP能与PhoP、MAV0127及Amt基因启动子结合,不能与PhoU结合。通过PCR和序列分析证实基因突变株的PhoP基因缺失了309个碱基。【结论】PhoP不仅可调控其下游基因MAV0127和Amt的转录水平,还可调控其自身基因的转录,但不参与调节PhoU二元调控系统。构建了PhoP基因缺失突变株,为进一步研究其在鸟分枝杆菌的调控功能奠定了基础。 展开更多
关键词 鸟分枝杆菌 PHOP 凝胶迁移率移动试验 PhoP基因突变株
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鸟分枝杆菌毒力相关因子EsxH对巨噬细胞凋亡的作用
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作者 张依 何时义 +2 位作者 宁雪萍 田爽 凌敏 《微生物前沿》 2019年第1期33-39,共7页
目的:通过原核表达系统制备鸟分枝杆菌EsxH蛋白,并将其作用于U937细胞,初步探讨其对巨噬细胞凋亡的影响。方法:利用PCR扩增出EsxH编码序列,与表达载体pGEX-4T-3连接,构建重组载体pGEX-EsxH,将重组表达载体pGEX-EsxH转化入E. coli BL21 (... 目的:通过原核表达系统制备鸟分枝杆菌EsxH蛋白,并将其作用于U937细胞,初步探讨其对巨噬细胞凋亡的影响。方法:利用PCR扩增出EsxH编码序列,与表达载体pGEX-4T-3连接,构建重组载体pGEX-EsxH,将重组表达载体pGEX-EsxH转化入E. coli BL21 (DE3),在IPTG作用下诱导表达目的蛋白。用超声破碎仪对菌体进行破碎,取上清通过谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱纯化GST-EsxH融合蛋白。将纯化后的蛋白作用于U937细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:扩增出基因片段大小为294 bp的EsxH基因,克隆入表达载体pGEX-4T-3,经IPTG诱导后成功表达一个分子量大小为36.5 kDα的融合蛋白GST-EsxH。将不同浓度的EsxH蛋白作用于U937细胞,经流式细胞术检测细胞凋亡率,发现处理组细胞凋亡率高于对照组,其差异具有统计学意义(P <0.05)。结论:EsxH蛋白能够促进U937细胞的凋亡,为进一步研究鸟分枝杆菌的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 鸟分枝杆菌 EsxH 细胞凋亡
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