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三株不同毒力单增李斯特菌第一毒力岛基因全序列的克隆及遗传变异分析 被引量:4
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作者 娜娜 李巍 +5 位作者 张子群 吕兴峰 刘兵 初纯明 庞宇 宋铭忻 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期565-571,共7页
为分析单增李斯特菌重要毒力因子的遗传进化关系,并进一步探讨不同毒力菌株重要毒力因子的分子差异,分段扩增、克隆了3株不同毒力及不同血清型菌株的第1毒力岛(LIPI-1)全基因序列,对3株菌LIPI-1的6个毒力基因分别测序并进行了序列和系... 为分析单增李斯特菌重要毒力因子的遗传进化关系,并进一步探讨不同毒力菌株重要毒力因子的分子差异,分段扩增、克隆了3株不同毒力及不同血清型菌株的第1毒力岛(LIPI-1)全基因序列,对3株菌LIPI-1的6个毒力基因分别测序并进行了序列和系统进化分析。对其中毒力差异明显的2株菌,在分析其毒力表型的基础上,对其进行了分子特征和遗传变异分析。结果表明各毒力基因同源性各异,6个毒力基因反映出的进化关系不一致。弱毒株N21与强毒株Lmo0586相比,具有相似的溶血活性以及更强的溶脂活性。2株菌的调控序列prfA无明显差异;2株菌hly序列中的PEST基序有1个氨基酸发生了变化;2株菌的actA序列差异最显著,强毒株Lmo0586比弱毒株N21少105个核苷酸,造成35个氨基酸的缺失,该序列位于ActA蛋白的脯氨酸重复区内。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 第1毒力岛 序列分析 遗传变异分析
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阻塞形势下内蒙古东南部地区一次冷涡暴雨过程水汽特征分析 被引量:5
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作者 马素艳 娜娜 +1 位作者 赵斐 张旭 《气象与环境学报》 2019年第2期1-8,共8页
使用常规观测资料、FY-2G卫星及1°×1°的NCEP再分析资料,对2017年7月6—7日内蒙古东南部地区一次冷涡暴雨天气过程进行分析。结果表明:在稳定的"一槽一脊"型环流背景下,阻塞高压稳定维持,西风槽东移受阻移动缓... 使用常规观测资料、FY-2G卫星及1°×1°的NCEP再分析资料,对2017年7月6—7日内蒙古东南部地区一次冷涡暴雨天气过程进行分析。结果表明:在稳定的"一槽一脊"型环流背景下,阻塞高压稳定维持,西风槽东移受阻移动缓慢,加深为涡,暴雨发生在冷涡发展加强阶段;低空急流建立,一方面形成偏南水汽输送,为暴雨提供源源不断的水汽,水汽收支主要集中在700 hPa以下,暴雨发生前水汽净收入明显增大,南、北边界水汽贡献率大;另一方面,偏南暖湿气流的输送使不稳定层结建立,能量在暴雨区积聚,偏南低空急流与高空急流耦合,又为暴雨发生提供了动力条件;暴雨发生前后湿度场变化显著,大气可降水量最大达到55—60 kg·m^(-2),且暴雨发生前增幅显著,增幅近2倍。暴雨区700 hPa (850 hPa)上比湿不低于7 g·kg^(-1)(12 g·kg^(-1)),强降水出现在水汽图上白亮区断裂消失后,高层比湿峰值附近和相当黑体温度<230 K为强降水高发区。 展开更多
关键词 阻塞形势 冷涡 暴雨 水汽特征
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产单核细胞李氏杆菌感染鼠的肝细胞凋亡的荧光定量PCR检测 被引量:3
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作者 娜娜 李晓云 +4 位作者 李巍 张子群 刘兵 初纯明 宋铭忻 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1173-1179,共7页
为探讨产单核细胞李氏杆菌感染小鼠的肝细胞凋亡机制及不同毒力菌株引起的肝细胞凋亡的差异,选取毒力差异显著的2株产单核细胞李氏杆菌,建立不同毒力及菌量的小鼠感染模型(A组低剂量攻弱毒、B组半数致死量攻弱毒、C组半数致死量攻强毒、... 为探讨产单核细胞李氏杆菌感染小鼠的肝细胞凋亡机制及不同毒力菌株引起的肝细胞凋亡的差异,选取毒力差异显著的2株产单核细胞李氏杆菌,建立不同毒力及菌量的小鼠感染模型(A组低剂量攻弱毒、B组半数致死量攻弱毒、C组半数致死量攻强毒、D组过量攻强毒),利用建立的小鼠肝细胞凋亡因子荧光定量PCR方法,检测小鼠肝细胞凋亡途径的重要因子表达量的变化,同时应用TUNEL技术(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法)检测凋亡情况。TUNEL结果显示,4组小鼠均存在不同程度的肝细胞凋亡,凋亡程度与细菌毒力呈正相关。荧光定量PCR结果显示,死亡受体途径的重要因子Caspase-3和Caspase-8的变化趋势相似,在4组小鼠表达量变化大体呈现相似的趋势(P>0.05),即在感染早期(12h^2d)表达量急剧升高,至峰值后逐渐降低;NF-κB在感染早期升高,且在感染后期也维持在较高的水平;线粒体凋亡途径的重要因子bcl-2、bax组间和组内的变化趋势都不是很明显(P>0.05)。表明产单核细胞李氏杆菌介导的肝细胞凋亡存在剂量及毒力依赖性,并主要依赖死亡受体途径,线粒体凋亡途径在这一过程中并不发挥主要作用。 展开更多
关键词 产单核细胞李氏杆菌 肝细胞凋亡 荧光定量PCR
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旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂对旋毛虫体外入侵肠上皮细胞的影响 被引量:1
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作者 关靖喆 刘照琨 +6 位作者 路丽群 娜娜 许靖云 吴丽佳 于鹏成 刘明旭 路义鑫 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期979-984,共6页
为探究2种旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂Ts Ad SPI和Ts Ka SPI对旋毛虫体外入侵肠上皮细胞的影响,建立了旋毛虫-Caco-2体外侵染模型,采用IPTG诱导大肠杆菌表达这2种旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂蛋白并大量纯化,探究不同剂量、不同作用时间Ts Ad... 为探究2种旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂Ts Ad SPI和Ts Ka SPI对旋毛虫体外入侵肠上皮细胞的影响,建立了旋毛虫-Caco-2体外侵染模型,采用IPTG诱导大肠杆菌表达这2种旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂蛋白并大量纯化,探究不同剂量、不同作用时间Ts Ad SPI和Ts Ka SPI单独及共同作用于侵染模型对旋毛虫体外入侵肠上皮细胞的影响。结果表明:Ts Ad SPI和Ts Ka SPI对旋毛虫入侵肠上皮细胞均有促进作用:2种蛋白单独作用时,剂量为100 g且作用时间为5 h时,入侵率最高;2种蛋白共同作用时,剂量为100 g且作用时间为3 h时,入侵率最高;并且这2种蛋白的单独作用效果优于共同作用效果,这2种蛋白共同作用产生拮抗效果。为进一步研究旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂对旋毛虫入侵宿主的影响奠定了基础。 展开更多
关键词 旋毛虫 Caco-2体外侵染模型 丝氨酸蛋白酶抑制剂
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旋毛虫p43与p53核酸疫苗的构建及其免疫保护性 被引量:1
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作者 庞宇 李巍 +4 位作者 韩彩霞 娜娜 刘畅 俞昭旸 宋铭忻 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期310-314,共5页
为探讨旋毛虫p43、p53基因的核酸疫苗对小鼠的免疫保护效果与免疫保护机制,将p43、p53基因分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,分3次肌肉注射免疫3组昆明小鼠。于三免后2周经口感染旋毛虫肌幼虫(100蚴/只),在攻虫后第7天和第35天剖杀... 为探讨旋毛虫p43、p53基因的核酸疫苗对小鼠的免疫保护效果与免疫保护机制,将p43、p53基因分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,分3次肌肉注射免疫3组昆明小鼠。于三免后2周经口感染旋毛虫肌幼虫(100蚴/只),在攻虫后第7天和第35天剖杀小鼠,计算成虫减虫率、肌幼虫减虫率和繁殖力指数,评估其免疫效果。在各时间点上取小鼠血清用于检测抗体水平和脂肪酸结合蛋白(H-FABP)。结果显示,试验各组成虫减虫率与对照组相比差异显著(P<0.05),LPG及RCI减虫率与对照组相比均差异极显著(P<0.01);IgG抗体水平提高,与PBS组差异显著(P<0.05);各组H-FABP检测结果均低于70pg/mL。结果表明旋毛虫p43与p53基因的核酸疫苗具有较好的抗旋毛虫的免疫保护效果,且两核酸疫苗对小鼠心肌无损伤。 展开更多
关键词 旋毛虫 P43 P53 核酸疫苗 免疫保护性
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应用dsRNA干扰技术对旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因功能的初步研究
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作者 于鹏成 刘畅 +7 位作者 吴丽佳 娜娜 孙益春 张金鹏 魏雅婷 杨莹 庞紫璇 路义鑫 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期589-595,共7页
为研究旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的功能,通过电转法将dsRNA导入旋毛虫体内,应用实时荧光定量PCR和Western-blot检测经dsRNA-TsKaSPI电转法处理后肌幼虫TsKaSPI基因转录和表达水平。体外培养观察TsKaSPI基因沉默对肌幼虫存活... 为研究旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的功能,通过电转法将dsRNA导入旋毛虫体内,应用实时荧光定量PCR和Western-blot检测经dsRNA-TsKaSPI电转法处理后肌幼虫TsKaSPI基因转录和表达水平。体外培养观察TsKaSPI基因沉默对肌幼虫存活的影响。将dsRNA导入后的幼虫经口接种小鼠,观察TsKaSPI基因沉默对幼虫存活、发育及雌虫生殖力的影响。实时荧光定量PCR和Western-blot检测结果显示,旋毛虫肌幼虫经30μg/mL dsRNA电转处理后TsKaSPI基因的转录和表达分别降低63.36%和69.24%(P<0.05)。TsKaSPI基因在dsRNA-TsKaSPI转入肌幼虫后第1天转录水平明显降低,第2和第3天仍处于较低的水平。PBS组、dseGFP对照组和dsRNA-TsKaSPI处理组的肌幼虫死亡率分别为61%、58%、52%(P>0.05)。将dsRNA电转处理的肌幼虫接种小鼠后6 d肠道成虫和35 d肌幼虫的减虫率分别为36.22%和31.87%。PBS组、dseGFP对照组和dsRNA-TsKaSPI处理组的感染小鼠收集到的雌虫新生幼虫量分别为49.20±5.93、49.40±4.62、50.80±4.32(P>0.05)。结果表明,dsRNA可明显抑制Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的转录和表达及幼虫在小鼠体内的存活和发育。 展开更多
关键词 旋毛虫 Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂 DSRNA
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两株不同毒力单增李斯特菌致病性试验
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作者 李晓云 李巍 +4 位作者 娜娜 张子群 刘兵 初纯明 宋铭忻 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第7期39-42,共4页
选取毒力差异显著的两株单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm),建立不同毒力及菌量的小鼠感染模型(A组低剂量攻弱毒、B组半数致死量攻弱毒、C组半数致死量攻强毒、D组过量攻强毒),研究不同毒力LM对机体的致病性差异以及机体对不同... 选取毒力差异显著的两株单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm),建立不同毒力及菌量的小鼠感染模型(A组低剂量攻弱毒、B组半数致死量攻弱毒、C组半数致死量攻强毒、D组过量攻强毒),研究不同毒力LM对机体的致病性差异以及机体对不同毒力菌株的免疫应答差异。结果表明,不同毒力LM在小鼠体内的迁移能力不同,感染后2 h,C组和D组小鼠心脏中就可检出LM菌,感染后4 h,A组和B组还各有1只小鼠心脏中未检出细菌,至感染后6 h,D组的1只小鼠脑中就可检出细菌,感染后8 h,A组和B组各有1只小鼠脑中可检出细菌,至感染后2 d A组还有1只小鼠脑中未检出细菌;剖检及组织病理观察显示,感染LM后4组小鼠都出现不同程度的肝损伤和脑损伤,损伤程度与细菌毒力呈正相关;血清炎性因子检测可见,3种因子的表达量呈现相似的变化趋势,即在感染早期表达量上升至峰值,随后逐渐下降至平稳,除高剂量攻强毒的小鼠比其他3组小鼠更早的引起机体免疫应答反应外,组间无显著差异(P>0.05),表明弱毒LM同样可刺激机体产生一定强度的免疫应答。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 致病性 细胞因子
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