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松材线虫和拟松材线虫14-3-3蛋白基因全长cDNA克隆与分析 被引量：5
1
作者 黄麟 许剑涛 +2 位作者 付涵予 吴小芹 叶建仁 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第36期22368-22373,共6页
[目的]对松材线虫和拟松材线虫的14-3-3蛋白基因进行全长cDNA克隆,并进行序列分析。[方法]根据GenBank数据库中14-3-3蛋白EST序列BXC56(登录号为FG589472)、BMC120(登录号为FG589351),采用RACE技术获取松材线虫和拟松材线虫14-3-3蛋白... [目的]对松材线虫和拟松材线虫的14-3-3蛋白基因进行全长cDNA克隆,并进行序列分析。[方法]根据GenBank数据库中14-3-3蛋白EST序列BXC56(登录号为FG589472)、BMC120(登录号为FG589351),采用RACE技术获取松材线虫和拟松材线虫14-3-3蛋白的全长cDNA克隆Bx14-3-3a和Bm14-3-3a,并对克隆片段序列进行分析。[结果]Bx14-3-3a全长1 039 bp,包含一个756 bp的开放阅读框,编码蛋白含有251个氨基酸残基,包含2个14-3-3蛋白标签,编码蛋白分子量为61.43 kD,等电点为4.88。Bx14-3-3a基因组结构中包含4个外显子和3个内含子序列。Bm14-3-3a全长992 bp,有与Bx14-3-3a编码完全相同的氨基酸序列。序列比对结果表明,14-3-3在真核生物间高度保守,Bx14-3-3A和Bm14-3-3A蛋白在系统进化上与线形动物门(Nematomorpha)的物种近缘关系较近,与植物线虫南方根结线虫(Meloidogyne incognita)系统发育关系上最为亲近。[结论]Bx14-3-3a和Bm14-3-3a的成功克隆,为进一步研究其功能及其调控因子对形态、致病力、繁殖力和环境适应性等方面的分子调控机制奠定了重要基础。 展开更多
关键词 松材线虫 拟松材线虫 14-3-3蛋白 基因结构 生物信息学分析
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超速离心技术分离CMA激活型溶酶体在本科实验教学中的应用
2
作者 付涵予 杜秋影 +1 位作者 徐健 魏涛 《中国科技期刊数据库 科研》 2024年第2期0164-0168,共5页
超速离心技术是目前分离亚细胞器最有效、最常用的一项技术。而高质量溶酶体的获得在自噬溶酶体途径的相关研究中尤为关键。本文旨在将二者运用于本科实验教学中,提高学生的科研创新思维能力。方法 本研究以Nycodenz作为密度梯度介质分... 超速离心技术是目前分离亚细胞器最有效、最常用的一项技术。而高质量溶酶体的获得在自噬溶酶体途径的相关研究中尤为关键。本文旨在将二者运用于本科实验教学中,提高学生的科研创新思维能力。方法 本研究以Nycodenz作为密度梯度介质分离大鼠黑质组织中CMA激活型溶酶体,利用免疫印迹试验检测溶酶体的纯度,底物结合与摄取试验确定其活性,通过检测β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶的释放量评价其完整性。结果 使用该方法提取的CMA激活型溶酶体位于Nycodenz梯度介质的P1层;6-OHDA处理后P1层溶酶体的CMA活性显著提高;且在整个提取过程中溶酶体破损率低于10%。结论 该实验对研究自噬-溶酶体途径在相关疾病发生发展中的作用具有重要意义,同时在教学实验中可以使学生更深入、系统地理解并掌握超速离心和亚细胞器分离技术,有利于培养学生的科研思维,促进教学与科研的相互融合。 展开更多
关键词 超速离心 CMA激活型溶酶体 实验教学 教学科研融合
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酵母双杂交系统在本科实验教学中的应用 被引量：2
3
作者 周敬伟 付涵予 +2 位作者 李萌萌 刘英奎 刘永 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2020年第7期164-168,共5页
酵母双杂交系统是目前鉴定体内蛋白相互作用最有效、应用最广泛的一项技术。为了将其运用于本科实验教学,设计了"利用酵母双杂交系统验证HIF-1α与Jab1相互作用"综合性实验。实验包括检测HIF-1α和Jab1在酵母细胞中的表达、... 酵母双杂交系统是目前鉴定体内蛋白相互作用最有效、应用最广泛的一项技术。为了将其运用于本科实验教学,设计了"利用酵母双杂交系统验证HIF-1α与Jab1相互作用"综合性实验。实验包括检测HIF-1α和Jab1在酵母细胞中的表达、毒性及自激活检测、HIF-1α与Jab1相互作用验证三部分。实验操作性强、结果直观,有利于学生深入、系统地理解并掌握酵母双杂交系统技术,有利于提高学生的科研思维及科研素养,有利于促进教学与科研的相互融合。 展开更多
关键词 酵母双杂交系统 实验教学 科研与教学融合
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松材线虫全蛋白的提取及其双向电泳体系优化 被引量：2
4
作者 付涵予 任嘉红 +1 位作者 黄麟 叶建仁 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期58-62,共5页
目的:一种适用于双向电泳体系的松材线虫全蛋白提取方法的建立及其双向电泳体系的优化。方法:以松材线虫为实验材料,比较2种不同的蛋白提取方法,并对双向电泳中的IPG胶条长度、IPG胶条最适pH范围、上样量等3个方面的条件进行优化。结果... 目的:一种适用于双向电泳体系的松材线虫全蛋白提取方法的建立及其双向电泳体系的优化。方法:以松材线虫为实验材料,比较2种不同的蛋白提取方法,并对双向电泳中的IPG胶条长度、IPG胶条最适pH范围、上样量等3个方面的条件进行优化。结果:采用TCA-丙酮法提取的蛋白质浓度较高,达到2.18μg/μl。使用pH 5～8、24cm的IPG干胶条,上样量为120μg,经双向电泳分离可得到背景清晰、分辨率较高的2-DE图谱,能检测到2 000个左右清晰的蛋白点,含有相对丰富的蛋白信息量。结论:该实验所建立的松材线虫提取方法和优化体系可以为今后松材线虫蛋白质组学的研究奠定技术基础。 展开更多
关键词 松材线虫 蛋白质提取 双向电泳
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