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金黄色葡萄球菌对体外保存猪精子活力及蛋白磷酸化修饰的影响 被引量：2
1
作者 李玉华 付杰丽 +4 位作者 李培飞 杨强震 王立蕊 谢蔚宜 李新红 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1665-1673,共9页
旨在从精子代谢及蛋白磷酸化修饰水平探讨金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)对猪精液17℃保存过程中精子活力的影响,从而为病原菌影响猪精子质量的分子机制研究提供理论基础。本研究采用计算机辅助精子活力分析仪(CASA)及试剂盒测... 旨在从精子代谢及蛋白磷酸化修饰水平探讨金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)对猪精液17℃保存过程中精子活力的影响,从而为病原菌影响猪精子质量的分子机制研究提供理论基础。本研究采用计算机辅助精子活力分析仪(CASA)及试剂盒测定精子运动性能,3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)活性、环化腺苷一磷酸(cAMP)水平及ATP总量变化,利用Western blot及细胞免疫荧光技术分别检测精子蛋白磷酸化水平变化及磷酸化修饰蛋白亚细胞定位。CASA结果显示,猪精液体外17℃保存过程中,10~3 CFU·mL^(-1)的金黄色葡萄球菌显著降低精子运动性能(P<0.05),培养3d后,随着葡萄球菌增加,猪精子运动性能降低趋势更显著(P<0.01);与精子活力参数相类似,培养3d后,处理组细胞内GAPDH活性及ATP总量显著低于对照组(P<0.05);Western blot结果表明,处理组精子蛋白磷酸化水平与对照组相比存在显著性差异(P<0.05),磷酸化修饰水平变化与cAMP变化具有一致性,预示着金黄色葡萄球菌对精子蛋白磷酸化修饰变化的影响可能遵循sAC-cAMP-PKA信号通路。综上表明,金黄色葡萄球菌抑制糖代谢GAPDH活性,从而降低ATP水平,同时可能遵循sAC-cAMP-PKA信号通路抑制头部核后区、赤道段及鞭毛区与精子活力相关蛋白的磷酸化水平,从而抑制猪精子活力。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 猪精子 活力 糖酵解 蛋白磷酸化
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家畜精液质量相关生物标记的研究进展 被引量：2
2
作者 甄林青 王立蕊 +2 位作者 付杰丽 李玉华 李新红 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期645-651,共7页
精液质量评估是预测家畜繁殖能力的主要手段,而精液中相关生物标记蛋白是决定受精潜能的物质基础。随着蛋白质组分析技术的逐步发展,发现家畜精子中与繁殖力相关联的生物标记,直接或间接影响受孕率及产仔数。这些标记蛋白的发现与鉴定,... 精液质量评估是预测家畜繁殖能力的主要手段,而精液中相关生物标记蛋白是决定受精潜能的物质基础。随着蛋白质组分析技术的逐步发展,发现家畜精子中与繁殖力相关联的生物标记,直接或间接影响受孕率及产仔数。这些标记蛋白的发现与鉴定,使得通过定向育种来提高繁殖性能成为可能,同时为评估公畜不同亚种之间的繁殖差异性提供理论依据。本文对近期公畜繁殖能力相关的精子生物标记蛋白的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 家畜 精子 蛋白质组学 生物标记 繁殖
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杜洛克猪精子体外4℃保存过程中活力参数及蛋白修饰变化 被引量：2
3
作者 付杰丽 李玉华 +6 位作者 甄林青 王立蕊 张和军 姜红菊 严国祥 浦坚华 李新红 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2016年第5期27-34,共8页
为探究体外4℃保存对猪精子活力参数及蛋白修饰的影响,使用猪精液保存稀释液体外4℃保存猪精子7d,利用计算机辅助精子活力分析仪(CASA)分析测定新鲜精液和保存7d后精液的精子活力指标;使用相应试剂盒检测精子中ATP水平及甘油醛-3-磷酸... 为探究体外4℃保存对猪精子活力参数及蛋白修饰的影响,使用猪精液保存稀释液体外4℃保存猪精子7d,利用计算机辅助精子活力分析仪(CASA)分析测定新鲜精液和保存7d后精液的精子活力指标;使用相应试剂盒检测精子中ATP水平及甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)活性;应用蛋白免疫印迹(WB)技术,比较新鲜精液在4℃保存7d后蛋白翻译后修饰水平的变化。结果表明,猪精液体外4℃保存7d后,精子活力参数呈现下降趋势。其中,运动力(MOT)、快速前进性运动速率(PRO)、平均路径速度(VAP)、平均直线运动速率(VSL)与新鲜精液相比分别降低59.99%、37.03%、12.34%、18.97%,且差异显著(P<0.05);发现精子中ATP水平和GAPDH酶活性在4℃保存7d后显著降低(P<0.05),即随着体外保存时间的延长,精子细胞内的能量供应不足,代谢水平降低;猪精液4℃保存7d后精子蛋白的磷酸化和酰化修饰明显减弱,这一结果与精子活力、代谢酶活性结果的变化趋势一致。研究结果证实,在体外4℃保存条件下,可能因精子细胞内能量代谢受阻而影响了精子活力及蛋白修饰水平。因此,本研究无论对于丰富精子的能量代谢基础理论,还是对于延长猪精液低温保存时间,提高人工授精效率,均具有重要的理论和实践意义。 展开更多
关键词 猪精子 体外保存 蛋白修饰 能量代谢
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镉对小鼠精子蛋白酪氨酸磷酸化修饰的影响及EGTA的保护作用 被引量：1
4
作者 王立蕊 杨强震 +5 位作者 李玉华 李思思 张宇坤 付杰丽 甄林青 李新红 《应用生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期4045-4051,共7页
采用体外培养的方法,利用精子活力分析软件(CASA)、蛋白免疫印迹(WB)及免疫荧光技术,探讨镉(Cd)对小鼠精子活力参数、蛋白酪氨酸磷酸化修饰的影响,并对小鼠精子酪氨酸磷酸化蛋白进行细胞亚组分定位.结果表明:Cd对小鼠精子活力具有明显... 采用体外培养的方法,利用精子活力分析软件(CASA)、蛋白免疫印迹(WB)及免疫荧光技术,探讨镉(Cd)对小鼠精子活力参数、蛋白酪氨酸磷酸化修饰的影响,并对小鼠精子酪氨酸磷酸化蛋白进行细胞亚组分定位.结果表明:Cd对小鼠精子活力具有明显抑制作用,且随着Cd浓度的增加抑制作用增强,当Cd浓度达到1.0μmol·L^(-1)时,小鼠精子活力(MOT)显著低于对照组;同时,Cd促进小鼠精子蛋白酪氨酸磷酸化,当浓度≥1.0μmol·L^(-1)时,尤其分子量约为55 kDa的蛋白酪氨酸磷酸化程度显著增强,且免疫荧光结果显示主要集中在小鼠精子中段;当用30μmol·L^(-1)乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)和10μmol·L^(-1)Cd同时培养时,55 kDa蛋白并未发生明显的酪氨酸磷酸化修饰,而且小鼠精子活力变化不显著.表明Cd可能是通过诱导中段55 kDa蛋白发生酪氨酸磷酸化修饰从而抑制精子活力,EGTA能螯合Cd离子并有效防止其毒性作用.研究证实,Cd诱导精子特异性蛋白酪氨酸磷酸化增强,进而抑制精子活力.EGTA可以用于体外控制Cd进入细胞的阻断剂,为Cd繁殖毒性分子机制的研究提供了研究手段. 展开更多
关键词 重金属 信号通路 繁殖毒性 阻断剂
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