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雌马酚干预对棕榈酸诱导L6细胞线粒体稳态紊乱的调节作用研究
1
作者 于生财 倪向敏 +3 位作者 张贵明 白倩 梁馨予 王建 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期163-170,共8页
目的观察雌马酚(equol,Eq)干预对棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导的L6细胞线粒体稳态紊乱的影响,并探讨其相关机制。方法体外培养L6细胞,将细胞分为对照组、模型(PA)组、PA+Eq组、PA+Eq+SR18292、PA+Eq+Phttp组、PA+Eq+RM02812组。检测作... 目的观察雌马酚(equol,Eq)干预对棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导的L6细胞线粒体稳态紊乱的影响,并探讨其相关机制。方法体外培养L6细胞,将细胞分为对照组、模型(PA)组、PA+Eq组、PA+Eq+SR18292、PA+Eq+Phttp组、PA+Eq+RM02812组。检测作用不同时间点各组细胞活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)水平、细胞活力、葡萄糖摄取能力;以及干预24 h各组线粒体膜电位、自噬强度变化;荧光探针标记线粒体,观察各组线粒体形态变化;透射电镜观察各组线粒体形态结构和自噬小体;检测各组同源性磷酸酶张力蛋白诱导激酶1(PTENinducedputative kinase1,PINK1)、帕金森蛋白(Parkin)、SQSTM1蛋白(sequestosomel,P62)、微管相关蛋白1Ⅰ轻链3(microtubule-associated protein 1Ⅰlight chain 3,LC3Ⅰ)、微管相关蛋白1Ⅱ轻链3(microtubule-associated protein 1Ⅱlight chain 3,LC3Ⅱ)、线粒体融合蛋白2(mitochondrial fusion protein 2,MFN2)、动力相关蛋白1(dynaminrelatedprotein 1,DRP1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(peroxisomeproliferator-activatedreceptorγco-activator-1α,PGC-1α)表达。结果0.25 mmol/L棕榈酸处理细胞6 h后活性氧水平显著增高(P<0.05),细胞活力下降(P<0.05),葡萄糖摄取量降低(P<0.05);与模型组相比,雌马酚能明显降低活性氧水平(P<0.05),提高细胞活力和葡萄糖消耗;棕榈酸干预24 h后,线粒体膜电位明显下降(P<0.05),自噬水平降低(P<0.05);与模型组相比,雌马酚能改善线粒体膜电位下降,促进线粒体融合,减少裂变(P<0.05);PINK1、Parkin、P62、LC3Ⅱ、MFN2和PGC-1α的表达明显增高(P<0.05),DRP1表达降低(P<0.05)结论雌马酚能够改善棕榈酸诱导的L6细胞线粒体稳态紊乱,减轻线粒体裂变,其部分机制可能与雌马酚促进线粒体自噬有关。 展开更多
关键词 雌马酚 L6细胞 活性氧 线粒体稳态 线粒体自噬
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谷氨酰胺对结直肠癌HT-29细胞放射敏感性的影响及机制探讨
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作者 卢亨 倪向敏 +4 位作者 于生财 梁馨予 朱文艺 李忠俊 王建 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1007-1014,共8页
目的观察不同浓度谷氨酰胺(glutamine,Gln)对结直肠癌HT-29细胞放射敏感性的影响,并探讨其可能机制。方法体外培养HT-29细胞,将对数生长期的HT-29细胞按照Gln不同浓度设置对照组(2 mmol/L,培养基基础浓度)、实验组Ⅰ(4 mmol/L)、实验组... 目的观察不同浓度谷氨酰胺(glutamine,Gln)对结直肠癌HT-29细胞放射敏感性的影响,并探讨其可能机制。方法体外培养HT-29细胞,将对数生长期的HT-29细胞按照Gln不同浓度设置对照组(2 mmol/L,培养基基础浓度)、实验组Ⅰ(4 mmol/L)、实验组Ⅱ(6 mmol/L)、实验组Ⅲ(8 mmol/L),预处理2 h后给予Co 60源放射。通过CCK-8法检测未放射与放射后不同浓度Gln对细胞活力的影响;克隆形成实验检测放射后不同浓度Gln对细胞放射敏感性的影响;活性氧(ROS)试剂盒检测放射后24 h细胞ROS水平;流式细胞仪检测放射后48 h细胞凋亡率;蛋白印迹法测定放射后各组细胞Nrf2、HO-1、cleaved-Caspase3蛋白的表达水平。结果未放射的HT-29细胞在Gln干预24 h后实验组Ⅱ、实验组Ⅲ细胞活力明显高于对照组、实验组Ⅰ(P<0.05)。HT-29细胞放射24 h后,各实验组细胞活力明显高于对照组(P<0.05);放射后14 d,各实验组细胞克隆形成数均高于对照组(P<0.05);放射后24 h,各实验组ROS水平均低于对照组(P<0.05);放射后48 h,各实验组细胞凋亡率均低于对照组(P<0.05)。实验组ⅠNrf2表达高于对照组(P<0.05);实验组Ⅱ、ⅢNrf2、HO-1表达均高于对照组和实验组Ⅰ(P<0.05),cleaved-Caspase3表达均低于对照组和实验组Ⅰ(P<0.05);实验组Ⅲcleaved-Caspase3表达低于实验组Ⅱ(P<0.05)。结论谷氨酰胺能显著降低HT-29细胞的放射敏感性,其机制与减轻氧化应激损伤和减少细胞凋亡有关,这可能不利于结直肠癌患者放疗。 展开更多
关键词 谷氨酰胺 HT-29细胞 氧化应激损伤 细胞凋亡 放射敏感性
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雌马酚通过调控自噬干预棕榈酸诱导的L6细胞肌管萎缩
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作者 于生财 倪向敏 +2 位作者 卢亨 张贵明 王建 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第15期1604-1611,共8页
目的观察雌马酚(equol,Eq)干预对棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导的L6大鼠成肌细胞肌管萎缩的影响,并探讨其机制。方法体外培养L6细胞,以不同浓度的Eq、PA处理24 h,通过CCK-8法检测相对细胞活力确定Eq、PA干预的适宜浓度。将细胞分为对照... 目的观察雌马酚(equol,Eq)干预对棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导的L6大鼠成肌细胞肌管萎缩的影响,并探讨其机制。方法体外培养L6细胞,以不同浓度的Eq、PA处理24 h,通过CCK-8法检测相对细胞活力确定Eq、PA干预的适宜浓度。将细胞分为对照组、模型组(PA:0.25 mmol/L)、干预组(PA:0.25 mmol/L+Eq:1μmol/L)和自噬抑制剂组(PA:0.25 mmol/L+Eq:1μmol/L+3-MA:1 mmol/L)。干预24 h后检测各组细胞葡萄糖摄取能力;HE染色观察细胞肌管生长情况;透射电镜观察细胞自噬小体数量;激光共聚焦显微镜观察经线粒体荧光探针标记的线粒体形态;Western blot检测MyHC、p62蛋白、LC3蛋白、MFN2和DRP1表达水平。结果干预24 h后,与对照组比较,模型组L6细胞葡萄糖消耗明显减低(P<0.05),肌管直径明显减小(P<0.05),自噬小体数量减少,线粒体裂变增加,MyHC、MFN2蛋白表达水平降低(P<0.05),而p62、DRP1表达水平及LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比值增加(P<0.05);与模型组相比,干预组L6细胞葡萄糖消耗明显增加(P<0.05),肌管直径明显增大(P<0.05),自噬小体数量增加,线粒体裂变减少,MyHC、MFN2蛋白表达水平升高(P<0.05),而p62、DRP1表达水平及LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比值降低(P<0.05);Eq对PA诱导的L6细胞葡萄糖消耗,肌管直径,自噬小体数量,线粒体裂变,MyHC、p62、MFN2、DRP1蛋白表达水平及LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比值的影响可被3-MA有效抑制。结论Eq可有效改善PA诱导的L6细胞肌管萎缩,其部分机制与Eq通过促进自噬,减轻线粒体裂变有关。 展开更多
关键词 雌马酚 L6细胞 自噬 肌管萎缩 棕榈酸
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