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珠子参中法尼基焦磷酸合酶(FPS)对皂苷生物合成的影响研究 被引量:11
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作者 刘美佳 +3 位作者 姜森 张翔 刘迪秋 葛锋 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期611-618,共8页
珠子参作为名贵中草药已有上千年应用历史,珠子参皂苷是珠子参的主要活性成分,由达玛烷型和齐墩果烷型三萜皂苷组成。目前,对珠子参皂苷的生物合成了解甚少,有必要开展与皂苷合成相关的基础研究工作。已有报道表明,法尼基焦磷酸合酶(FPS... 珠子参作为名贵中草药已有上千年应用历史,珠子参皂苷是珠子参的主要活性成分,由达玛烷型和齐墩果烷型三萜皂苷组成。目前,对珠子参皂苷的生物合成了解甚少,有必要开展与皂苷合成相关的基础研究工作。已有报道表明,法尼基焦磷酸合酶(FPS)可能是植物中皂苷合成的关键酶。本研究克隆了珠子参FPS基因(Pj FPS)的c DNA序列,并对其进行了生物信息学分析。基于Pj FPS序列构建了珠子参过表达载体p CAMBIA2300s-Pj FPS,将其转化到珠子参细胞中,成功获得阳性转基因细胞;测定了阳性细胞系中Pj FPS基因的相对表达量、FPS酶活、皂苷以及植物甾醇含量的变化。结果表明,与野生型珠子参细胞相比,Pj FPS转基因珠子参细胞系中,Pj FPS基因的相对表达量、FPS酶活以及皂苷含量均有不同程度的提高。而且,由于皂苷合成代谢流的增加,也促进了相关重要关键酶基因的表达。在效果最好的阳性细胞中,Pj FPS基因的相对表达量、FPS酶活、皂苷含量分别为对照的12、4和3倍;同时,转基因细胞系的植物甾醇含量也有所升高。本研究通过对皂苷合成途径关键酶基因的调控实现了对皂苷生物合成的调节,为获得高效、稳定的珠子参皂苷合成调控技术提供理论参考和依据。 展开更多
关键词 珠子参 人参属 人参皂苷 三萜 过表达
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三七转录因子PnWRKY1对三七皂苷生物合成的影响 被引量:6
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作者 姜森 +3 位作者 姜利 曲媛 刘迪秋 葛锋 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期430-438,共9页
该研究以野生型三七为材料,采用同源克隆的方法,获得三七转录因子PnWRKY1基因,运用农杆菌转化法构建转基因细胞系,通过测定转基因细胞系中的总皂苷含量以及重要单体皂苷的含量,并采用qRT-PCR分析皂苷合成途径中相关基因的表达情况,为三... 该研究以野生型三七为材料,采用同源克隆的方法,获得三七转录因子PnWRKY1基因,运用农杆菌转化法构建转基因细胞系,通过测定转基因细胞系中的总皂苷含量以及重要单体皂苷的含量,并采用qRT-PCR分析皂苷合成途径中相关基因的表达情况,为三七皂苷生物合成高效调控策略的建立提供理论依据。结果显示:(1)转录因子PnWRKY1长度为810bp,编码269个氨基酸。(2)成功构建PnWRKY1过表达载体pCAMBIA2300sPnWRKY1,经农杆菌转化获得了6株具有卡那霉素抗性的转基因细胞系(T_1~T_6),对卡那霉素基因nptⅡ进行PCR检测表明,所有细胞系均有与预期大小一致的450bp特异性条带,说明成功获得了6株PnWRKY1过表达转基因细胞系。(3)6株转基因细胞系中的PnWRKY1表达水平均极显著高于野生型细胞系,其中表达量最高的T_3细胞系比野生型增加了5.36倍。(4)过表达PnWRKY1基因细胞系的总皂苷生物合成均得到显著提高,其中T_1~T_6中总皂苷含量分别为野生型细胞系的2.46、1.98、2.67、1.74、2.54和1.98倍;6株过表达PnWRKY1细胞系中的4种单体皂苷R1、Rg1、Re、Rb1的含量与野生型细胞系相比均有不同程度的提高,且T_3细胞系中的单体皂苷Re含量最高(37.81mg/g)。(5)与野生型细胞系(WT)相比,过表达PnWRKY1细胞系中三七皂苷合成途径中的关键酶基因PnDS、PnSS和PnSE的最高表达水平分别增加3.1、4.0和4.5倍。研究表明,转录因子PnWRKY1在三七细胞中的过表达可能参与调节皂苷生物合成部分重要酶基因的表达,且PnWRKY1可能通过调控三七皂苷生物合成途径中关键酶基因的表达间接影响三七皂苷的合成。 展开更多
关键词 人参属 转录因子 过表达 三萜皂苷
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珠子参中HMGR基因对皂苷生物合成的影响 被引量:4
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作者 刘美佳 +3 位作者 姜森 张翔 葛锋 刘迪秋 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期624-630,共7页
该研究以珠子参愈伤组织为材料,通过同源克隆方法获得了珠子参3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)基因(PjHMGR,登录号:MG712296)的cDNA序列,并对其进行生物信息学分析。基于PjHMGR序列构建了珠子参过表达载体pCAMBIA2300s-PjHMGR,通... 该研究以珠子参愈伤组织为材料,通过同源克隆方法获得了珠子参3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)基因(PjHMGR,登录号:MG712296)的cDNA序列,并对其进行生物信息学分析。基于PjHMGR序列构建了珠子参过表达载体pCAMBIA2300s-PjHMGR,通过根瘤农杆菌转化法将其转化到珠子参细胞中,成功获得7株阳性转PjHMGR基因细胞系;通过实时荧光定量PCR、比色法及皂化法等技术测定阳性细胞系PjHMGR基因的相对表达量、HMGR酶活、皂苷和植物甾醇含量变化。结果显示:(1)与野生型珠子参细胞系相比,转PjHMGR基因珠子参阳性细胞系中,PjHMGR基因的相对表达量、HMGR酶活和皂苷含量均有不同程度的提高;在效果最好的阳性细胞中,PjHMGR基因的相对表达量、HMGR酶活和皂苷含量分别为对照的7.15、6.14和3.50倍。(2)在研究过程中,发现转基因细胞系的植物甾醇含量也有所升高。研究认为,将珠子参关键酶基因PjHMGR过表达载体导入珠子参愈伤组织细胞中,可引起相关关键酶基因相对表达量和PjHMGR酶活性的增加,从而调控珠子参总皂苷的合成,对皂苷合成途径中关键酶基因进行调控将可能实现对皂苷生物合成的调节。 展开更多
关键词 珠子参 HMGR 皂苷 三萜 过表达
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三七PnbHLH转录因子过表达与PnCAS RNAi协同作用对皂苷合成的影响 被引量:4
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作者 姜利 +3 位作者 江敏 崔秀明 刘迪秋 葛锋 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期94-102,共9页
该研究克隆了三七转录因子基因PnbHLH,其开放阅读框长为966 bp,编码321个氨基酸。构建了三七转录因子PnbHLH过表达载体,成功实现了转录因子PnbHLH基因过表达与植物甾醇合成支路关键酶基因PnCAS RNAi在三七细胞中的整合,探讨过表达PnbHL... 该研究克隆了三七转录因子基因PnbHLH,其开放阅读框长为966 bp,编码321个氨基酸。构建了三七转录因子PnbHLH过表达载体,成功实现了转录因子PnbHLH基因过表达与植物甾醇合成支路关键酶基因PnCAS RNAi在三七细胞中的整合,探讨过表达PnbHLH基因与PnCAS RNAi协同作用对三七皂苷生物合成的调控作用。结果表明,转录因子PnbHLH能够与三七皂苷生物合成途径关键酶基因PnDS,PnSS和PnSE的启动子互作,进而通过调控关键酶基因的表达,间接影响皂苷的生物合成。进一步研究证明,过表达PnbHLH与PnCAS RNAi协同作用是调控皂苷生物合成更加高效的手段。与野生型和PnCAS RNAi三七细胞相比,过表达PnbHLH和PnCAS RNAi细胞系中,三七总皂苷和主要单体皂苷(Rd,Rb_(1),Re,Rg_(1),R_(1))的含量均有不同程度提高,说明皂苷生物合成的正向调节和反向调节2种方式产生了叠加效应。该研究既发挥了转录因子的“多点调控”优势,又整合了皂苷副产物支路的弱化调节,探索出针对三七皂苷生物合成更加合理而高效的调控策略。 展开更多
关键词 三七 皂苷 人参属 bHLH转录因子 RNA干扰
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毛笔·儿童组
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作者 曹冬阳 陈慧平 +153 位作者 陈明巍 赵奕诺 曹家瑞 卜文博 马艺珈 苗家梁 宋泓瑾 马夕涵 陈博锐 林可 刘雅欣 倪晨曦 马艺哲 马思齐 白洪文 拜立成 毛醒尘 曹艳阳 陈嘉阳 陈凌澈 刘颜溪 李兆涵 李允轩 王立钧 王连禄 陈禹帆 王焕钦 尚奕辰 任津震 李佳轩 聂诗蕊 陈庆豪 胡译丹 黄星童 康文轩 苗家铭 孟凡博 游李心悦 姜航 苗涵宇 张瑞涵 王玥璎 马孔阳 黄凯庆 田博俊 兰思睿 王建栋 滕玉涛 吴霜 沈文惠 池哲瀚 左亦凡 赵红菲 刘玟含 荣浩博 赵晗钰 张井然 邓祺琦 贾博文 贾骐骋 康文佳 蒋翎韬 庄睿 苗长长 张奕心 李军章 贺若轩 侯柏欣 贾云鹭 杨呈礼 薛艺萱 杨镒玮 张慧 仉靖伟 康晓旭 薛子轩 刘天宇 唐子淳 黄湘钿 耿菱希 关雨泽 赵文琦 俞书蔓 张修凯 刘羽僖 史宜灵 樊禹泽 庄若熙 王禹博 安俊尧 屠凌可 李梦涵 林熙梓 胡孜维轩 龚学士 高梓涵 高雯奕 高挺峻 段天晨 周紫涵 孙鹏博 刘绚钰 张昕倪 张心贝 丁海真 潘科烨 苏雅萱 朱沈浩 许东烨 孙鲁粤 聂文力 朱昕 李思辰 陈心茹 段林宏 邓鸿睿 吴思翰 王尔墨 胡尚晗 章瑾轩 吴雅澜 叶帅 施君禄 廖俊熙 裴柯旻 许逸梵 陈艺煊 刘鸿睿 薛铮琦 许锴 朱方翊 王祎松 王翊宸 王浩宇 刘昱卓 裘豪炜 沈一丁 音昊天 胡铭芮 张恒硕 张庭旭 陈玙璐 陈昱桐 范书妍 黄映梦 张静琬 何昱熠 黄廷赫 江语晨 何果儿 洪灿 张俊熙 李芊序 《青少年书法(少年版)》 2021年第10期140-175,共36页
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大连安波旅游观光采摘园考察报告
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作者 《新农业》 2016年第23期49-51,共3页
当前,我国经济发展进入新常态,正从高速增长转向中高速增长,如何在经济增速放缓背景下继续强化农业基础地位、促进农民持续增收,是必须破解的重大课题。'十三五'规划提出:稳定农村土地承包关系,完善土地所有权、承包权、经营权... 当前,我国经济发展进入新常态,正从高速增长转向中高速增长,如何在经济增速放缓背景下继续强化农业基础地位、促进农民持续增收,是必须破解的重大课题。'十三五'规划提出:稳定农村土地承包关系,完善土地所有权、承包权、经营权分置办法,依法推进土地经营权有序流转,构建培育新型农业经营主体的政策体系。培养新型职业农民。深化农村土地制度改革。 展开更多
关键词 旅游 观光采摘园 大连 辽宁
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