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狂犬病病毒核蛋白基因在大肠杆菌中稳定表达条件的优化及纯化
被引量：
3
1
作者
于
志
凤
张守峰
+2 位作者
刘晔
张菲
扈荣良
《吉林农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期581-585,共5页
将狂犬病病毒SRV9株核蛋白基因按正确的读码框克隆至GST融合表达载体pGEX-4T-1中，转化至大肠杆菌Rosetta株，IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经SDS—PAGE分析显示，相对分子量约为82kD，与预期大小一致。Western-blot检测结果表明，融合...
将狂犬病病毒SRV9株核蛋白基因按正确的读码框克隆至GST融合表达载体pGEX-4T-1中，转化至大肠杆菌Rosetta株，IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经SDS—PAGE分析显示，相对分子量约为82kD，与预期大小一致。Western-blot检测结果表明，融合蛋白能与多克隆阳性血清发生特异性反应。为获取大量ELISA包被用核蛋白，试验还借助SDS—PAGE方法对重组目的基因的表达条件进行了优化，比较了诱导温度、菌密度、IPTG浓度、诱导时间等参数对重组基因表达的影响，以确定最佳诱导表达条件。结果表明：27～32℃，OD550 0．3～0．4，IPIG 0．06mmol／L、诱导至OD550值不再增加时为最佳诱导表达条件。优化后经扫描分析显示，所表达融合蛋白占菌体总蛋白的20％以上。经包涵体纯化和亲和层析纯化，可获得纯度较高的GST融合蛋白。
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关键词
狂犬病病毒核蛋白
大肠杆菌
诱导温度
菌密度
IPTG浓度
诱导时间
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职称材料
乙型肝炎病毒(adr亚型)重组逆转录病毒包装及滴度测定
2
作者
王岚
杨世忠
+1 位作者
于
志
凤
赵颖
《中国老年学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第9期1217-1219,共3页
目的包装乙型肝炎病毒(adr亚型)重组逆转录病毒并进行滴度测定,为下一步构建乙型肝炎病毒(adr亚型)转基因小鼠奠定基础。方法将乙型肝炎病毒(adr)全基因组插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了乙型肝炎(adr)重组逆转录病毒载体,鉴定正反向...
目的包装乙型肝炎病毒(adr亚型)重组逆转录病毒并进行滴度测定,为下一步构建乙型肝炎病毒(adr亚型)转基因小鼠奠定基础。方法将乙型肝炎病毒(adr)全基因组插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了乙型肝炎(adr)重组逆转录病毒载体,鉴定正反向后,脂质体转染PA317包装细胞,G418抗性压力下进行筛选得到阳性细胞克隆,扩大培养后进行滴度测定,选取产毒率高细胞克隆株,然后扩大培养、浓缩,进行滴度测定。结果分别获得HBV(adr)全基因组正向和反向插入的重组逆转录病毒。正连重组逆转录病毒载体经PA317细胞包装,经筛选、浓缩后滴度为106CFU/m l,反连重组逆转录病毒载体经PA317细胞包装,经筛选、浓缩后滴度为105CFU/m l。结论PA317细胞包装了含乙型肝炎病毒(adr)全基因组的重组逆转录病毒。
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关键词
乙型肝炎病毒(adr)
重组逆转录病毒载体
转染
包装
滴度测定
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职称材料
地理信息系统技术在地理教学中的应用
被引量：
3
3
作者
于
志
凤
《新课程（教研版）》
2012年第6期161-161,共1页
问题是物理教学活动的开端，又是贯穿物理教学的主线。在此研究在高中物理教学中运用问题教学的策略和要求。
关键词
问题教学法
高中物理
教学
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职称材料
题名
狂犬病病毒核蛋白基因在大肠杆菌中稳定表达条件的优化及纯化
被引量：
3
1
作者
于
志
凤
张守峰
刘晔
张菲
扈荣良
机构
军事医学科学院军事兽医研究所
出处
《吉林农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期581-585,共5页
基金
国家"863"高技术研究发展计划基金资助项目(2001AA020304-1)
文摘
将狂犬病病毒SRV9株核蛋白基因按正确的读码框克隆至GST融合表达载体pGEX-4T-1中，转化至大肠杆菌Rosetta株，IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经SDS—PAGE分析显示，相对分子量约为82kD，与预期大小一致。Western-blot检测结果表明，融合蛋白能与多克隆阳性血清发生特异性反应。为获取大量ELISA包被用核蛋白，试验还借助SDS—PAGE方法对重组目的基因的表达条件进行了优化，比较了诱导温度、菌密度、IPTG浓度、诱导时间等参数对重组基因表达的影响，以确定最佳诱导表达条件。结果表明：27～32℃，OD550 0．3～0．4，IPIG 0．06mmol／L、诱导至OD550值不再增加时为最佳诱导表达条件。优化后经扫描分析显示，所表达融合蛋白占菌体总蛋白的20％以上。经包涵体纯化和亲和层析纯化，可获得纯度较高的GST融合蛋白。
关键词
狂犬病病毒核蛋白
大肠杆菌
诱导温度
菌密度
IPTG浓度
诱导时间
Keywords
Rabies virus N gene
E. coli
inducing temperature
strain density
IPTG concentration
inducing time
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
Q786 [农业科学—兽医学]
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职称材料
题名
乙型肝炎病毒(adr亚型)重组逆转录病毒包装及滴度测定
2
作者
王岚
杨世忠
于
志
凤
赵颖
机构
吉林大学第一医院消化内科
吉林省中医院
吉林省五星动物保健药厂
出处
《中国老年学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第9期1217-1219,共3页
基金
国家自然科学基金项目(30570266)资助
文摘
目的包装乙型肝炎病毒(adr亚型)重组逆转录病毒并进行滴度测定,为下一步构建乙型肝炎病毒(adr亚型)转基因小鼠奠定基础。方法将乙型肝炎病毒(adr)全基因组插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了乙型肝炎(adr)重组逆转录病毒载体,鉴定正反向后,脂质体转染PA317包装细胞,G418抗性压力下进行筛选得到阳性细胞克隆,扩大培养后进行滴度测定,选取产毒率高细胞克隆株,然后扩大培养、浓缩,进行滴度测定。结果分别获得HBV(adr)全基因组正向和反向插入的重组逆转录病毒。正连重组逆转录病毒载体经PA317细胞包装,经筛选、浓缩后滴度为106CFU/m l,反连重组逆转录病毒载体经PA317细胞包装,经筛选、浓缩后滴度为105CFU/m l。结论PA317细胞包装了含乙型肝炎病毒(adr)全基因组的重组逆转录病毒。
关键词
乙型肝炎病毒(adr)
重组逆转录病毒载体
转染
包装
滴度测定
Keywords
Hepatitis B virus （adr）
Recombinant retroviral vectors
Transfection
Packaging
Viral titers identification
分类号
R512.6 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
地理信息系统技术在地理教学中的应用
被引量：
3
3
作者
于
志
凤
机构
河北省涿鹿县矾山中学
出处
《新课程（教研版）》
2012年第6期161-161,共1页
文摘
问题是物理教学活动的开端，又是贯穿物理教学的主线。在此研究在高中物理教学中运用问题教学的策略和要求。
关键词
问题教学法
高中物理
教学
分类号
G633.7 [文化科学—教育学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
狂犬病病毒核蛋白基因在大肠杆菌中稳定表达条件的优化及纯化
于
志
凤
张守峰
刘晔
张菲
扈荣良
《吉林农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
3
下载PDF
职称材料
2
乙型肝炎病毒(adr亚型)重组逆转录病毒包装及滴度测定
王岚
杨世忠
于
志
凤
赵颖
《中国老年学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
0
下载PDF
职称材料
3
地理信息系统技术在地理教学中的应用
于
志
凤
《新课程（教研版）》
2012
3
下载PDF
职称材料
已选择
0
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引证文献
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