油气勘探中“两宽一高”技术问题的探讨与应用 被引量：62

1

作者 王学军 于宝利 +4 位作者 赵小辉 蔡希玲 李虹 方勇 刘玉莲 《中国石油勘探》 CAS 北大核心 2015年第5期41-53,共13页

"两宽一高"(宽频带、宽方位、高密度)是高精度地震勘探一体化技术,从野外采集、数据处理到资料解释应有配套的方法理念和技术流程。阐述了"两宽一高"的基本定义和技术指标,通过理论记录与合成记录从分辨率、保真度... "两宽一高"(宽频带、宽方位、高密度)是高精度地震勘探一体化技术,从野外采集、数据处理到资料解释应有配套的方法理念和技术流程。阐述了"两宽一高"的基本定义和技术指标,通过理论记录与合成记录从分辨率、保真度、反演精度等方面说明该项技术的优势:适用于薄互层发育区的油藏描述、各向异性发育区的裂缝预测、深层目标勘探和特殊岩性体的勘探,也是改善复杂区构造成像的有效手段。3个地区的应用实例展示了"两宽一高"技术在复杂油气藏勘探评价和开发中的作用,即有效提升地震资料的品质,使之能够细致地描述复杂储层的形态和流体分布,提高信息的保真度。 展开更多

关键词 倍频程 两宽一高 保真度 分辨率 波阻抗反演 储层描述 油藏评价

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属性融合技术在微小断裂识别中的应用 被引量：17

2

作者 赵小辉 于宝利 曹小璐 《石油地球物理勘探》 EI CSCD 北大核心 2017年第A02期164-169,共6页

地震属性类型已增至上百种,如何从众多属性中选取对研究目标有效的地震属性至关重要。同时,随着高密度宽方位采集处理技术的不断发展和完善,地震资料品质得到明显提高,但是目前对这些地震数据的使用还停留在常规构造解释方面,缺少从不... 地震属性类型已增至上百种,如何从众多属性中选取对研究目标有效的地震属性至关重要。同时,随着高密度宽方位采集处理技术的不断发展和完善,地震资料品质得到明显提高,但是目前对这些地震数据的使用还停留在常规构造解释方面,缺少从不同方位地震数据中提取有效断裂信息的针对性方法。本次以玛湖1井区三维地震数据为例,通过不同手段将多个数据体和多种地震属性融合解释,有效提高了研究区微小断裂识别精度,取得了较好的应用效果。 展开更多

关键词 GeoEast解释系统 属性融合 核主成分分析 特征值融合 微小断裂识别

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GeoEast特色解释技术在玛湖1井区的应用 被引量：13

3

作者 赵小辉 王晓辉 +1 位作者 于宝利 周丽萍 《石油地球物理勘探》 EI CSCD 北大核心 2014年第A01期179-183,8,共5页

准噶尔盆地西北缘玛湖凹陷油气资源丰富,玛湖1井在百口泉组获高产工业油气流,但在玛湖1井上倾方向钻探的玛湖2井却失利,说明该区油气成藏机理复杂,如何解释两口井的油气显示差异成为制约该区油气勘探的主要难题。为搞清玛湖1、玛湖2井... 准噶尔盆地西北缘玛湖凹陷油气资源丰富,玛湖1井在百口泉组获高产工业油气流,但在玛湖1井上倾方向钻探的玛湖2井却失利,说明该区油气成藏机理复杂,如何解释两口井的油气显示差异成为制约该区油气勘探的主要难题。为搞清玛湖1、玛湖2井之间的油藏关系,利用GeoEast系统多种特色体属性,对研究区开展了小断裂识别、储层预测及含油气检测,明确了两口井之间的砂体叠置关系及油藏类型,为下步勘探开发提供了可借鉴的依据。 展开更多

关键词 GeoEast解释系统 特色属性分析 玛湖凹陷

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不同FSH剂量·季节和重复超排对山羊超数排卵的影响 被引量：10

4

作者 袁玉国 安礼友 +2 位作者 于宝利 杨廷佳 成勇 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第18期11076-11077,11130,共3页

[目的]研究不同FSH剂量、季节和重复超排等因素对供体羊超排效果的影响,为扬州地区进一步做好山羊胚胎移植和胚胎生物工程研究提供必要的数据。[方法]设计不同FSH剂量(240 IU和300 IU)、季节(10～12月份和4～6月份)、重复超排(第1次和第... [目的]研究不同FSH剂量、季节和重复超排等因素对供体羊超排效果的影响,为扬州地区进一步做好山羊胚胎移植和胚胎生物工程研究提供必要的数据。[方法]设计不同FSH剂量(240 IU和300 IU)、季节(10～12月份和4～6月份)、重复超排(第1次和第2次),鉴定超排效果。[结果]FSH 240 IU和300 IU组的平均排卵点和可用胚数分别为10.12个、8.82枚和15.55个、13.15枚,2组间平均排卵点和可用胚数差异显著(P<0.05);在4～6月份和10～12月份的平均排卵点和可用胚数分别为9.05个、7.05枚和15.55个、13.15枚,2组间平均排卵点和可用胚数差异显著(P<0.05);供体使用1次和2次的超排效果差异不显著(P>0.05)。[结论]FSH剂量、季节因素对超排效果影响显著,供体重复使用对超排效果影响不显著。 展开更多

关键词 超数排卵 山羊 FSH 季节

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异常地层压力预测技术在准噶尔盆地的应用 被引量：10

5

作者 徐宝荣 许海涛 +2 位作者 于宝利 景海璐 郭金宇 《新疆石油地质》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期597-601,共5页

准噶尔盆地玛湖凹陷二叠系和三叠系经钻探证实存在地层压力异常,并且具有高压高产特征。目前测井和地震的地层压力预测方法都是基于泥岩欠压实理论,对砂砾岩储集层段进行预测时会出现预测地层压力与实测地层压力差异大的问题。针对准噶... 准噶尔盆地玛湖凹陷二叠系和三叠系经钻探证实存在地层压力异常,并且具有高压高产特征。目前测井和地震的地层压力预测方法都是基于泥岩欠压实理论,对砂砾岩储集层段进行预测时会出现预测地层压力与实测地层压力差异大的问题。针对准噶尔盆地异常压力与产油气特征,采取单井预测结合地震数据平面预测的方式,形成了地震层速度法、特征曲线反演法和改进的Fillippone公式法的地层压力预测配套技术,在准噶尔盆地玛湖凹陷取得了良好的应用效果,为科学钻井和高效井位部署提供了依据。 展开更多

关键词 准噶尔盆地 异常地层压力 井震结合 压力预测

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用多属性变换由地震数据预测测井特性 被引量：8

6

作者 Daniel P Hampson +1 位作者 于宝利 刘新利 《勘探地球物理进展》 2002年第3期65-78,共14页

描述了一种由地震数据预测测井特性的新方法。分析的数据由一系列与某个 3D地震数据体相连的井的目标测井曲线组成。从 3D地震数据体计算了一系列基于样点的属性 ,目标是要导出一个多属性变换 ,即属性的某个子集与目标测井值之间的线性... 描述了一种由地震数据预测测井特性的新方法。分析的数据由一系列与某个 3D地震数据体相连的井的目标测井曲线组成。从 3D地震数据体计算了一系列基于样点的属性 ,目标是要导出一个多属性变换 ,即属性的某个子集与目标测井值之间的线性或者非线性变换。选定的子数据体是用向前逐步回归的方法确定的。传统交会图的扩展包括用褶积算子来消除目标测井曲线与地震数据之间的频率差异。在线性模式中 ,多属性变换方法要采用最小平方法计算一系列权值。在非线性模式中 ,则是用选定的属性为输入进行神经网络训练。对两种类型的神经网络 ,即多层前馈神经网络 (MLFN)和随机神经网络 (PNN)进行了评价。为了评价导出的多属性变换的可靠性 ,进行了交叉验证 ,即从训练数据体中按顺序每次剔除一口井 ,再由剩余的井重新导出这一变换 ,然后计算被隐去井的预测误差。该变换应用于地震数据体时 ,将合理误差 (所有被隐去井的平均误差 )用作为似然预测误差。该方法被用于两组实际数据。在每种情况下 ,当从单属性回归到线性多属性预测 ,再到神经网络预测过渡时 ,预测能力持续提高。这种改善不仅对训练数据的效果明显 ,对验证数据的效果也很明显。此外 ,神经网络法与线性回归法相比 ,分辨率也有明显的改善。 展开更多

关键词 多属性变换 地震数据 预测 测井特性 地震属性 多元线性回归 神经网络 褶积因子 高分辨率

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我国定向刨花板发展概述 被引量：7

7

作者 于宝利 郭建军 《中国人造板》 2012年第2期7-10,共4页

概述了我国定向刨花板生产的发展历程及生产状况,介绍了定向刨花板国内外的应用情况,分析了我国定向刨花板市场状况,并对我国定向刨花板市场营销提出了建议。

关键词 定向刨花板 发展历程 市场营销

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准噶尔盆地南缘复杂构造地震资料处理解释攻关及效果 被引量：7

8

作者 邓勇 吕焕通 +3 位作者 于宝利 温铁民 吴建学 岳前进 《中国石油勘探》 CAS 2011年第5期19-24,171,共6页

准噶尔盆地南缘是该盆地内构造最复杂的区域。一直以来,高陡构造区的地震成像问题是南缘油气勘探的一个瓶颈。通过对南缘古牧地地区新、老两块三维开展叠前深度偏移连片处理解释,探索出一套适用于高陡构造的处理解释配套技术。围绕地震... 准噶尔盆地南缘是该盆地内构造最复杂的区域。一直以来,高陡构造区的地震成像问题是南缘油气勘探的一个瓶颈。通过对南缘古牧地地区新、老两块三维开展叠前深度偏移连片处理解释,探索出一套适用于高陡构造的处理解释配套技术。围绕地震成像精度,处理上优选适用于攻关区的静校正技术、叠前保幅去噪技术、一致性处理技术、叠前深度偏移技术等针对性技术措施,解释上综合运用各种信息进行合理构造建模及精细速度建模。通过一体化攻关,攻关区断裂带资料空白区成像质量明显提高,地层结构更加清楚,"南北分带、纵向分层"的地质结构特征更加明朗,明确了勘探主攻方向和目标。 展开更多

关键词 准噶尔盆地南缘 古牧地 叠前深度偏移 构造建模 地质结构

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人乳铁蛋白乳腺特异性表达载体的构建及其功能的验证 被引量：6

9

作者 袁玉国 安礼友 +2 位作者 于宝利 杨廷佳 成勇 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期6-10,共5页

构件pbCNCS/LF36经微注射获得转基因小鼠,同时为了准确筛选出整合的单克隆细胞,增加1个Cre/LoxP-GFP-Neo系统构建成pAPLM,将其转染山羊胎儿成纤维细胞筛选阳性细胞。结果表明:小鼠受体妊娠率28.5%,产仔32个,PCR整合检测4只阳性(3♀、1♂... 构件pbCNCS/LF36经微注射获得转基因小鼠,同时为了准确筛选出整合的单克隆细胞,增加1个Cre/LoxP-GFP-Neo系统构建成pAPLM,将其转染山羊胎儿成纤维细胞筛选阳性细胞。结果表明:小鼠受体妊娠率28.5%,产仔32个,PCR整合检测4只阳性(3♀、1♂,整合率12.5%)。构件产生的3只母鼠和4号后代母鼠乳汁中重组人乳铁蛋白(hLF)用ELISA方法检测,表达量分别为3.8、2.8、0.9mg.mL-1,4号后代3只母鼠表达量分别为4.2、3.9、3.6mg.mL-1。构件pAPLM片段转染细胞后,经G418筛选,挑取单克隆扩大培养,其中8株PCR阳性克隆细胞荧光显微镜观察100%都有GFP的表达。以上结果证实,双启动子能调控外源基因在乳腺中特异高水平表达hLF,双标记基因可提高筛选阳性供核细胞的准确性,这为进一步作体细胞转基因克隆奠定基础。 展开更多

关键词 人乳铁蛋白 双标记基因 双启动子 小鼠 胎儿成纤维细胞 荧光蛋白

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基于补偿阈值的曲波变换地面微地震弱信号检测方法 被引量：6

10

作者 何柯 周丽萍 +3 位作者 于宝利 邓勇 王丽丽 王茜 《物探与化探》 CAS CSCD 2016年第1期55-60,共6页

地面微地震弱信号在经过曲波变换后得到的曲波系数有小的幅值,这部分小幅值系数与噪声的曲波系数产生重叠,采用常规阈值函数,不能区分该部分有效弱信号系数,会被当作噪声系数去除。对于地面微地震资料弱信号的处理,应该在尽少损伤弱信... 地面微地震弱信号在经过曲波变换后得到的曲波系数有小的幅值,这部分小幅值系数与噪声的曲波系数产生重叠,采用常规阈值函数,不能区分该部分有效弱信号系数,会被当作噪声系数去除。对于地面微地震资料弱信号的处理,应该在尽少损伤弱信号的基础上进行噪声的压制。因此笔者在常规阈值函数的基础上,提出一种补偿阈值函数算法,在弱信号和噪声之间加入一个新的阈值,这样就可对之前损伤的与噪声曲波系数重叠的弱信号进行补偿。通过对模型的试算和实际资料的处理,补偿阈值函数算法能较好地对微地震资料中的随机噪声和相干噪声进行压制,提高资料的信噪比,达到弱信号检测的目的。 展开更多

关键词 地面微地震 弱信号检测 曲波变换 补偿阈值 信噪比

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定向刨花板生产工艺及设备选型 被引量：5

11

作者 于宝利 赵宝东 辛锡平 《中国人造板》 2014年第5期8-10,共3页

介绍定向刨花板生产工艺、影响定向刨花板质量的主要因素和生产线设备选型。

关键词 定向刨花板 生产工艺 设备选型

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岩石物理建模技术在玛湖西斜坡储集层预测中的应用 被引量：4

12

作者 于宝利 赵小辉 +3 位作者 瞿建华 曹小璐 邓勇 王晓辉 《新疆石油地质》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期720-725,共6页

准噶尔盆地玛湖凹陷西斜坡下三叠统百口泉组为一套扇三角洲前缘砂砾岩沉积,常规的叠后波阻抗反演不能区分有效储集层和致密储集层,制约了井位部署和储量计算。通过已有测井资料弹性参数交会发现,纵横波速度比是区分致密储集层和有效储... 准噶尔盆地玛湖凹陷西斜坡下三叠统百口泉组为一套扇三角洲前缘砂砾岩沉积,常规的叠后波阻抗反演不能区分有效储集层和致密储集层,制约了井位部署和储量计算。通过已有测井资料弹性参数交会发现,纵横波速度比是区分致密储集层和有效储集层的有效弹性敏感参数。通过准确计算泥质含量、有效孔隙度及含水饱和度等参数,选择了合理的岩石物理模型,有效提高了横波速度估算精度,为研究区叠前弹性敏感参数反演提供了基础资料保障。在此基础上,优选纵横波速度比参数有效落实了有效储集层的分布,钻井成功率达到80%,为研究区井位部署及储量落实提供了依据。 展开更多

关键词 准噶尔盆地 玛湖凹陷 百口泉组 岩石物理建模 横波速度预测 纵横波速度比 储集层预测

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准噶尔盆地石炭系火山岩地震勘探关键技术 被引量：3

13

作者 顾雯 印兴耀 +3 位作者 卞保力 于宝利 邓勇 林煜 《石油地球物理勘探》 EI CSCD 北大核心 2022年第6期1453-1463,I0008,共12页

以准噶尔盆地腹部石炭系原生韵律型和西北缘风化壳型火山岩为例,针对地震勘探难点,论述了地震勘探关键技术。研究认为,对于原生韵律型火山岩,按照岩性油气藏的思路,采用低频可控震源采集、井控低频补偿以及层间多次波压制处理技术可以... 以准噶尔盆地腹部石炭系原生韵律型和西北缘风化壳型火山岩为例,针对地震勘探难点,论述了地震勘探关键技术。研究认为,对于原生韵律型火山岩,按照岩性油气藏的思路,采用低频可控震源采集、井控低频补偿以及层间多次波压制处理技术可以大幅度提高深层地震资料的保真度与空间分辨率;以多属性融合技术预测的火山岩相为约束,再通过叠后相控反演,可以实现优势储层的定量预测。对于风化壳型火山岩,按照后期改造型油气藏的思路,强反射界面续至波压制、“真”地表TTI叠前深度偏移等技术可以实现构造、地层和断裂精细成像;古地貌恢复与多属性断裂精细识别技术可以落实有利目标区。通过关键技术的应用,准噶尔盆地腹部火山岩地震资料频带由3~25Hz拓宽到8~46Hz,储层的钻探平均符合率由65%提高至81%。该方法可为国内外类似火山岩油气藏的勘探提供参考。 展开更多

关键词 火山岩 准噶尔盆地 原生韵律型 风化壳 地震预测

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速生杨树、桉树木材生产定向刨花板纵横谈 被引量：4

14

作者 于宝利 《中国人造板》 2015年第12期4-7,共4页

简述我国森林资源现状及速生杨树、桉树种植情况,并对以杨树和桉树木材为原料生产定向刨花板的可行性做简要分析。

关键词 速生杨树 桉树 定向刨花板 可行性

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准噶尔盆地腹部石南21井油藏再认识 被引量：3

15

作者 朱峰 瞿建华 +3 位作者 于宝利 邓勇 刘亚会 宋明星 《新疆石油地质》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期673-677,共5页

继准噶尔盆地腹部石南21井中侏罗统头屯河组获得规模发现之后,后续勘探未获重大突破。通过对石南21井头屯河组油藏的重新分析后认为,输导断裂和岩性是制约油气勘探是否有重大发现的2大关键因素。通过对新部署高精度三维地震资料的精细解... 继准噶尔盆地腹部石南21井中侏罗统头屯河组获得规模发现之后,后续勘探未获重大突破。通过对石南21井头屯河组油藏的重新分析后认为,输导断裂和岩性是制约油气勘探是否有重大发现的2大关键因素。通过对新部署高精度三维地震资料的精细解释,对输导断裂和岩性目标开展精细研究,基本落实了2期2组输导断裂的展布,沿基东凸起两翼发现多期坡折带,坡折带上倾方向泥岩整体遮挡,侧向分支河道分隔成藏,其中东翼受3期坡折带控制,发育多期超覆砂体,与断裂形成良好匹配,后续勘探规模较大,在此基础上开展岩性目标精细刻画,为下步钻探目标的落实提供依据。 展开更多

关键词 准噶尔盆地 石南21井 头屯河组 输导断裂 成藏模式 拟声波波阻抗反演

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OSB生产工艺及应用领域拓展 被引量：3

16

作者 于宝利 赵宝东 《国际木业》 2014年第9期42-44,共3页

定向刨花板（Oriented Strand Board）是以窄长薄平刨花为基本单元,施胶后通过专用设备将表芯层刨花分别定向铺装、热压制成的一种结构板材。 定向刨花板于上世纪70年代由欧洲科学家研制成功,1979年在美国建成第一条OSB生产线。当时应... 定向刨花板（Oriented Strand Board）是以窄长薄平刨花为基本单元,施胶后通过专用设备将表芯层刨花分别定向铺装、热压制成的一种结构板材。 定向刨花板于上世纪70年代由欧洲科学家研制成功,1979年在美国建成第一条OSB生产线。当时应用范围还比较窄,后来经过近10年的深入实践和市场开发,应用领域得到不断拓展。到了上世纪90年代,OSB在欧洲得到迅猛发展,并迅速取代胶合板和细木工板成为欧洲发展最快的板种之一。 展开更多

关键词 应用领域 OSB 定向刨花板 定向铺装 长薄 专用设备 STRAND 芯层 施胶量 静曲强度

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浅谈定向刨花板生产及气流分选机的应用 被引量：3

17

作者 于宝利 《中国人造板》 2008年第4期20-21,共2页

定向刨花板是以小径材、间伐材、木芯、板皮、枝桠材等为原料,用特殊的刨片设备（长材刨片机或两工段削片刨片设备）,顺着木材纹理方向将其加工成长90mm左右,宽5～20mm,厚0.5mm左右的刨花,经过干燥、施胶和定向铺装，将刨花按照规定的... 定向刨花板是以小径材、间伐材、木芯、板皮、枝桠材等为原料,用特殊的刨片设备（长材刨片机或两工段削片刨片设备）,顺着木材纹理方向将其加工成长90mm左右,宽5～20mm,厚0.5mm左右的刨花,经过干燥、施胶和定向铺装，将刨花按照规定的方向纵横交错定向排列后，再热压成型的一种人造板。 展开更多

关键词 刨花板生产 分选机 应用 气流 定向刨花板 刨片机 纹理方向 定向排列

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TALENs介导MSTN基因突变山羊的制备及性能分析 被引量：1

18

作者 宋绍征 何正义 +3 位作者 成勇 于宝利 张婷 李丹 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期531-542,共12页

肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)是一种骨骼肌生长发育的负调控因子,可以抑制成肌细胞的增殖,是动物品种改良的重要候选基因,该基因突变能够引起骨骼肌的广泛性增生与肥大,产生“双肌”症状,导致动物脂肪分化减少、肌肉含量增加,从而满... 肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)是一种骨骼肌生长发育的负调控因子,可以抑制成肌细胞的增殖,是动物品种改良的重要候选基因,该基因突变能够引起骨骼肌的广泛性增生与肥大,产生“双肌”症状,导致动物脂肪分化减少、肌肉含量增加,从而满足市场动物肉品质消费的需求。为了获得“双肌”表型的MSTN基因突变克隆山羊,本研究在山羊MSTN基因第一外显子序列设计并构建TALENs表达载体,转染山羊胎儿成纤维细胞,经嘌呤霉素筛选获得抗性细胞株,通过PCR检测和基因测序筛选MSTN基因突变细胞株作为供核细胞进行山羊体细胞核移植,并鉴定MSTN基因突变类型;通过组织切片分析MSTN基因突变山羊肌肉组织形态结构,监测不同月龄克隆山羊体重并分析其不同生长发育阶段的体重增长趋势。结果表明,共获得109株MSTN基因突变细胞株,突变效率达到79.0%(109/138),其中46株为双等位基因突变,占细胞株总数的33.3%(46/138)。选取4株生长状态较好的MSTN基因突变细胞株(1株为双等位基因纯合突变,3株为非纯合突变)进行体细胞核移植至12只受体山羊,30 d时B超检查出受孕母羊4只,受孕率为33.3%(4/12),妊娠到期分娩2只克隆山羊,测序结果表明M-1克隆山羊MSTN双等位基因中的一个等位基因未产生突变,另一个等位基因缺失3 bp;M-2克隆山羊MSTN双等位基因中的一个等位基因产生1 bp碱基插入,另一个等位基因缺失13 bp,两种突变均造成MSTN在突变位点之后的蛋白序列丢失。此外,M-1克隆山羊肌纤维排列紧密且粗大,每月体重均高于普通野生型山羊,但与普通野生型山羊生长趋势一致,且能够健康发育至成年。本研究利用TALENs技术成功介导山羊MSTN基因定点修饰,并获得MSTN基因突变的山羊胎儿成纤维细胞,将其作为供核细胞成功生产MSTN基因突变克隆山羊,为培育“双肌”表型山羊新品系奠定了技术基础,也为将� 展开更多

关键词 肌肉生长抑制素 基因突变 山羊 TALENs 体细胞核移植

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单、双标记基因筛选的转人乳铁蛋白基因供核细胞生产克隆山羊效率的比较 被引量：2

19

作者 安礼友 袁玉国 +2 位作者 于宝利 杨廷佳 成勇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1482-1491,共10页

为比较两种筛选标记基因生产转人乳铁蛋白(hLF)基因克隆山羊的效率,利用单(新霉素抗性基因,Neor)、双(新霉素抗性和绿色荧光蛋白基因,Neor/GFP)标记基因筛选转基因的供核细胞,并制作体细胞核移植转基因山羊。山羊胎儿成纤维细胞电转染... 为比较两种筛选标记基因生产转人乳铁蛋白(hLF)基因克隆山羊的效率,利用单(新霉素抗性基因,Neor)、双(新霉素抗性和绿色荧光蛋白基因,Neor/GFP)标记基因筛选转基因的供核细胞,并制作体细胞核移植转基因山羊。山羊胎儿成纤维细胞电转染单标记基因表达载体(pBLC14)或双标记基因表达载体(pAPLM),分别有58.8%(20/34)和86.7%(26/30)的抗性细胞株检测到外源基因;转染pAPLM的细胞传代培养后,仅有20%(6/30)株细胞在传代中所有细胞均能观察到荧光;分别以pBLC14和pAPLM的细胞株作为供核细胞进行体细胞核移植,共获得806枚重构胚胎,胚胎移植受体后35 d、60 d妊娠率分别为53.8%、26.9%和39.1%、21.7%,最终分别产下5只(1.9%)和7只(1.4%)克隆山羊;经PCR及Southern blotting检测,所有出生山羊均整合有外源基因。结果显示,以单、双标记基因筛选供核细胞,其重构胚融合率、怀孕率和克隆动物出生率差异不显著(P>0.05),Neor/GFP双标记基因能准确、有效地用于转基因供核细胞筛选。同时,结果也表明Neor/GFP双标记基因转染的体细胞作为供核细胞对体细胞克隆效率未出现不利影响。 展开更多

关键词 筛选基因 供核细胞 转基因动物 人乳铁蛋白 细胞核移植

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人工锌指核酸酶突变EGFP基因的功能分析 被引量：1

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作者 袁玉国 于宝利 +5 位作者 宋绍征 周峰 张利清 顾迎迎 禹明慧 成勇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1573-1580,共8页

锌指核酸酶技术在基因定点修饰中具有效率高和特异性好等特点,并成功应用于数十种生物。目前,该技术是否能应用羊上尚未报道。为了敲除转基因山羊标记基因(EGFP),构建了一对针对EGFP外显子上的锌指核酸酶表达载体,将其电转染至转EGFP基... 锌指核酸酶技术在基因定点修饰中具有效率高和特异性好等特点,并成功应用于数十种生物。目前,该技术是否能应用羊上尚未报道。为了敲除转基因山羊标记基因(EGFP),构建了一对针对EGFP外显子上的锌指核酸酶表达载体,将其电转染至转EGFP基因胎儿成纤维细胞中,研究了锌指核酸酶突变EGFP基因的效率和方式,利用基因显微注射单细胞获得获得的转基因(EGFP)细胞系作为锌指核酸酶的靶细胞。结果显示,通过锌指核酸酶的突变作用,转染后的细胞发绿色荧光比例下降,测序结果显示在EGFP外显子中插入1个碱基G,导致编码EGFP基因的阅读框改变,从而起到基因突变的作用。结果表明,文中构建的锌指核酸酶对EGFP基因有突变作用,可以为以后获得无标记基因供核细胞进行体细胞核移植生产克隆羊奠定基础。 展开更多

关键词 人工锌指核酸酶 核移植 EGFP 基因打靶 细胞显微注射 山羊体细胞

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