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人线粒体肌酸激酶广泛型亚型在大肠埃希菌中的表达及抗体制备
被引量:
1
1
作者
张建
王爱华
+1 位作者
顾鹏飞
于嘉
屏
(
指导
)
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第5期360-363,共4页
目的 获得人线粒体肌酸激酶广泛型亚型 (uMtCK)的全长基因 ,在大肠埃希菌中表达 ,研制抗uMtCK多克隆抗体。方法 采用逆转录PCR从培养的肿瘤细胞 (Hela细胞 )中成功扩增出 10 6 2bp的uMtCK的基因片段 ,插入到质粒pMD18 T中 ,经酶切和...
目的 获得人线粒体肌酸激酶广泛型亚型 (uMtCK)的全长基因 ,在大肠埃希菌中表达 ,研制抗uMtCK多克隆抗体。方法 采用逆转录PCR从培养的肿瘤细胞 (Hela细胞 )中成功扩增出 10 6 2bp的uMtCK的基因片段 ,插入到质粒pMD18 T中 ,经酶切和测序证实为uMtCK的基因编码序列 ,再插入到质粒pQE30 ,转化大肠埃希菌 ,诱导重组质粒pQE30 uMtCK表达酶融合蛋白。经亲和层析纯化 ,并进行SDS PAGE、westernblot鉴定及酶活性测定。纯化的uMtCK蛋白免疫家兔制备抗uMtCK多抗。结果 RT PCR扩增出的片段经酶切鉴定和测序证实为uMtCK的基因 ;在大肠埃希菌M15中实现了高效、可溶性的融合表达 ,表达量约 17%。重组uMtCK具有CK样催化活性 ,表明原核表达的uMtCK具有类似于天然蛋白质的生物学活性。经免疫印迹分析 ,制备的抗uMtCK多抗适合作uMtCK的进一步分析之用。结论 人uMtCK在大肠埃希菌中实现了高效表达 ,制备了针对uMtCK的抗体。
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关键词
CK
大肠埃希菌
亚型
高效表达
肌酸激酶
线粒体
抗体制备
酶切
测序
纯化
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职称材料
题名
人线粒体肌酸激酶广泛型亚型在大肠埃希菌中的表达及抗体制备
被引量:
1
1
作者
张建
王爱华
顾鹏飞
于嘉
屏
(
指导
)
机构
第二军医大学长征医院实验诊断科
出处
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第5期360-363,共4页
基金
上海市科委基金项目 (No.0 3 411993 9)
文摘
目的 获得人线粒体肌酸激酶广泛型亚型 (uMtCK)的全长基因 ,在大肠埃希菌中表达 ,研制抗uMtCK多克隆抗体。方法 采用逆转录PCR从培养的肿瘤细胞 (Hela细胞 )中成功扩增出 10 6 2bp的uMtCK的基因片段 ,插入到质粒pMD18 T中 ,经酶切和测序证实为uMtCK的基因编码序列 ,再插入到质粒pQE30 ,转化大肠埃希菌 ,诱导重组质粒pQE30 uMtCK表达酶融合蛋白。经亲和层析纯化 ,并进行SDS PAGE、westernblot鉴定及酶活性测定。纯化的uMtCK蛋白免疫家兔制备抗uMtCK多抗。结果 RT PCR扩增出的片段经酶切鉴定和测序证实为uMtCK的基因 ;在大肠埃希菌M15中实现了高效、可溶性的融合表达 ,表达量约 17%。重组uMtCK具有CK样催化活性 ,表明原核表达的uMtCK具有类似于天然蛋白质的生物学活性。经免疫印迹分析 ,制备的抗uMtCK多抗适合作uMtCK的进一步分析之用。结论 人uMtCK在大肠埃希菌中实现了高效表达 ,制备了针对uMtCK的抗体。
关键词
CK
大肠埃希菌
亚型
高效表达
肌酸激酶
线粒体
抗体制备
酶切
测序
纯化
Keywords
ubiquitous mitochondrial creatine kinase
gene clone
prokaryotic expression
preparation of antibody
分类号
R735 [医药卫生—肿瘤]
R392 [医药卫生—临床医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人线粒体肌酸激酶广泛型亚型在大肠埃希菌中的表达及抗体制备
张建
王爱华
顾鹏飞
于嘉
屏
(
指导
)
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
1
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