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向日葵黑茎病菌分离鉴定及其RFLP分析 被引量:15
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作者 张祥林 刘彬 +3 位作者 王翀 义柯 罗明 陈燕 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期204-209,共6页
【目的】对新疆近期发生的向日葵黑茎病进行病原菌分离鉴定,并对该菌进行RFLP分析。【方法】用常规分离培养法从田间采集的向日葵黑茎病病株获得致病菌,观察该菌的形态学特征;用PCR法对该菌ITS区进行扩增和测序,并与向日葵茎点霉黑茎病... 【目的】对新疆近期发生的向日葵黑茎病进行病原菌分离鉴定,并对该菌进行RFLP分析。【方法】用常规分离培养法从田间采集的向日葵黑茎病病株获得致病菌,观察该菌的形态学特征;用PCR法对该菌ITS区进行扩增和测序,并与向日葵茎点霉黑茎病菌进行分子比对,明确二者的同源性;选取10种限制性内切酶对该菌的ITS区PCR产物进行RFLP分析。【结果】该菌的形态学特征为茎点霉属真菌,与向日葵茎点霉黑茎病菌的同源性达到99%以上,说明该致病菌为向日葵茎点霉黑茎病菌Phoma helianthi Taberosi。通过RFLP分析确定了该病菌的酶切位点。【结论】该致病菌的形态学和分子生物学鉴定结果表明,向日葵黑茎病由向日葵茎点霉黑茎病菌引起。 展开更多
关键词 向日葵黑茎病 向日葵茎点霉黑茎病菌 分离 鉴定 RFLP PCR
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基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的葡萄卷叶伴随病毒3号检测方法 被引量:17
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作者 张娜 义柯 +6 位作者 魏霜 胡白石 陆平 赛铁尔汗 刘中勇 张永江 张祥林 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期302-308,共7页
【目的】建立一种快速、灵敏的重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测葡萄卷叶伴随病毒3(Grapevine leafroll-associated virus 3,GLRaV-3)方法。【方法】根据GLRaV-3已测序和已报道的HSP70基因(Heat shock protein 70)保守序列,设计用于RPA检... 【目的】建立一种快速、灵敏的重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测葡萄卷叶伴随病毒3(Grapevine leafroll-associated virus 3,GLRaV-3)方法。【方法】根据GLRaV-3已测序和已报道的HSP70基因(Heat shock protein 70)保守序列,设计用于RPA检测的特异性引物,建立GLRaV-3的RPA检测方法,并对其特异性和灵敏度进行验证。【结果】建立RPA检测方法能够从GLRaV-3带毒株中检测到约380 bp的特异性条带,仅需在37℃下恒温反应40 min,无需特殊的仪器设备,经特异性评价特异性好,且该方法与普通PCR检测灵敏度基本一致。【结论】建立的RPA检测方法特异性强、灵敏度高,无需特殊的仪器设备,适合GLRaV-3的快速检测方法。 展开更多
关键词 葡萄卷叶伴随病毒3 RPA 检测方法
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南方菜豆花叶病毒RT-RPA检测方法的建立 被引量:10
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作者 魏霜 袁俊杰 +7 位作者 李桂芬 义柯 魏梅生 冯黎霞 胡学难 何日荣 武目涛 张永江 《植物检疫》 北大核心 2018年第1期50-53,共4页
本研究针对南方菜豆花叶病毒(Southern bean mosaic virus,SBMV)保守序列设计了特异性PRA引物,建立了快速灵敏的一步法逆转录重组酶聚合酶扩增检测技术(RT-RPA),采用SBMV,BPMV,SMV,Ar MV和TRSV共5种病毒评价该方法的特异性,并对其灵敏... 本研究针对南方菜豆花叶病毒(Southern bean mosaic virus,SBMV)保守序列设计了特异性PRA引物,建立了快速灵敏的一步法逆转录重组酶聚合酶扩增检测技术(RT-RPA),采用SBMV,BPMV,SMV,Ar MV和TRSV共5种病毒评价该方法的特异性,并对其灵敏度进行评价。结果显示,建立的RT-RPA方法特异性强;灵敏度达到0.1 ng。本研究建立的RT-RPA方法检测SBMV特异性强、灵敏度高,无需特殊的仪器设备,适合实验室或者现场快速检测。 展开更多
关键词 南方菜豆花叶病毒 RPA 检测
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两种向日葵检疫性真菌病害的多重DPO-PCR检测方法 被引量:9
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作者 张娜 义柯 +4 位作者 魏霜 梁巧玲 鄞杰平 刘中勇 陈卫民 《植物检疫》 北大核心 2015年第6期35-38,共4页
本研究根据向日葵白锈病菌大亚基核糖体RNA基因序列,向日葵黑茎病菌的ITS-5.8S r RNA基因序列,分别设计特异性DPO(dual priming oligonucleotide)引物,建立同时检测这两种检疫性病菌的多重DPO-PCR检测方法,并对其特异性和灵敏度进行评... 本研究根据向日葵白锈病菌大亚基核糖体RNA基因序列,向日葵黑茎病菌的ITS-5.8S r RNA基因序列,分别设计特异性DPO(dual priming oligonucleotide)引物,建立同时检测这两种检疫性病菌的多重DPO-PCR检测方法,并对其特异性和灵敏度进行评价。结果表明,所设计的DPO引物特异性强,仅向日葵白锈病菌和向日葵黑茎病菌可分别扩增出307 bp与388 bp的特异性条带,其他参照菌株及阴性对照均无条带;检测体系对混合模板中向日葵白锈病菌和向日葵黑茎病菌的DNA灵敏度均达0.05 ng/μL;且该检测方法对退火温度不敏感,适用范围广。该方法能够准确、快速的检测向日葵白锈病菌和向日葵黑茎病菌,适合于口岸实验室的快速检测。 展开更多
关键词 向日葵白锈病菌 向日葵黑茎病菌 多重DPO-PCR 检测
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向日葵白锈病菌巢式PCR检测方法的研究 被引量:6
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作者 刘彬 张祥林 +2 位作者 王羽中 义柯 陈燕 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期859-863,共5页
【目的】建立向日葵白锈病菌(Albugo tragopogi (Persoon) Schruter var helianthi Novotlenova)的巢式PCR检测方法。【方法】用通用引物NL1/NL4对采自伊犁的向日葵白锈病菌进行PCR扩增、克隆、酶切和测序,设计该病菌的特异性引物,用巢... 【目的】建立向日葵白锈病菌(Albugo tragopogi (Persoon) Schruter var helianthi Novotlenova)的巢式PCR检测方法。【方法】用通用引物NL1/NL4对采自伊犁的向日葵白锈病菌进行PCR扩增、克隆、酶切和测序,设计该病菌的特异性引物,用巢式PCR法检测供试样品。【结果】序列测定和比对结果表明,该病菌的核酸序列与GeneBank公布的向日葵白锈病菌核酸序列同源率为97%。针对该段基因设计向日葵白锈病菌的特异性引物ATHP3/ATHP4,用巢式PCR法对供试样品进行扩增,扩增片段为370 bp。【结论】成功建立了向日葵白锈病菌巢式PCR检测方法。 展开更多
关键词 向日葵 白锈病菌 巢式PCR 检测
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葡萄A病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量:8
6
作者 张永江 辛言言 +1 位作者 李桂芬 义柯 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期103-109,共7页
【目的】葡萄A病毒(Grapevine virus A,GVA)是葡萄皱木复合病的重要病原之一,以带毒种苗的嫁接为田间主要传播途径。使用无毒葡萄苗木进行生产是控制该病毒病害的根本措施,而简便灵敏的检测技术是筛选无毒种苗的有效保证。为此,开展针... 【目的】葡萄A病毒(Grapevine virus A,GVA)是葡萄皱木复合病的重要病原之一,以带毒种苗的嫁接为田间主要传播途径。使用无毒葡萄苗木进行生产是控制该病毒病害的根本措施,而简便灵敏的检测技术是筛选无毒种苗的有效保证。为此,开展针对GVA的反转录环介导等温扩增技术(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)研究,旨在建立其RT-LAMP特异性检测方法。【方法】通过比对分析GVA的CP(coat protein)基因序列并经引物设计软件Primer Explore 4.0设计,获得6条检测引物GVA-FIP(5′-CTTACAGCCACGCTCAGAGTCC-CGTGGGAAGTTGGTTGTGT-3′)、GVA-BIP(5′-GCCCGTCAAAGGGGCTACAC-TCATA GGCGTTCTGTGCGA-3′)、GVA-F3(5′-AGAAGATGGGGATAGACCCG-3′)、GVA-B3(5′-CCGCCATTAACACGAGGAA-3′)、GVA-LF(5′-AT CCTTCCCACCAGCTCGG-3′)和GVA-LB(5′-TCAGGCAGATGTGTGAACCT-3′)。将RT-LAMP的反应温度分别设为59、61、63和65℃,根据1 h扩增曲线出现的先后次序确定最佳反应温度。以同样侵染葡萄的沙地葡萄茎痘相关病毒(Grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPa V)、葡萄卷叶病毒(Grapevine leafrollassociated virus,GLRa V)、葡萄斑点病毒(Grapevine fleck virus,GFKV)的阳性材料及阴性对照(健康葡萄叶片,用NC表示)的总RNA为模板,对RT-LAMP方法的特异性进行测定。将GVA的总RNA进行10倍梯度稀释,得到10^1、10^2、10^3、10^4、10^5、10^6倍的不同稀释液后用作模板分别进行RT-LAMP和普通RT-PCR检测,比较两者的灵敏度。RT-LAMP产物可进行实时扩增曲线检测,阳性样品在浊度仪上出现扩增曲线,阴性样品无扩增曲线;还可进行染料颜色反应检测,在反应产物中加入SYBR Green I染料,阳性样品产生肉眼可见的绿色,阴性反应为橙色。【结果】建立了GVA的RT-LAMP快速特异性检测方法,最佳反应温度为65℃。该方法约27 min即可检测到扩增曲线,而普通RT-PCR获得检测 展开更多
关键词 葡萄A病毒 反转录环介导等温扩增技术 检测
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一步法逆转录重组酶聚合酶常温扩增(RT-RPA)技术检测菜豆荚斑驳病毒 被引量:7
7
作者 张永江 魏霜 +3 位作者 袁俊杰 义柯 李桂芬 魏梅生 《江苏农业科学》 2018年第21期96-98,共3页
菜豆荚斑驳病毒(bean pod mottle virus,简称BPMV)是我国进境植物检疫性有害生物,建立快速灵敏的一步法逆转录重组酶聚合酶扩增(reverse transcription-recombinase polymerase amplification,简称RT-RPA)技术用于对BPMV的检测。根据BPM... 菜豆荚斑驳病毒(bean pod mottle virus,简称BPMV)是我国进境植物检疫性有害生物,建立快速灵敏的一步法逆转录重组酶聚合酶扩增(reverse transcription-recombinase polymerase amplification,简称RT-RPA)技术用于对BPMV的检测。根据BPMV基因组的保守序列,设计重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,简称RPA)技术特异性引物,对BPMV、南方菜豆花叶病毒(southern bean mosaic virus,简称SBMV)、大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,简称SMV)、南芥菜花叶病毒(arabis mosaic virus,简称Ar MV)及烟草环斑病毒(tobacco ringspot virus,简称TRSV)共5种病毒进行RT-RPA特异性验证;并设计5个模板浓度梯度,以验证RT-RPA方法的灵敏性。结果表明,建立的RT-RPA检测方法能够从BPMV样品中检测到198 bp的特异性条带,且仅需在40℃下恒温反应40 min,不需要特殊的仪器设备;特异性验证试验表明,除BPMV能检测到特异性条带外,其他4种病毒SBMV、SMV、Ar MV、TRSV均未检测到特异性条带,证明该方法特异性好; RT-RPA检测BPMV的灵敏度达到10-4稀释度,说明所建立的RT-RPA方法灵敏性高。综上所述,建立的RT-RPA方法检测BPMV特异性强、灵敏度高,无需特殊的仪器设备,适合实验室或者现场快速检测。 展开更多
关键词 菜豆荚斑驳病毒 RT-RPA检测 植物检疫
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紫色辣椒新品种‘江大紫椒1号’
8
作者 郭瑞 陈高 +4 位作者 赵慧霞 义柯 兰红 万何平 陈禅友 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1175-1176,共2页
‘江大紫椒1号’是以自交系P-9-2-5-1为母本,紫-11-2-1为父本配制而成的辣椒一代杂种。植株长势强,中熟;幼果为绿色,商品果为紫色、羊角形,果长19.84 cm,果肩宽2.9 cm,果肉厚2.8 mm,单果质量56.99 g;维生素C含量625.2 mg·kg^(-1),... ‘江大紫椒1号’是以自交系P-9-2-5-1为母本,紫-11-2-1为父本配制而成的辣椒一代杂种。植株长势强,中熟;幼果为绿色,商品果为紫色、羊角形,果长19.84 cm,果肩宽2.9 cm,果肉厚2.8 mm,单果质量56.99 g;维生素C含量625.2 mg·kg^(-1),花色苷含量44.6 mg·kg^(-1)。果实微辣,鲜食菜用,平均产量为45 840 kg·hm^(-2);适宜湖北平原地区春季和秋季保护地栽培。 展开更多
关键词 辣椒 紫果 品种
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一步法逆转录重组酶聚合酶常温扩增技术(RT-RPA)检测大豆花叶病毒 被引量:6
9
作者 袁俊杰 魏霜 +7 位作者 龙阳 马新华 杨卓瑜 卢乃会 义柯 魏梅生 李桂芬 张永江 《检验检疫学刊》 2018年第2期1-4,共4页
大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)是一种在全世界广泛分布并且破坏性极大的植物病毒,可以导致大豆产量骤减以及种质的衰退,为此,建立了快速灵敏的一步法逆转录重组酶聚合酶扩增检测技术(RT-RPA),利用该技术可以快速、准确、有效... 大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)是一种在全世界广泛分布并且破坏性极大的植物病毒,可以导致大豆产量骤减以及种质的衰退,为此,建立了快速灵敏的一步法逆转录重组酶聚合酶扩增检测技术(RT-RPA),利用该技术可以快速、准确、有效地检测大豆中携带的SMV。根据Gen Bank数据库中SMV的外壳蛋白基因序列,设计RPA特异性引物,采用SMV、BPMV、SBMV、Ar MV及TRSV共5种病毒进行RT-RPA特异性验证;并设计5个模板浓度梯度,验证RT-RPA方法的灵敏性。结果显示,建立的RT-RPA检测方法能够从SMV样品中检测到154 bp的特异性条带;特异性验证试验表明除SMV能检测到特异性条带以外,其他4种病毒BPMV、SBMV、Ar MV及TRSV均未检测到条带;RT-RPA检测SMV的灵敏度达到10-4稀释度。综上所述,本研究建立的RT-RPA方法检测SMV特异性强、灵敏度高,无需特殊的仪器设备,适合实验室或者现场快速检测。 展开更多
关键词 大豆花叶病毒 重组酶聚合酶扩增技术 检测
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土壤中梨火疫病菌实时荧光定量PCR检测及动态分析 被引量:1
10
作者 义柯 韩丽丽 +5 位作者 陈珊珊 罗亮 魏霜 李晓妹 牛蒙亮 陈卫民 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1839-1847,共9页
【目的】利用实时荧光定量PCR检测土壤中梨火疫病菌(Erwinia amylovora)浓度,明确梨火疫病菌在土壤中的动态变化规律。【方法】2021年3—11月采集库尔勒市发病香梨园810份土壤样品,应用所建立的实时荧光定量PCR检测体系,测定土壤中的梨... 【目的】利用实时荧光定量PCR检测土壤中梨火疫病菌(Erwinia amylovora)浓度,明确梨火疫病菌在土壤中的动态变化规律。【方法】2021年3—11月采集库尔勒市发病香梨园810份土壤样品,应用所建立的实时荧光定量PCR检测体系,测定土壤中的梨火疫病菌浓度,同时对梨园发病率及病情指数进行调查。【结果】土壤中梨火疫病菌浓度值变化趋势与梨园病情指数变化趋势一致,4—5月梨园病情指数快速升高至最高值,随着果树生长期延长,病情指数逐渐降低。土壤中梨火疫病菌浓度值从4月逐渐升高,6月平均浓度值为914 CFU·g^(-1),7月平均浓度值最高为965 CFU·g^(-1),随后逐渐降低;6月土壤带菌率为42.2%,浓度值≥10^(3)CFU·g^(-1)的土样13份;7月土壤带菌率为44.4%,浓度值≥10^(3)CFU·g^(-1)的土样26份;6月、7月土壤中梨火疫病菌浓度显著高于4月、10月、11月,致病风险较高。【结论】6月和7月土壤中梨火疫病菌浓度值最高,主要与4月、5月大量病花病果掉落造成病原菌积累有关。加强花期病害防治和梨园病残体清理可有效降低土壤中梨火疫病菌浓度,是降低梨火疫病菌在梨树根部侵染风险的关键点。 展开更多
关键词 梨火疫病菌 土壤 荧光定量PCR 动态分析
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利用小RNA深度测序技术从新疆葡萄上检出8种病毒 被引量:5
11
作者 于翠 义柯 +3 位作者 于子翔 陆平 陈仲兵 易建平 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期649-650,共2页
Kreuze et al(.2009)发现病毒特异的小RNA(small RNA,sRNA)为多拷贝的重叠序列,推测可通过深度测序技术获得病毒的大量sRNA序列,经拼接和比对分析后能高效鉴定病毒种类。目前,利用sRNA深度测序技术已在作物和昆虫上发现多种病毒(Li... Kreuze et al(.2009)发现病毒特异的小RNA(small RNA,sRNA)为多拷贝的重叠序列,推测可通过深度测序技术获得病毒的大量sRNA序列,经拼接和比对分析后能高效鉴定病毒种类。目前,利用sRNA深度测序技术已在作物和昆虫上发现多种病毒(Liu et al.,2011;He et al.,2015)。2013年本课题组在葡萄病害调查过程中发现,伊犁州部分地区的葡萄在种植4-5年后,叶片黄化、变小,整个植株矮化. 展开更多
关键词 病毒种类 测序技术 小RNA 葡萄 利用 RNA序列 新疆 病害调查
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基于DPO引物的SYBR Green Ⅰ实时荧光RT-PCR检测葡萄卷叶伴随病毒3号 被引量:5
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作者 义柯 张娜 +2 位作者 魏霜 陆平 张祥林 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期343-344,共2页
葡萄卷叶病是葡萄上一种重要的病毒病,在国内分布较为普遍,引起该病的葡萄卷叶伴随病毒(Grapevine leafroll-associated virus,GLRaV)是由多种病毒单独或复合侵染造成。已报道的GLRaVs至少有5种,其中GLRaV-3是葡萄卷叶病毒属Ampleovi... 葡萄卷叶病是葡萄上一种重要的病毒病,在国内分布较为普遍,引起该病的葡萄卷叶伴随病毒(Grapevine leafroll-associated virus,GLRaV)是由多种病毒单独或复合侵染造成。已报道的GLRaVs至少有5种,其中GLRaV-3是葡萄卷叶病毒属Ampleovirus典型成员(Ling et al.,2004)。 展开更多
关键词 葡萄卷叶病毒 荧光RT-PCR检测 病毒病 Green SYBR 伴随 DPO GLRaV-3
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甜菜霜霉病菌形态鉴定及28S rDNA序列分析 被引量:5
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作者 义柯 张祥林 +1 位作者 克衣木 陆平 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期249-254,共6页
【目的】利用形态学和分子生物学技术,对新疆甜菜霜霉病进行鉴定和基因序列分析。【方法】挑取甜菜叶片上霉层,对孢囊梗及孢子囊进行显微观察;提取甜菜霜霉病菌DNA,用卵菌纲通用引物NL1/NL4进行PCR扩增、序列测定、同源性比较。【结果... 【目的】利用形态学和分子生物学技术,对新疆甜菜霜霉病进行鉴定和基因序列分析。【方法】挑取甜菜叶片上霉层,对孢囊梗及孢子囊进行显微观察;提取甜菜霜霉病菌DNA,用卵菌纲通用引物NL1/NL4进行PCR扩增、序列测定、同源性比较。【结果】显微观察到的病原菌孢囊梗及孢子囊与已报道的甜菜霜霉病菌形态一致;PCR扩增28S rDNA末端序列为801 bp,Genbank比对结果显示该段序列与霜霉属粉霜霉菌(Peronospora farinose)最为接近,同源率在99%以上,与霜霉属主要典型株系同源性均在90%以上。【结论】显微形态观察和分子生物学鉴定结果一致,该病原菌属霜霉属,粉霜霉。 展开更多
关键词 甜菜霜霉病菌 28S RDNA PCR扩增
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不同营养和培养条件对向日葵黑茎病菌生长特性的影响 被引量:2
14
作者 刘彬 张祥林 +3 位作者 王翀 罗明 义柯 陈燕 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期271-277,共7页
【目的】对向日葵黑茎病菌Phoma helianthi Taberosi生态适应性中的营养和培养条件进行研究,以期建立常规生物学检测方法,以便采取有效检疫处理措施。【方法】不同营养和培养条件下(包括培养基、碳源、氮源、温度、酸碱度、光照),对该... 【目的】对向日葵黑茎病菌Phoma helianthi Taberosi生态适应性中的营养和培养条件进行研究,以期建立常规生物学检测方法,以便采取有效检疫处理措施。【方法】不同营养和培养条件下(包括培养基、碳源、氮源、温度、酸碱度、光照),对该菌培养7 d,测量其菌落直径大小和观察其生长状况。并用SPSS 12.0软件进行相应的计算处理、统计分析。【结果】向日葵黑茎病菌在PDA、HLA培养基上生长较好,在WA培养基上生长较慢。该病菌能充分利用可溶性淀粉和硝酸钾。在温度4~32℃均能生长,最适生长温度为24~28℃,适宜生长的pH 4.0~8.0,最适pH 5.0~7.0;在全光照培养条件下有助于菌丝的生长。【结论】通过不同营养和培养条件下的生长情况,可知该病菌的最适生长条件,有助于对该病菌进行有效的检疫处理。 展开更多
关键词 向日葵茎点霉黑茎病菌 生长特性 营养 培养条件
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PMA-qPCR检测十字花科黑斑病菌活菌方法的建立 被引量:4
15
作者 于璇 王卫芳 +4 位作者 李献锋 冯黎霞 义柯 张承军 魏霜 《植物检疫》 2021年第4期49-54,共6页
利用叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与实时荧光PCR技术相结合(PMA-qPCR),对PMA质量浓度、暗孵育和曝光时间等因素进行优化,建立了检测十字花科黑斑病菌活菌的方法。结果显示,当PMA质量浓度为10μg/mL,避光条件下孵育5 min、然... 利用叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与实时荧光PCR技术相结合(PMA-qPCR),对PMA质量浓度、暗孵育和曝光时间等因素进行优化,建立了检测十字花科黑斑病菌活菌的方法。结果显示,当PMA质量浓度为10μg/mL,避光条件下孵育5 min、然后曝光10 min,此条件下能够抑制10-7CFU/mL十字花科黑斑病菌死菌的DNA扩增,对活菌扩增无影响,通过对比qPCR和PMA-qPCR的灵敏度可知,两者灵敏度差异不大,最低检出限均为10-3CFU/mL,将PMA-qPCR方法用于实际5批十字花科黑斑病菌阳性的油菜籽样品检测,结果显示该方法能准确反映实际样品的带活菌的情况。本研究为十字花科黑斑病菌活菌的检测提供了快速检测方法,可为实验室该病菌的快速筛检提供参考。 展开更多
关键词 十字花科黑斑病菌 PMA-qPCR 活菌 检测
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城郊土地复垦技术及种植豌豆培肥效果评价研究
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作者 义柯 陈佩瑶 +2 位作者 郭瑞 王建兵 陈禅友 《江汉大学学报(自然科学版)》 2023年第6期11-17,共7页
以武汉市东西湖区城郊复垦土地为研究对象,设标准农用试验地作对照,比较分析复垦一年、复垦二年土壤改良情况,为我国城郊土地复垦提供技术方案和参考依据。采用人机结合方式清理复垦城郊土地表层(0~50 cm)建筑垃圾、水泥石块,卫星水平... 以武汉市东西湖区城郊复垦土地为研究对象,设标准农用试验地作对照,比较分析复垦一年、复垦二年土壤改良情况,为我国城郊土地复垦提供技术方案和参考依据。采用人机结合方式清理复垦城郊土地表层(0~50 cm)建筑垃圾、水泥石块,卫星水平整地仪平整地块;根据土层特性回填沙土或湖泥、塘泥,调整复垦土壤酸碱度;种植豌豆还田培肥,增加土壤有机质含量,改善土壤环境和肥力状况。结果表明:回填沙土或湖泥、塘泥,复垦一年土壤pH值调整到7.5,复垦二年土壤pH值调整到7.0,基本接近对照试验地的土壤pH平均值6.7。种植豌豆对照试验地土壤的有机质含量值为168.40‰,复垦一年土壤的有机质含量值为15.10‰,复垦二年土壤的有机质平均含量值为195.06‰,肥力达到标准化农用地的水平。复垦二年试验地豌豆株高整齐度指标为11.93,接近试验对照地13.75,说明复垦地土壤经过二次改良,土壤环境与肥力状况得到明显改善,营养成分均一化程度高,基本达到标准化农用地的水平,可以实现转换耕种。 展开更多
关键词 城郊土地 复垦技术 豌豆种植 培肥效果
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不同引物PCR检测向日葵黑茎病菌的灵敏度比较及应用 被引量:4
17
作者 张娜 义柯 +2 位作者 尚爽 陆平 易建平 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期801-805,共5页
为准确快速筛查进境油葵种子中携带的向日葵黑茎病菌Plenodomus lindquistii,采用常规PCR方法比较了3对向日葵黑茎病菌PCR检测引物320FOR/320RVE、LEPB/LEPF和LLF/LLR的灵敏度,对哈萨克斯坦进境120批油葵种子样品进行PCR检测,并对检测... 为准确快速筛查进境油葵种子中携带的向日葵黑茎病菌Plenodomus lindquistii,采用常规PCR方法比较了3对向日葵黑茎病菌PCR检测引物320FOR/320RVE、LEPB/LEPF和LLF/LLR的灵敏度,对哈萨克斯坦进境120批油葵种子样品进行PCR检测,并对检测为阳性的样品进行产物序列测定及病原菌分离。结果显示,引物320FOR/320RVE的检测灵敏度最高,可达10-5ng/μL,引物LEPB/LEPF和LLF/LLR分别为10-4ng/μL和10-3ng/μL。利用引物320FOR/320RVE、LEPB/LEPF和LLF/LLR对120批进境油葵种子样品进行检测,阳性检出率分别为65%、50%和45%,阳性检出率高低与引物的检测灵敏度相一致。阳性样品扩增的产物序列与Gen Bank中向日葵黑茎病菌的序列同源性最高;分离的病原菌菌落为乳白色至灰白色,分生孢子器黑褐色、球形并产生透明状分生孢子液,分生孢子单胞、无色、肾型、两端有油球,与已报道的向日葵黑茎病菌的病原特征描述一致,初步鉴定哈萨克斯坦进境油葵种子中存在向日葵黑茎病菌。 展开更多
关键词 向日葵黑茎病菌 PCR检测 灵敏度
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向日葵黄萎病病原菌轮枝菌的多重DPO-PCR检测方法 被引量:4
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作者 义柯 张娜 +2 位作者 魏霜 陆平 易建平 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期115-120,共6页
为建立可同时快速检测引起向日葵黄萎病害的2种检疫性病原菌大丽轮枝菌Verticillium dahliae Kleb.和黑白轮枝菌V.albo-atrum Reinke et Berthold的方法,根据2种病原菌的β-tubulin基因分别设计特异性DPO引物,建立多重DPO-PCR检测方法,... 为建立可同时快速检测引起向日葵黄萎病害的2种检疫性病原菌大丽轮枝菌Verticillium dahliae Kleb.和黑白轮枝菌V.albo-atrum Reinke et Berthold的方法,根据2种病原菌的β-tubulin基因分别设计特异性DPO引物,建立多重DPO-PCR检测方法,并对其特异性和灵敏度进行评价。结果表明,所设计的DPO引物特异性强,仅大丽轮枝菌和黑白轮枝菌可分别扩增出225 bp与151 bp的特异性条带,其它向日葵病害的7种病原菌及阴性对照均无目的条带;反应体系中引物终浓度为0.2μmol/L、退火温度为60℃时,30个扩增循环的检测灵敏度均可达0.05 ng菌丝DNA量;在45~65℃退火温度范围内均可高效扩增靶基因片段,表明该方法退火温度范围宽。所建立的检测方法能够准确、高效地检测引起向日葵黄萎病的大丽轮枝菌和黑白轮枝菌,可用于向日葵种子带菌筛查及田间病害诊断检测。 展开更多
关键词 向日葵黄萎病 黑白轮枝菌 大丽轮枝菌 多重DPO-PCR
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二重荧光定量PCR检测转基因大豆DAS81419 被引量:4
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作者 付伟 魏霜 +6 位作者 龙阳 赵晖 义柯 林春贵 黄帅 吴希阳 朱水芳 《植物检疫》 北大核心 2016年第5期58-62,共5页
本文针对大豆内源基因Lectin和转基因大豆DAS81419品系的5′端插入位点序列,设计特异性引物及探针,建立了同时检测转基因大豆DAS81419品系和大豆内源基因Lectin的二重荧光定量PCR方法,运用15种转基因大豆、3种转基因玉米、1种转基因油菜... 本文针对大豆内源基因Lectin和转基因大豆DAS81419品系的5′端插入位点序列,设计特异性引物及探针,建立了同时检测转基因大豆DAS81419品系和大豆内源基因Lectin的二重荧光定量PCR方法,运用15种转基因大豆、3种转基因玉米、1种转基因油菜、1种转基因水稻和非转基因大豆对该方法进行了特异性评价,并分析了该方法的灵敏度和稳定性。结果显示,该方法能准确从20种转基因样品和1种非转基因样品中检出靶目标,检测结果与待检样品信息一致,表明本方法具有良好的特异性;灵敏度高达0.01%;并具有良好的重复性。该方法特异性强、灵敏度高、稳定性强,适用于各口岸实验室进行转基因大豆DAS81419的快速、准确的检测。 展开更多
关键词 二重荧光定量PCR 转基因大豆DAS81419 检测
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引起葡萄黄化类症状的病毒和类病毒RT-PCR检测 被引量:3
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作者 赵静静 义柯 +3 位作者 颉超 郭庆元 胡白石 陆平 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1099-1104,共6页
【目的】明确引起新疆葡萄黄化类症状的病毒及类病毒种类,分析其单病毒和复合感染情况,为葡萄病毒及类病毒的防治提供重要的理论依据和有效的检测技术。【方法】利用已报道的6对特异性引物(GRSPa V-RSP48/49、GFKV-L630/U279、GLRav2-V2... 【目的】明确引起新疆葡萄黄化类症状的病毒及类病毒种类,分析其单病毒和复合感染情况,为葡萄病毒及类病毒的防治提供重要的理论依据和有效的检测技术。【方法】利用已报道的6对特异性引物(GRSPa V-RSP48/49、GFKV-L630/U279、GLRav2-V2d CPf2/V2CPr1、HSVd-f/r、GYSVd1-f1/r1和GYSVd2-f2/r2)分别对新疆不同地区黄化类症状的葡萄病样进行RT-PCR检测,并对各引物的扩增产物进行序列分析。【结果】3种病毒及3种类病毒(GRSPa V、GFk V、GLRa V-2、GYSVd2、GYSVd1和HSVd)在新疆葡萄中均有不同程度的感染,其感染率分别为36.1%、51.4%、48.6%、37.5%、37.5%、94.4%;72个病样中,2种以上病毒或类病毒复合感染率约为75%,6种病毒或类病毒复合感染率为10%以上。【结论】可侵染新疆葡萄引起黄化类症状的病毒和类病毒可达6种,且复合感染较为普遍。 展开更多
关键词 葡萄 病毒 类病毒 RT-PCR检测
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