运营铁路隧道水害整治 被引量：10

1

作者 万德友 《铁道建筑》 北大核心 2000年第12期13-15,共3页

在我国铁路运营隧道中有不同程度水害的隧道约占 70 %。隧道水害的整治首先应从根本抓起 ,重视和提高隧道防水的设计和施工质量。在隧道维修实际工作中形成的行之有效的治理原则是 ,截、堵、排相结合 ,因地制宜 。

关键词 隧道水害 综合整治 注浆 防水层 铁路 运营隧道

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必须高度重视铁路混凝土梁的病害整治 被引量：3

2

作者 万德友 《铁道建筑》 北大核心 1994年第12期7-9,共3页

文章综述我国铁路混凝土梁的现状和主要病害，分析了病害产生的原因，肯定了已采用的几种行之有效的维护、修补和加固方法，并且指出了提高混凝土梁病害整治技术水平的途径。

关键词 混凝土梁 维护 病害整治 铁路桥

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长效GLP-1-IgG2σ Fc融合蛋白的真核表达与生物活性鉴定 被引量：2

3

作者 杨懿 万德友 +4 位作者 刘蕴慧 冯红茹 杨利 高新 宋海峰 《生物技术通讯》 CAS 2016年第2期173-177,共5页

目的:在真核细胞中融合表达胰高血糖素样肽1(GLP-1),纯化后探究产物的生物学活性。方法:通过预留酶切位点将合成的GLP-1-Ig G2σFc融合蛋白表达序列连入表达载体质粒,用电转方法将线性化质粒稳定转染CHO-K1细胞,通过亚克隆筛选出蛋白高... 目的:在真核细胞中融合表达胰高血糖素样肽1(GLP-1),纯化后探究产物的生物学活性。方法:通过预留酶切位点将合成的GLP-1-Ig G2σFc融合蛋白表达序列连入表达载体质粒,用电转方法将线性化质粒稳定转染CHO-K1细胞,通过亚克隆筛选出蛋白高表达细胞株;收集高表达细胞株培养上清并初步纯化,采用口服葡萄糖耐量试验(OGTT)探究GLP-1融合蛋白降低血糖的生物学活性。结果:经过一轮亚克隆,筛选得到的细胞株的GLP-1融合蛋白产量达1 g/L,OGTT实验结果表明GLP-1融合蛋白具有降血糖生物活性。结论:GLP-1变体和Ig G2σ的Fc段连接是一种可行的融合蛋白形式,融合蛋白具有GLP-1受体激动剂的降糖作用,并且细胞株的筛选方式和初步纯化方法也具有可行性,为后续的体内、外活性研究和纯化方法确定提供了基础。 展开更多

关键词 胰高血糖素样肽1 受体激动剂 融合蛋白 真核表达 口服葡萄糖耐量试验

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人GPC3基因真核表达载体的构建及重组蛋白表达纯化 被引量：1

4

作者 宋海晶 张卓梅 +5 位作者 邱伟成 杨小盼 万德友 何椿鹏 李萌萌 高新 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期937-939,943,共4页

目的:人磷脂酰肌醇蛋白3是肝癌的诊断标志物和潜在治疗靶点。本研究目的在于获得足量的GPC3蛋白用于结构、功能及应用研究。方法:通过RT-PCR从人胎肝中克隆GPC3编码cDNA,利用Xho I和Xba I酶切位点,将GPC3ORF编码基因插入毕赤酵母表达载... 目的:人磷脂酰肌醇蛋白3是肝癌的诊断标志物和潜在治疗靶点。本研究目的在于获得足量的GPC3蛋白用于结构、功能及应用研究。方法:通过RT-PCR从人胎肝中克隆GPC3编码cDNA,利用Xho I和Xba I酶切位点,将GPC3ORF编码基因插入毕赤酵母表达载体pPICZ A中,构建真核表达质粒pPICZ A-GPC3。以该表达质粒转染毕赤酵母菌株GS115,在含有Zeocin的YPD平板上进行筛选。然后使用HRP标记的山羊抗人IgG在醋酸-硝酸纤维素双层膜上进行Dot blot筛选。对筛选获得的菌株进行诱导表达,表达上清经SDS-PAGE和Western blot检测。结果:筛选获得的阳性菌株诱导表达上清SDS-PAGE结果表明在预期位置观察到GPC3重组蛋白条带,且该蛋白条带与抗GPC3单克隆抗体(mAb)孵育后呈现特异性反应。工程菌株经高密度培养后,发酵上清中重组GPC3表达量约5 mg/L,进而通过阳离子交换层析从发酵上清中纯化了重组蛋白。结论:利用毕赤酵母表达并纯化了重组人GPC3蛋白,为进一步研究GPC3的结构和功能奠定了基础。 展开更多

关键词 人磷脂酰肌醇蛋白3 克隆 毕赤酵母 表达 纯化 肝癌

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人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-免疫球蛋白G1 Fc融合蛋白在糖基工程化毕赤酵母中的表达 被引量：1

5

作者 高新 宋海峰 +3 位作者 林殿海 杨小盼 万德友 陈枢青 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期843-846,共4页

目的在糖基工程化毕赤酵母中表达人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-免疫球蛋白G1 Fc融合蛋白(tumor necrosis factor receptor-immunoglobulin G1 Fc fusion,TNFR-Fc),考察糖基工程化过程对其活性的影响。方法将编码TNFR-Fc的cDNA序列插入毕赤酵... 目的在糖基工程化毕赤酵母中表达人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-免疫球蛋白G1 Fc融合蛋白(tumor necrosis factor receptor-immunoglobulin G1 Fc fusion,TNFR-Fc),考察糖基工程化过程对其活性的影响。方法将编码TNFR-Fc的cDNA序列插入毕赤酵母表达载体pPIC6αA中,构建重组表达质粒pPIC6-TF。用表达质粒转染N-糖基化工程改造的毕赤酵母菌株GSB,在含有杀稻瘟菌素的YPD平板上进行筛选。然后再使用HRP标记的羊抗人IgG在醋酸-硝酸纤维素双层膜上进行斑点印迹(dot-blot)筛选。选择表达量较高的工程菌株TNFR-Fc/GSB57进行高密度培养,通过Protein A亲和层析从发酵上清中纯化融合蛋白,利用鼠L929细胞对融合蛋白的抗TNFα活性进行分析。结果通过筛选获得了表达人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的表达菌株,纯化后的TNFR-Fc融合蛋白拮抗TNFα的EC50高于野生型毕赤酵母表达产物,而低于哺乳动物细胞的表达产物。结论糖基化改造改善了人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的抗TNFα活性,但必须进行进一步的改造才可能获得与哺乳动物细胞表达产物相似的活性。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子受体 毕赤酵母 糖基工程化过程 发酵 纯化 生物活性

原文传递

表皮生长因子受体-3真核表达质粒的构建及其免疫小鼠抗体滴度的检测

6

作者 张晶 刘强 +4 位作者 马忠辉 万德友 王瑜 付洁 宋海峰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第3期391-396,共6页

目的构建表皮生长因子受体-3(v-erb-b2 avian erythroblastic leukemia viral oncogene homolog 3,ErbB3)真核表达质粒,并检测其免疫小鼠血清抗体滴度。方法以乳腺cDNA文库为模板,PCR扩增ErbB3全长基因,插入pcDNA3.1-myc/His载体,构建... 目的构建表皮生长因子受体-3(v-erb-b2 avian erythroblastic leukemia viral oncogene homolog 3,ErbB3)真核表达质粒,并检测其免疫小鼠血清抗体滴度。方法以乳腺cDNA文库为模板,PCR扩增ErbB3全长基因,插入pcDNA3.1-myc/His载体,构建重组表达质粒pcDNA3.1-myc/His-ErbB3。同时以质粒pcDNA3.1-myc/His-ErbB3为模板,PCR扩增ErbB3-ECD和ErbB3-RLD基因,插入pET-28a(+)和pGEX-KG载体中,构建重组表达质粒pET-28a(+)-ECD和pGEX-KG-RLD;将质粒pET-28a(+)-ECD和pGEX-KG-RLD转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Western blot鉴定后,经GST柱或镍亲和柱纯化,BCA法定量纯化后蛋白。以60μg质粒pcDNA3.1-myc/His-ErbB3免疫BALB/c小鼠,4次免疫后,经小鼠尾静脉采血,分离血清,以纯化后的ErbB3-ECD和ErbB3-RLD蛋白为包被抗原,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗体滴度。结果 3种质粒经双酶切及测序鉴定,证明构建正确。表达的重组蛋白ErbB3-ECD和ErbB3-RLD在相对分子质量约76 000和46 000处可见特异蛋白条带,浓度分别为2和1 mg/ml,免疫后的小鼠血清抗体滴度分别为1︰400和1︰10 000。结论 ErbB3全长质粒免疫BALB/c小鼠后,经ErbB3-ECD和ErbB3-RLD蛋白初步筛选,已获得ErbB3的多克隆抗体,为后期ErbB3单抗的制备以及以ErbB3为靶点的核酸免疫治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 表皮生长因子受体 核酸免疫 多克隆抗体 基因治疗

原文传递

抬工

7

作者 万德友 《岷峨诗稿》 2007年第4期10-11,共2页

关键词 尺长

原文传递

襄渝线瞿家湾隧道洞口坍方的抢修和由此引出的教训

8

作者 万德友 《铁道建筑》 北大核心 1992年第2期9-10,共2页

本文追述了襄渝线瞿家湾隧道洞口坍方的抢修经过和这次事故给运输造成的巨大损失。由此引出的教训是:在建设新线隧道时必须加强地质勘查和判释,对不良地质段能避就避,如不能避开,也应遵循“早进晚出”的原则,以免留下后患。

关键词 铁路隧道 洞口 坍方 设计

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增强创新意识搞好隧道运营通风

9

作者 万德友 黄远绥 《现代隧道技术》 EI 2004年第z2期111-113,共3页

文章介绍了铁路隧道运营通风的重要性、发展概况以及亟待解决的主要问题,阐述了当前依靠科技创新所取得的主要成果以及为适应新技术的发展在管理体制上需采取的主要措施.

关键词 铁路隧道 运营通风 科技创新

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铁路桥隧主要病害及整治对策的探讨

10

作者 万德友 《铁道建筑》 北大核心 1989年第8期1-3,共3页

本文简述了铁路桥隧主要病害情况,分析了桥隧病害增加的主要原因,提出了整治病害的相应对策。

关键词 铁路桥 病害整治 桥隧

全文增补中

退耕

11

作者 万德友 《岷峨诗稿》 2006年第2期7-8,共2页

水土新维保,退耕还旧山。

关键词 退耕

原文传递