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内蒙古地区鸡源霉形体的分离和鉴定 被引量：4
1
作者 丁银巧 乌尼 +1 位作者 郝永清 周雨霞 《内蒙古农牧学院学报》 1998年第1期36-41,共6页
本实验对内蒙古呼和浩特和包头地区某些鸡场病鸡取样进行霉形体的分离及其生物学特性的研究。结果分离到３株霉形体，其中２株为鸡败血霉形体（Ｍｇｏｐｌａｓｍａｇａｌｉｓｅｐｔｉｕｍ，ＭＧ），１株为鸡霉形体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍ... 本实验对内蒙古呼和浩特和包头地区某些鸡场病鸡取样进行霉形体的分离及其生物学特性的研究。结果分离到３株霉形体，其中２株为鸡败血霉形体（Ｍｇｏｐｌａｓｍａｇａｌｉｓｅｐｔｉｕｍ，ＭＧ），１株为鸡霉形体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｇａｌｉｎａｒｕｍ）。所鉴定的菌株符合相应菌种的形态。 展开更多
关键词 鸡 霉形体 分离 鉴定
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禽流感病毒H5N1亚型NS1基因在大肠杆菌中的表达 被引量：3
2
作者 孙明 赵铁柱 +5 位作者 王传彬 李纯玲 丁银巧 王宏伟 陈西钊 田克恭 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2004年第4期208-211,共4页
目的表达H5N1亚型禽流感病毒(AIV)NS1蛋白,用于AIV感染与注射灭活疫苗鸡的鉴别诊断和NS1蛋白功能研究。方法采用RT_PCR方法对H5N1亚型AIVNS1基因进行扩增,将PCR产物克隆于pGEM_T_easy载体,将该基因插入pGEX_4T_1中构建NS1基因原核表达载... 目的表达H5N1亚型禽流感病毒(AIV)NS1蛋白,用于AIV感染与注射灭活疫苗鸡的鉴别诊断和NS1蛋白功能研究。方法采用RT_PCR方法对H5N1亚型AIVNS1基因进行扩增,将PCR产物克隆于pGEM_T_easy载体,将该基因插入pGEX_4T_1中构建NS1基因原核表达载体,转化BL21大肠杆菌后,在IPTG诱导下表达NS1蛋白,Westernblot鉴定表达NS1蛋白。结果成功克隆H5N1亚型AIV的NS1基因,其核苷酸序列长度为690bp,编码230个氨基酸残基。构建NS1基因原核表达载体在大肠杆菌内表达出约51×103的NS1融合蛋白。Westernblot鉴定表明表达NS1蛋白与H7N2AIV感染鸡血清有反应性。结论在大肠杆菌中成功表达了H5N1亚型AIVNS1基因蛋白,具有与感染H7N2亚型AIV阳性血清反应原性。 展开更多
关键词 原核表达载体 蛋白功能 NS1基因 感染 大肠杆菌 AIV 反应原性 H5N1亚型 禽流感病毒 阳性血清
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犬细小病毒VP2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达 被引量：5
3
作者 张云霞 丁银巧 +6 位作者 赵铁柱 杨璐 孙明 曹振 王传彬 陈西钊 田克恭 《中国比较医学杂志》 CAS 2007年第12期693-696,701,共5页
目的表达犬细小病毒VP2蛋白(CPV VP2),用于犬细小病毒病的诊断、疫苗研制和VP2蛋白功能研究。方法采用PCR方法对CPV VP2基因进行扩增,将CPV VP2基因克隆到毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌表达载体pPICZαA中,构建真核重组表达载体pPICZα... 目的表达犬细小病毒VP2蛋白(CPV VP2),用于犬细小病毒病的诊断、疫苗研制和VP2蛋白功能研究。方法采用PCR方法对CPV VP2基因进行扩增,将CPV VP2基因克隆到毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌表达载体pPICZαA中,构建真核重组表达载体pPICZαA-VP2,将该重组质粒线性化后,转化毕赤酵母菌GS115中,在甲醇诱导下表达CPV VP2,SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达蛋白。结果成功扩增了CPV VP2基因,构建了真核重组表达载体pPICZαA-VP2在毕赤酵母菌中表达出约64.35 kD蛋白。Western blotting鉴定表明,表达VP2蛋白与犬细小病毒阳性血清有反应性。结论在毕赤酵母中成功地表达了CPV VP2蛋白,能被犬细小病毒阳性血清识别。 展开更多
关键词 犬细小病毒VP2基因 毕赤酵母 真核表达
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口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因在毕赤酵母中的表达 被引量：2
4
作者 丁银巧 张剑锐 +3 位作者 张云霞 曹振 孙明 田克恭 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1100-1103,1134,共5页
目的利用毕赤酵母系统表达口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3AB,用于FMDV感染与疫苗免疫动物的鉴别诊断和3AB蛋白功能研究。方法采用PCR方法从pGEM-T-Easy-3ABC质粒中扩增3AB基因,将其插入pPICZαA酵母表达载体中,构建的重组表达质粒线性化... 目的利用毕赤酵母系统表达口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3AB,用于FMDV感染与疫苗免疫动物的鉴别诊断和3AB蛋白功能研究。方法采用PCR方法从pGEM-T-Easy-3ABC质粒中扩增3AB基因,将其插入pPICZαA酵母表达载体中,构建的重组表达质粒线性化后电转入毕赤酵母GS115中,在0.5%甲醇诱导下表达3AB蛋白,运用SDS-PAGE和ELISA方法鉴定表达蛋白。结果成功构建了pPICZαA-3AB重组酵母表达质粒,并转化入毕赤酵母GS115中,SDS-PAGE和ELISA鉴定结果表明,重组酵母菌株表达出约19kD的3AB蛋白,与针对FMDV的3AB蛋白单克隆抗体有特异性反应。结论在毕赤酵母中成功表达了FMDV3AB蛋白,与抗FMDV3AB蛋白单克隆抗体具有反应性。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白 毕赤酵母 真核表达
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禽流感病毒核蛋白基因的原核表达及其生物学活性分析 被引量：1
5
作者 周迎春 孙明 +5 位作者 赵铁柱 蒲娟 丁银巧 王帅 吴清民 刘金华 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第8期10-12,共3页
关键词 禽流感病毒 核蛋白基因 活性分析 原核表达 生物学 世界动物卫生组织 A型流感病毒 virus
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内蒙古地区鸡源霉形体分离株的免疫电镜观察
6
作者 丁银巧 郝永清 +2 位作者 张爱荣 张福仁 乌尼 《兽医导刊》 1997年第2期1-2,共2页
从内蒙古呼和浩特和包头地区病鸡和病死鸡中分得三株疑似霉形体(BR_1、BR_2、H_3),经电镜和免疫电镜观察,初步鉴定 BR_1株和 H_3株为鸡败血霉形体(Mycoplasma gallisepticum,MG)。
关键词 鸡败血霉形体 分离株 免疫电镜观察 包头地区 透射电子显微镜 鸡源霉形体 标准菌株 分离菌株 呼和浩特 阳性血清
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重组人神经肽Y融合蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备与鉴定 被引量：1
7
作者 丁克祥 董萍 +7 位作者 杨永鹏 孙乐 丁银巧 郑宇浩 尹晴 韩晋云 丁宇 丁振华 《国际老年医学杂志》 2011年第5期193-197,共5页
目的：构建人神经肽Y（NPY）基因的原核表达载体，诱导表达重组蛋白，制备兔抗人NPY抗血清。方法：取已构建好且经测序确认无误的再组质粒pET28a—NPY转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达融合蛋白，并经SDS—PAGE检测和Western印迹... 目的：构建人神经肽Y（NPY）基因的原核表达载体，诱导表达重组蛋白，制备兔抗人NPY抗血清。方法：取已构建好且经测序确认无误的再组质粒pET28a—NPY转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达融合蛋白，并经SDS—PAGE检测和Western印迹鉴定，表达产物包涵体经Ni^2＋-NTA亲和层析纯化，以纯化后的融合蛋白pET28a—NPY为抗原免疫家兔，获得抗血清，Western blotting、ELISA法鉴定获得的抗血清。结果经IPTG诱导含有pET28a—NPY重组质粒的DE3菌，表达出重组人NPY融合蛋白。重组蛋白经Ni^2＋-NTA亲和层析进行纯化后，得到了较高纯度的融合蛋白，用纯化的融合蛋白免疫家兔制备了多克隆抗体，Western blotting、ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论：成功表达了人NPY蛋白并获得了其多克隆抗体，为进一步研究人NPY蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 重组人NPY 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体 制备 鉴定
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AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达 被引量：4
8
作者 丁银巧 张文杰 +5 位作者 张云霞 赵铁柱 孙明 遇秀玲 赵德明 田克恭 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第7期63-67,共5页
利用杆状病毒表达系统对AsiaⅠ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)VP1基因在Sf9昆虫细胞中进行表达,为研究AsiaⅠ型FMDVVP1蛋白功能及建立AsiaⅠ型FMDV血清学诊断方法奠定基础。采用PCR方法从pGEM-T-Easy-AsiaⅠ型VP1质... 利用杆状病毒表达系统对AsiaⅠ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)VP1基因在Sf9昆虫细胞中进行表达,为研究AsiaⅠ型FMDVVP1蛋白功能及建立AsiaⅠ型FMDV血清学诊断方法奠定基础。采用PCR方法从pGEM-T-Easy-AsiaⅠ型VP1质粒中扩增VP1基因,将其插入杆状病毒转座载体pFastBacHTA,构建的重组质粒pFast-BacHTA-VP1再转入DH10Bac感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1,然后转染Sf9昆虫细胞。PCR鉴定证实VP1基因正确地插入到Bacmid中,成功构建了杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1,SDS-PAGE和Western-blotting检测结果表明,VP1基因在Sf9昆虫细胞中表达出约26.5ku的VP1蛋白。将可溶性表达的融合蛋白用Ni-NTA亲和层析方法进行纯化,通过ELISA分析,能特异性地检测出AsiaⅠ型口蹄疫病毒阳性血清。AsiaⅠ型FMDV VP1基因在杆状病毒表达系统中的成功表达为AsiaⅠ型FMDV VP1蛋白的抗原性及血清学抗体水平检测研究奠定了基础。 展开更多
关键词 AsiaⅠ型口蹄疫病毒 VP1基因 杆状病毒 真核表达
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