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应用PCR技术检测鸭疫里默氏杆菌的研究 被引量：62
1
作者 胡清海 刘晓文 +5 位作者 赵世华 张知良 丁铲 苗晋锋 刘华雷 赵东伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期471-473,共3页
根据已发表的鸭疫里默氏杆菌 15型CVL110 / 89株编码 4 2_kDa主要外膜蛋白的基因序列设计并合成一对引物 ,建立PCR方法 ,对 7个血清型的鸭疫里默氏杆菌纯培养菌及野外病死鸭病料组织进行检测。结果表明 ,7个血清型的鸭疫里默氏杆菌纯培... 根据已发表的鸭疫里默氏杆菌 15型CVL110 / 89株编码 4 2_kDa主要外膜蛋白的基因序列设计并合成一对引物 ,建立PCR方法 ,对 7个血清型的鸭疫里默氏杆菌纯培养菌及野外病死鸭病料组织进行检测。结果表明 ,7个血清型的鸭疫里默氏杆菌纯培养菌DNA都可扩增出 80 9bp的DNA片段 ,而对照的 2株大肠杆菌和 1株沙门氏菌纯培养物DNA扩增结果为阴性 ;在对 2 4只不同鸭场病死鸭肝、脑的检测中 ,脑的检出率为 19/ 2 4 (高于细菌分离的 13/ 2 4 ) ,肝脏的检出率为 11/ 2 4 (高于细菌分离的 8/ 2 4 )。由此可见 ,建立的PCR技术可用于鸭疫里默氏杆菌的鉴定和快速诊断 (取脑组织 )。但此方法是否对其他血清型的鸭疫里默氏杆菌也适用 ,有待于收集这些血清型的菌株进行验证。 展开更多
关键词 PCR技术 鸭疫里默氏杆菌 检测 鸭 血清型
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新城疫病毒某水禽分离株经鸡体传代后由非致病型转变为速发型的研究 被引量：32
2
作者 于圣青 丁铲 +5 位作者 NORIKO KISHIDA HIROSHI ITO HIROSHI KIDA KOICHI OTSUKI YOSHIHIRO KAWAOKA TOSHIHIRO ITO 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期59-64,共6页
最近 ,一株无毒力的新城疫病毒 (NDV)在鸡体内繁殖时 ,变成了强毒株。但至今尚未能证实 ,经鸡体传代的野生水禽新城疫病毒是否也具有变成速发型毒株的能力。为了通过实验证明从水禽中分离的非致病型NDV可以转变为速发型病毒 ,我们通过... 最近 ,一株无毒力的新城疫病毒 (NDV)在鸡体内繁殖时 ,变成了强毒株。但至今尚未能证实 ,经鸡体传代的野生水禽新城疫病毒是否也具有变成速发型毒株的能力。为了通过实验证明从水禽中分离的非致病型NDV可以转变为速发型病毒 ,我们通过在鸡体内传播鹅源性无毒力株 ,经气囊接种连续传代 9次 ,随后再在鸡脑内传代 5次。结果显示 ,该病毒的毒力变得很强 ,致死率可达 1 0 0 %。通过致病性试验证实 ,其具有典型的速发型病毒特征 ;融合蛋白裂解位点的序列分析表明 ,原始的分离株含有无毒力型毒株共有的裂解序列 :E_R_Q_E_R/L,而通过鸡体反复传代后 ,该序列变为致病性毒株共有的序列 :K_R_Q_K_R/F。这些结果表明 ,野生水禽中自然存在的无毒力毒株 ,具有无毒力株相应的序列 ,但当其在鸡群中传播时 ,则具有变成高致病性病毒的能力。同时研究表明 ,鸡体提供了该病毒从非致病型向致病型转变的选择机制。 展开更多
关键词 水禽分离株 鸡体传代 新城疫病毒 速发型 非致病型 致病性 选择机制 F蛋白
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江苏安徽两省鸭疫里默氏杆菌病的流行病学调查研究 被引量：28
3
作者 胡清海 张知良 +3 位作者 苗晋锋 刘岳龙 刘晓文 丁铲 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2001年第8期12-13,共2页
1996年 1月至 2 0 0 1年 6月 ,对江苏、安徽两省 86个鸭场的发病鸭从日龄、品种、流行季节、流行菌株的血清型以及血清流行病学等方面进行了鸭疫里默氏杆菌病的调查。结果 ,在 5 7个鸭场的樱桃谷鸭、番鸭及野鸭体内分离到鸭疫里默氏杆菌... 1996年 1月至 2 0 0 1年 6月 ,对江苏、安徽两省 86个鸭场的发病鸭从日龄、品种、流行季节、流行菌株的血清型以及血清流行病学等方面进行了鸭疫里默氏杆菌病的调查。结果 ,在 5 7个鸭场的樱桃谷鸭、番鸭及野鸭体内分离到鸭疫里默氏杆菌 92株 ,而从麻鸭的病料中未分离到该菌 ;分离到病原的鸭最小为 12日龄 ,最大为 41日龄 ,主要集中在 12— 3 0日龄 ;这些地区鸭疫里默氏杆菌病的流行无明显季节性 ;这些地区鸭场疫里默氏杆菌流行菌株的血清型至少有 5个 ,其中1、2和 展开更多
关键词 鸭疫里默氏杆菌 流行病学 血清型 江苏 安徽
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鸭传染性产蛋减少症(暂定名)的病原分离初报 被引量：29
4
作者 廖敏 牟小东 +6 位作者 耿阳 边葶苈 陆新浩 陈秋英 任祖伊 丁铲 周继勇 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第1期22-26,共5页
本文对2010年在成年蛋鸭中流行的以产蛋下降为特征的未知疫病病原进行了初步鉴定。病原能在鸭胚、鸡胚和细胞上复制增殖,对鸭胚、鸡胚的致死率达100%。鸭胚病毒分离物不具有血凝性,在透射电镜下可观察到直径为50~100 nm、有囊膜带突起... 本文对2010年在成年蛋鸭中流行的以产蛋下降为特征的未知疫病病原进行了初步鉴定。病原能在鸭胚、鸡胚和细胞上复制增殖,对鸭胚、鸡胚的致死率达100%。鸭胚病毒分离物不具有血凝性,在透射电镜下可观察到直径为50~100 nm、有囊膜带突起的病毒粒子。病毒对酸敏感、能耐受pH9的碱性环境,50℃1 h可使病毒失去感染能力。SPF鸡人工感染试验结果显示,感染鸡生长缓慢、致死亡率低、能回收病毒。说明引起鸭产蛋量下降的疫病病原是病毒性的,并导致鸡感染发病,我们将此病暂称为鸭传染性产蛋减少症。 展开更多
关键词 蛋鸭 产蛋下降 病毒分离鉴定
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鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定与生物学特性研究 被引量：26
5
作者 任晓梅 王小兰 +5 位作者 韩文龙 张雪梅 陈宗超 李涛 丁铲 于圣青 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2018年第4期47-51,共5页
为了解鸭疫里默氏杆菌的流行情况和药物敏感性,本研究对广东省、山东省、江苏省等地区疑似鸭疫里默氏杆菌病的病料进行病原分离和鉴定,并测定分离株对抗菌药物的敏感性。结果显示,共鉴定到46株鸭疫里默氏杆菌,其中血清1型、2型、10型和1... 为了解鸭疫里默氏杆菌的流行情况和药物敏感性,本研究对广东省、山东省、江苏省等地区疑似鸭疫里默氏杆菌病的病料进行病原分离和鉴定,并测定分离株对抗菌药物的敏感性。结果显示,共鉴定到46株鸭疫里默氏杆菌,其中血清1型、2型、10型和15型菌株依次为9株、25株、1株和1株,未定血清型菌株10株;RA分离株普遍对林可霉素、多粘菌素和诺氟沙星耐药,表明RA分离株对临床常用药出现了不同程度的耐受;易感鸭的动物回归试验能够复制出典型的原始病例,且可从死亡雏鸭中分离到同源菌株。该研究结果为鸭疫里默氏杆菌病疫苗选用和临床用药提供了科学的参考依据。 展开更多
关键词 鸭疫里默氏杆菌 分离鉴定 耐药性 血清型
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禽致病性大肠杆菌江苏、安徽分离株的生物学特性分析 被引量：25
6
作者 白灏 冀辉 +5 位作者 韩先干 龚建森 董洪亮 丁铲 祁克宗 于圣青 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1315-1322,共8页
【目的】研究禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic Escherichia coli,APEC)江苏、安徽分离株的优势血清型,并分析其生物学特性。【方法】对分离自病禽的细菌进行鉴定,采用玻片凝集法测定禽致病性大肠杆菌的血清型,PCR方法检测14种毒力基... 【目的】研究禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic Escherichia coli,APEC)江苏、安徽分离株的优势血清型,并分析其生物学特性。【方法】对分离自病禽的细菌进行鉴定,采用玻片凝集法测定禽致病性大肠杆菌的血清型,PCR方法检测14种毒力基因的分布,采用美国临床和实验室标准化研究所的方法进行药物敏感性检测,改良结晶紫半定量法检测分离细菌的生物被膜形成能力。【结果】共分离到禽致病性大肠杆菌56株,血清型检测结果表明,O78血清型占64.29%,为主要血清型。毒力基因检测显示,fimC、pfs、ompA和luxS的阳性率超过90%。药物敏感性检测显示,58.93%的菌株对8种以上的药物耐受。生物被膜检测显示,有16株细菌生物被膜形成能力为中等以上,其中68.75%的菌株耐8种以上的药物。【结论】O78为主要流行的血清型。fimC、pfs、ompA和luxS基因为APEC保守基因。多重耐药性仍很普遍,细菌生物被膜与耐药性具有相关性。 展开更多
关键词 禽致病性大肠杆菌 血清型 毒力基因 耐药性 生物被膜
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RIG-I样受体信号通路及其调控研究进展 被引量：21
7
作者 丁云磊 孙英杰 +3 位作者 王晓旭 胡跃 费荣梅 丁铲 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第5期72-79,共8页
模式识别受体(pattern-recognition receptors,PRRs)中的RIG-I样受体(RIG-I like receptors,RLRs)是细胞质中一类RNA解旋酶,它们可以通过其RNA配体结合病原相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP),识别非自身的病毒... 模式识别受体(pattern-recognition receptors,PRRs)中的RIG-I样受体(RIG-I like receptors,RLRs)是细胞质中一类RNA解旋酶,它们可以通过其RNA配体结合病原相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP),识别非自身的病毒RNA。被感染的细胞中,这种相互作用可以通过触发RLRs以及下游信号分子的活化,最终导致I型干扰素的产生和炎性因子的产生,细胞做出抗病毒免疫应答。本文简单介绍了RLR信号通路的组成及其泛素化调控,总结了病毒逃避RLR通路信号转导的机制,最后阐述了NOD样受体(NOD-like receptors,NLRs)通路对RLR通路的影响。通过对RLR信号通路分子在抗病毒免疫调节中的作用了解,可以为控制病毒的感染和免疫调节提供一个新的思路。 展开更多
关键词 RIG-I样受体 先天性免疫 细胞信号转导 病毒感染
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禽致病性大肠杆菌血清型、进化分群及毒力基因的分子流行病学调查 被引量：22
8
作者 王瑶 张耀东 +10 位作者 易正飞 信素华 陶程琳 李妍 李涛 祁晶晶 田明星 丁铲 于圣青 张焕容 王少辉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1159-1166,共8页
为了解禽致病性大肠杆菌(APEC)的分子流行特点,从华东等地区分离鉴定210株APEC菌株,然后检测其血清型、系统进化分群及毒力基因,并分析毒力因子与血清型、系统进化分群之间的关联性。血清型检测结果显示,O78、O1、O2为流行血清型。通过... 为了解禽致病性大肠杆菌(APEC)的分子流行特点,从华东等地区分离鉴定210株APEC菌株,然后检测其血清型、系统进化分群及毒力基因,并分析毒力因子与血清型、系统进化分群之间的关联性。血清型检测结果显示,O78、O1、O2为流行血清型。通过系统进化分群分析发现A、B1、B2及D群比例分别为21.90%、20.00%、31.90%、21.90%。毒力基因检测结果显示,fimC、mat及ibeB基因检出率为90%以上,papC、neuC、vat、ibeA检出率低于22%,且所有分离株至少含有4个毒力基因。关联分析发现,毒力基因irp2、ibeA、neuC、vat及ETT2在特定血清型中的分布较高,而papC、tsh、irp2、neuC、vat及ibeA在B2进化分群较高。结果表明,华东等地区APEC携带多种毒力基因,毒力基因分布与特定血清型及系统进化分群具有关联性,为了解当地的APEC优势流行菌株及防控提供了参考。 展开更多
关键词 禽致病性大肠杆菌 血清型 系统进化分群 毒力基因
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冠状病毒入胞途径的研究进展 被引量：21
9
作者 王欢 丁铲 廖瑛 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期964-971,共8页
冠状病毒家族成员众多,主要感染哺乳动物和禽鸟类,给人类和动物的健康带来了极大危害。病毒对细胞表面受体的结合和内吞方式,决定病毒的宿主范围、组织嗜性和发病机理;此外,研究病毒的入胞途径不仅有助于我们认识病毒的生活周期,还对病... 冠状病毒家族成员众多,主要感染哺乳动物和禽鸟类,给人类和动物的健康带来了极大危害。病毒对细胞表面受体的结合和内吞方式,决定病毒的宿主范围、组织嗜性和发病机理;此外,研究病毒的入胞途径不仅有助于我们认识病毒的生活周期,还对病毒性感染的预防和治疗具有重要意义。本文总结归纳了近十年来冠状病毒入胞途径的研究进展:多数冠状病毒可通过网格蛋白依赖型内吞、小窝蛋白依赖型内吞、巨胞饮以及网格蛋白/小窝蛋白非依赖型内吞途径进入细胞,到达早期内体、晚期内体或溶酶体等处发生膜融合,释放病毒基因组进入细胞质。病毒的内吞途径可作为广谱抗病毒药物设计的靶点。 展开更多
关键词 冠状病毒 受体 内吞作用 抗病毒药物
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禽致病性大肠杆菌毒力基因多重PCR方法的建立和应用 被引量：20
10
作者 孟庆美 王少辉 +4 位作者 韩先干 韩月 丁铲 戴建君 于圣青 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期696-702,共7页
【目的】建立禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)黏附相关基因、侵袭及毒素相关基因、抗血清存活相关基因及铁转运相关基因的多重PCR方法,实现禽致病性大肠杆菌毒力基因的简便、快速检测。【方法】根据GenBank... 【目的】建立禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)黏附相关基因、侵袭及毒素相关基因、抗血清存活相关基因及铁转运相关基因的多重PCR方法,实现禽致病性大肠杆菌毒力基因的简便、快速检测。【方法】根据GenBank公布的基因序列,设计合成18对特异性引物,通过条件优化,建立四组多重PCR体系,并通过模板倍比稀释检测各组多重PCR的灵敏性。利用多重PCR检测100株APEC毒力基因的分布,验证多重PCR方法的可行性。【结果】根据PCR扩增片段大小判定,上述四组多重PCR体系均能同时扩增出该组中的各个毒力基因,且灵敏度分别为:103CFU、103CFU、105CFU、105CFU细菌和1ng、1ng、10ng、10ng DNA。100株APEC的毒力因子检测结果显示,多重PCR和单基因PCR结果一致。【结论】建立的四组多重PCR方法能够简便、快速地检测禽致病性大肠杆菌的毒力基因,可用于毒力基因的鉴定以及流行病学调查。 展开更多
关键词 禽致病性大肠杆菌 毒力基因 多重PCR 检测
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鸭疫里氏杆菌病三价油乳剂灭活疫苗的研究 被引量：7
11
作者 胡清海 刘晓文 +6 位作者 赵世华 张知良 苗晋锋 刘华雷 赵宝华 徐步 丁铲 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2002年第7期6-9,共4页
以 1、2、10型鸭疫里氏杆菌 (RA)分离株为菌种 ,研制鸭疫里氏杆菌病三价油乳剂灭活疫苗。经无菌及安全检验合格后 ,对 6日龄樱桃谷雏鸭颈部皮下接种 0 .4mL/只 ,免疫后第 10、14、2 1和 3 5d分别用 1、2、10型RA强毒株攻击 ,第 14d的攻... 以 1、2、10型鸭疫里氏杆菌 (RA)分离株为菌种 ,研制鸭疫里氏杆菌病三价油乳剂灭活疫苗。经无菌及安全检验合格后 ,对 6日龄樱桃谷雏鸭颈部皮下接种 0 .4mL/只 ,免疫后第 10、14、2 1和 3 5d分别用 1、2、10型RA强毒株攻击 ,第 14d的攻毒保护率为 91.7%～ 10 0 % ,3 5d的攻毒保护率为 66.6%～ 83 .3 %。田间试验结果表明 ,雏鸭 5～ 7日龄免疫后至上市保护率可达 95 .0 %～ 10 0 %。 展开更多
关键词 鸭疫里氏杆菌病 三价油乳剂灭活疫苗 安全性 保护率
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华东地区沙门菌流行病学及耐药性分析 被引量：19
12
作者 吴晓君 王少辉 +5 位作者 杨登辉 王栋 田明星 丁铲 高崧 于圣青 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第1期49-54,共6页
沙门菌病是一种严重危害人类健康和养殖业发展的人畜共患病,为了解华东地区沙门菌的分子流行情况,本研究采用选择性培养基和PCR分离鉴定沙门菌,然后利用PCR检测沙门菌临床分离株的血清型及毒力因子,并用药敏纸片法检测其耐药性。结果显... 沙门菌病是一种严重危害人类健康和养殖业发展的人畜共患病,为了解华东地区沙门菌的分子流行情况,本研究采用选择性培养基和PCR分离鉴定沙门菌,然后利用PCR检测沙门菌临床分离株的血清型及毒力因子,并用药敏纸片法检测其耐药性。结果显示,本研究分离鉴定出48株沙门菌,分离率为16.84%。血清学结果显示所检测的48株沙门菌中鼠伤寒沙门菌占64.58%,肠炎沙门菌占6.25%,其他血清型占29.17%。毒力基因检测发现除sopE基因分布率为25%外,其他15个毒力基因分布率可达97%以上。药敏试验结果显示沙门菌分离株对常见抗生素具有不同的抗性和敏感性,并且耐药性十分严重,对红霉素、阿奇霉素、克林霉素、新霉素、大观霉素、四环素、利福平、复方新诺明等抗生素的耐药率均超过50%以上。检测结果说明,华东地区沙门菌主要血清型为鼠伤寒沙门菌,且毒力基因分布广泛,多重耐药性菌株十分流行。 展开更多
关键词 沙门菌 血清型 毒力基因 耐药性
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鸡输卵管特异表达载体的构建及其体内表达 被引量：12
13
作者 高波 宋红芹 +5 位作者 陈芹 李碧春 孙怀昌 王克华 窦套存 丁铲 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第8期83-86,共4页
用高保真PCR法分别从中国狼山鸡基因组DNA中扩增出卵清蛋白基因 (ov)的 5′ 和 3′ 调控区 ,将其克隆入pGEM T载体 ,经序列测定证明与已发表的ov基因相应区域无差异。将上述调控序列插入黏粒载体 ,构建成鸡输卵管特异表达载体pOV。再将l... 用高保真PCR法分别从中国狼山鸡基因组DNA中扩增出卵清蛋白基因 (ov)的 5′ 和 3′ 调控区 ,将其克隆入pGEM T载体 ,经序列测定证明与已发表的ov基因相应区域无差异。将上述调控序列插入黏粒载体 ,构建成鸡输卵管特异表达载体pOV。再将lacZ报告基因克隆在上述载体 5′ 调控区的下游 ,获得的重组载体命名为pOVlacZ。用脂质体包裹的pOVlacZ注射产蛋鸡 ,RT PCR检测结果表明lacZ基因仅在注射鸡输卵管的膨大部表达 ,不能在肝、脾、肾、心等组织表达。在上述组织中 ,仅输卵管膨大部能检测出β 半乳糖苷酶活性 ( 1 1 6 7mU ml) ,注射雌激素对报告基因的表达具有促进作用 ( 1 5 3 3mU ml) ,重组酶能被分泌到鸡蛋的蛋清中 ( 1 7 33mU ml)。结果表明 ,克隆的鸡ov基因调控区能有效驱动报告基因在输卵管的特异表达 ,构建的载体能用于鸡输卵管生物反应器的研制。 展开更多
关键词 鸡输卵管特异表达载体 构建 体内表达 鸡卵清蛋白基因调控区
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新城疫病毒的分子生物学研究 被引量：6
14
作者 丁铲 丁圣青 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 1991年第6期52-53,51,共3页
新城疫病毒(NDV)是一种非片段性、具有单股负极性基因组的、有囊膜RNA病毒,直径约为150—400nm,内含有一长螺旋状核衣壳(长约1 00nm,直径17—18nm),囊膜外有长为8～12nm的新蛋白(HN和F)纤突。
关键词 新城疫 病毒 分子生物学
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噬菌体疗法预防细菌性感染的研究进展及发展方向 被引量：18
15
作者 陶程琳 王少辉 +12 位作者 张耀东 易正飞 信素华 王瑶 李妍 AFAYIBO Dossêh Jean Apotre 朱红 李涛 祁晶晶 田明星 丁铲 高崧 于圣青 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1167-1175,共9页
由于抗生素的不合理使用,引起了细菌多重耐药性、药物残留、食品安全、环境菌群不平衡等问题,严重威胁人类及动物的健康。因此,寻找新型抗菌药物及治疗方案已成为当前的研究重点。噬菌体是感染细菌、真菌等微生物的病毒,自发现伊始便用... 由于抗生素的不合理使用,引起了细菌多重耐药性、药物残留、食品安全、环境菌群不平衡等问题,严重威胁人类及动物的健康。因此,寻找新型抗菌药物及治疗方案已成为当前的研究重点。噬菌体是感染细菌、真菌等微生物的病毒,自发现伊始便用于治疗细菌感染。与传统抗生素相比,噬菌体具有分布广、易筛选、高度的宿主专一性、增殖能力强、安全性高、研发成本低等优势。随着多重耐药菌的广泛流行,噬菌体治疗细菌感染重新引起了人们的重视。本文简述了噬菌体的生物学特性、噬菌体疗法在预防细菌感染的应用及噬菌体研究发展方向,以期为噬菌体疗法预防细菌性感染提供参考。 展开更多
关键词 噬菌体 细菌性感染 噬菌体疗法 裂解酶
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血清1型鸭疫里默氏杆菌灭活油乳剂疫苗的研制 被引量：16
16
作者 王小兰 胡青海 +3 位作者 童永亮 韩先干 丁铲 于圣青 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期313-316,共4页
为研究血清1型鸭疫里默氏杆菌(R.anatipestifer,RA)的灭活油乳剂疫苗,本研究将10株血清1型RA的临床分离株经腿部肌肉注射7日龄雏鸭进行动物体内复壮,结果表明所有被测菌株均具有较强的毒力,易感雏鸭致死率100%。对其中3株RA分离株CH3、... 为研究血清1型鸭疫里默氏杆菌(R.anatipestifer,RA)的灭活油乳剂疫苗,本研究将10株血清1型RA的临床分离株经腿部肌肉注射7日龄雏鸭进行动物体内复壮,结果表明所有被测菌株均具有较强的毒力,易感雏鸭致死率100%。对其中3株RA分离株CH3、WJ4和YL4的毒力测定结果表明其半数致死量(LD50)分别为2×108cfu、3.25×108cfu和2.37×106cfu。选取5株RA分离株分别制备灭活油乳剂疫苗,分别于5日龄和18日龄对樱桃谷鸭进行两次免疫后,免疫鸭能够产生高水平的RA特异性抗体,对2 LD50WJ4或CH3攻毒产生很好的保护效果,其中由CH3、CQ3和YXb12制备的灭活油乳剂疫苗对攻毒的保护率高达100%。 展开更多
关键词 鸭疫里默氏杆菌 油乳剂灭活疫苗 ELISA
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禽大肠杆菌、肠炎、鼠伤寒、鸡白痢及鸡伤寒沙门菌多重PCR方法的建立及应用 被引量：14
17
作者 梁华 王少辉 +5 位作者 吴晓君 许漩 田明星 丁铲 张焕容 于圣青 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期960-966,共7页
【背景】大肠杆菌病和沙门菌病是最常见的家禽细菌性疾病,给养禽业造成严重经济损失。另外,禽大肠杆菌和沙门菌也是重要的人畜共患病原菌,可通过禽类及其产品传播给人类,对人类健康造成严重威胁。加强禽大肠杆菌和沙门菌的快速鉴别检测... 【背景】大肠杆菌病和沙门菌病是最常见的家禽细菌性疾病,给养禽业造成严重经济损失。另外,禽大肠杆菌和沙门菌也是重要的人畜共患病原菌,可通过禽类及其产品传播给人类,对人类健康造成严重威胁。加强禽大肠杆菌和沙门菌的快速鉴别检测,对养禽业和公共卫生都具有重要意义。【目的】建立禽大肠杆菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌的多重PCR检测方法。【方法】通过比较分析确定禽致病性大肠杆菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌的特异靶标基因,设计5对特异性引物,通过条件优化建立多重PCR方法,分析该多重PCR方法的特异性、敏感性及可靠性。【结果】该方法能特异性地鉴定禽致病性大肠杆菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌,每个PCR反应的最低检出限分别为10~3 CFU细菌和100 pg基因组DNA。临床分离菌株检测显示,多重PCR与传统血清学方法结果一致。【结论】建立的多重PCR方法能够快速鉴别禽致病性大肠杆菌和不同血清型沙门菌,对禽大肠杆菌病和沙门菌病的流行病学调查及临床检测具有重要意义。 展开更多
关键词 禽致病性大肠杆菌 沙门菌 多重PCR 检测
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禽致病性大肠杆菌安徽分离株luxS和pfs基因的克隆、表达与细胞外合成AI-2活性检测 被引量：14
18
作者 韩先干 白灏 +5 位作者 刘蕾 陈文静 丁铲 胡青海 祁克宗 于圣青 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1167-1172,共6页
【目的】LuxS/AI-2型密度感应系统存在于革兰氏阴性和阳性菌中,可产生用于细菌种间交流的通用自诱导信号分子AI-2(Autoinducer-2,AI-2),细菌许多生理功能都受此系统的调节。本研究开展对禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic Escherichia ... 【目的】LuxS/AI-2型密度感应系统存在于革兰氏阴性和阳性菌中,可产生用于细菌种间交流的通用自诱导信号分子AI-2(Autoinducer-2,AI-2),细菌许多生理功能都受此系统的调节。本研究开展对禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic Escherichia coli,APEC)自诱导信号分子AI-2的检测和建立体外合成、定量的方法,为进一步研究APEC的AI-2调控作用奠定基础。【方法】利用哈维弧菌BB170(Vibrio harveyi BB170)开展对APEC AI-2的检测;利用表达、纯化的LuxS和Pfs在体外催化S-腺苷同型半胱氨酸(Sadenosylhomocysteine,SAH),进行AI-2的体外合成。【结果】APEC能产生自诱导信号分子AI-2;成功表达可用于AI-2合成的可溶性重组蛋白LuxS和Pfs;纯化的重组蛋白LuxS和Pfs与SAH同时作用后,合成了浓度为300μmol/L的AI-2;运用哈维弧菌BB170对合成的AI-2活性检测表明,其活性是阴性对照的700倍。【结论】APEC存在LuxS/AI-2型密度感应系统,APEC的LuxS和Pfs可以在体外催化SAH生成有活性的AI-2分子。本研究为进一步研究APEC的AI-2的调控作用奠定基础。 展开更多
关键词 禽致病性大肠杆菌 密度感应系统 信号分子AI-2 LUXS
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荧光定量PCR检测牛乳中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因方法的建立 被引量：13
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作者 唐吉思 布日额 +4 位作者 吴金花 孙立杰 薛晓阳 刘洋 丁铲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期56-59,共4页
为建立检测牛乳中金黄色葡萄球菌(S.aureus)肠毒素A基因(SEA)定性定量的检测方法,本研究针对S.aureus SEA基因片段设计1对引物,将构建的重组质粒作为阳性对照,建立了S.aureus SEA DNA的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法。结果显示,特... 为建立检测牛乳中金黄色葡萄球菌(S.aureus)肠毒素A基因(SEA)定性定量的检测方法,本研究针对S.aureus SEA基因片段设计1对引物,将构建的重组质粒作为阳性对照,建立了S.aureus SEA DNA的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法。结果显示,特异性产物Tm值为78.2℃～78.5℃,最低可检测到49.5 fg/μL(16.5拷贝)的阳性质粒。标准曲线的相关系数为0.99。与其他常见的产SEB的S.aureus、产SEC的S.aureus、无乳链球菌、大肠杆菌、嗜热链球菌、伤寒沙门氏菌、大肠杆菌DH5α及JM109均无交叉反应。该检测方法具有较好的特异性和敏感性,为牛乳中S.aureus的快速检测提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 牛乳 金黄色葡萄球菌 肠毒素A 荧光定量PCR
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鸭疫里氏杆菌生长曲线的测定 被引量：5
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作者 胡清海 陈鸿军 +4 位作者 刘晓文 章明 张知良 丁铲 章耀良 《畜牧与兽医》 北大核心 2002年第8期8-9,共2页
采用P L琼脂平板涂布法 ,测定鸭疫里氏杆菌WJ4株 (血清 1型 )、FXb7株 (血清 2型 )在P L肉汤中静置培养和振荡培养情况下的生长曲线。结果表明 ,在P L肉汤中振荡培养时 ,WJ4株培养 10h达生长最高峰 ( 4 7× 10 1 0 CFU mL) ,FXb7株 ... 采用P L琼脂平板涂布法 ,测定鸭疫里氏杆菌WJ4株 (血清 1型 )、FXb7株 (血清 2型 )在P L肉汤中静置培养和振荡培养情况下的生长曲线。结果表明 ,在P L肉汤中振荡培养时 ,WJ4株培养 10h达生长最高峰 ( 4 7× 10 1 0 CFU mL) ,FXb7株 11h活菌数最高达 ( 4 2× 10 1 0 CFU mL) ;在静置培养时 ,WJ4株培养 2 2h达最高峰 ( 1 8× 10 9CFU mL) ,FXb7株 2 3h可达最高峰 ( 1 3× 10 9CFU mL)。 展开更多
关键词 鸭疫里氏杆菌 生长曲线 平板稀释涂布法 鸭
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