根据番茄褐色皱果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)外壳蛋白(coat protein,CP)的保守基因序列设计1对特异性引物,建立了基于SYBR Green I的ToBRFV实时荧光RT-PCR检测方法,并对其进行了特异性、灵敏度检测,对自然感染ToBRF...根据番茄褐色皱果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)外壳蛋白(coat protein,CP)的保守基因序列设计1对特异性引物,建立了基于SYBR Green I的ToBRFV实时荧光RT-PCR检测方法,并对其进行了特异性、灵敏度检测,对自然感染ToBRFV的番茄、辣椒种子进行了检测验证。结果表明,构建的实时荧光RT-PCR检测ToBRFV阳性的番茄种子总RNA和重组质粒标准品的检测低限分别为0.2 ng/μL和50.0拷贝/μL,均为普通RT-PCR检测灵敏度的100倍;对番茄花叶病毒(tomato mosaic virus,ToMV)、番茄环斑病毒(tomato ringspot virus,ToRSV)、番茄黑环病毒(tomato black ring virus,TBRV)、番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)、辣椒轻斑驳病毒(pepper mild mottle virus,PMMoV)、烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)和烟草环斑病毒(tobacco ringspot virus,TRSV)等7种病毒均无扩增反应,具有很好的特异性。对50份疑似感染了ToBRFV的番茄和辣椒种子样品检测结果表明,与常规RT-PCR和已报道的2种实时荧光RT-PCR方法相比,本研究建立的实时荧光RT-PCR方法具有准确率高、特异性强、灵敏度高的特点,适用于低丰度ToBRFV的种子检测。展开更多
本研究旨在建立番茄和辣椒种子携带番茄褐色皱果病毒(Tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)快速、精准的核酸检测技术。选用ToBRFV的MP蛋白基因和CP蛋白基因保守序列作为靶标区域设计了1对特异性引物ToBRFV⁃F⁃5506/ToBRFV⁃R⁃6186,...本研究旨在建立番茄和辣椒种子携带番茄褐色皱果病毒(Tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)快速、精准的核酸检测技术。选用ToBRFV的MP蛋白基因和CP蛋白基因保守序列作为靶标区域设计了1对特异性引物ToBRFV⁃F⁃5506/ToBRFV⁃R⁃6186,建立了ToBRFV的RT⁃PCR检测方法。用ToBRFV阳性样品对该方法的灵敏度和特异性进行了系统分析,最后以疑似ToBRFV感染的实际种子样品进行验证,并与已报道的9对ToBRFV特异性引物对实际种子样品的检测效率进行比较分析。结果表明,采用本研究建立的RT⁃PCR检测方法检测限值至2.5ng/μL,且与番茄和辣椒的其他主要病毒无交叉反应,特异性良好,对50份疑似ToBRFV感染的番茄和辣椒种子样品的阳性检出率高达40%,要优于已报道的9对ToBRFV特异性引物。本研究建立的番茄褐色皱果病毒RT⁃PCR检测方法具有较高的灵敏度和良好的特异性,适用于ToBRFV感染的番茄和辣椒种子样品检测。展开更多
文摘本研究旨在建立番茄和辣椒种子携带番茄褐色皱果病毒(Tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)快速、精准的核酸检测技术。选用ToBRFV的MP蛋白基因和CP蛋白基因保守序列作为靶标区域设计了1对特异性引物ToBRFV⁃F⁃5506/ToBRFV⁃R⁃6186,建立了ToBRFV的RT⁃PCR检测方法。用ToBRFV阳性样品对该方法的灵敏度和特异性进行了系统分析,最后以疑似ToBRFV感染的实际种子样品进行验证,并与已报道的9对ToBRFV特异性引物对实际种子样品的检测效率进行比较分析。结果表明,采用本研究建立的RT⁃PCR检测方法检测限值至2.5ng/μL,且与番茄和辣椒的其他主要病毒无交叉反应,特异性良好,对50份疑似ToBRFV感染的番茄和辣椒种子样品的阳性检出率高达40%,要优于已报道的9对ToBRFV特异性引物。本研究建立的番茄褐色皱果病毒RT⁃PCR检测方法具有较高的灵敏度和良好的特异性,适用于ToBRFV感染的番茄和辣椒种子样品检测。
