噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌标准化研究 被引量：23

1

作者 彭丽 罗永艾 王国治 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期806-810,共5页

目的　对噬菌体生物扩增法快速检测和鉴别标本中分枝杆菌的方法学进行探讨。方法　对噬菌体生物扩增法的条件 :感染时间、杀灭胞外噬菌体的药物浓度和时间进行探讨和比较 ;观察不同分枝杆菌应用此法的检测灵敏度和特异性 ,以及对呼吸道... 目的　对噬菌体生物扩增法快速检测和鉴别标本中分枝杆菌的方法学进行探讨。方法　对噬菌体生物扩增法的条件 :感染时间、杀灭胞外噬菌体的药物浓度和时间进行探讨和比较 ;观察不同分枝杆菌应用此法的检测灵敏度和特异性 ,以及对呼吸道常见细菌的特异度 ;观察实验中所用噬菌体、杀菌剂、辅助细菌在 2 8～ 4 0周内的稳定性。结果　 (1)结核分枝杆菌与噬菌体感染 3～ 4h时感染效率较高 ,4 %硫酸亚铁胺 10 0 μl作用 5min能全部杀灭 1 1ml中 1× 10 9噬菌斑形成单位(PFU)的噬菌体 ;(2 ) 80～ 2 0 0集落形成单位 (CFU) /ml的结核分枝杆菌活菌能用此法检测出阳性结果 ,非结核分枝杆菌≤ 1× 10 3 CFU/ml时仅耻垢分枝杆菌出现阳性结果 ,特异性为 95 % ,而≥ 1× 10 4CFU/ml时结果依据不同的菌株而不同 ,呼吸道常见的非分枝杆菌细菌用此法的检测特异性为 10 0 % ;(3)液体 4℃保存实验中的主要成分 ,稳定性均较好。结论　应用噬菌体方法可以快速检测和鉴别结核分枝杆菌 ,所需试剂的稳定性较好 ,为广泛应用于临床检测提供了依据。 展开更多

关键词 噬菌体 结核分枝杆菌 扩增 快速检测 阳性结果 特异性 呼吸道 生物 标准化研究 观察实验

原文传递

结核分枝杆菌潜伏感染动物模型及评价 被引量：17

2

作者 黎友伦 王国治 罗永艾 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期552-554,共3页

关键词 结核分枝杆菌 潜伏感染 动物模型 病发病机制 结核病模型 生物学特性 诊断试剂 预防措施 动物体内

原文传递

BCG-CpG-DNA对重组HBsAg的免疫佐剂作用 被引量：16

3

作者 赵爱华 乔来艳 +2 位作者 贾淑珍 寇丽杰 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第5期356-358,361,共4页

目的研究BCG-CpG-DNA对重组HBsAg的免疫佐剂作用。方法以BCG-CpG-DNA与重组HBsAg混合免疫小鼠,以铝佐剂疫苗为对照,采用放射免疫法检测抗-HBs中和抗体水平,ELISA法分析抗体亚类,酶联免疫斑点试验(ELIS-POT)检测CD8+细胞毒T淋巴细胞(CTL... 目的研究BCG-CpG-DNA对重组HBsAg的免疫佐剂作用。方法以BCG-CpG-DNA与重组HBsAg混合免疫小鼠,以铝佐剂疫苗为对照,采用放射免疫法检测抗-HBs中和抗体水平,ELISA法分析抗体亚类,酶联免疫斑点试验(ELIS-POT)检测CD8+细胞毒T淋巴细胞(CTL)功能。结果BCG-CpG-DNA能提高抗-HBs中和抗体水平,促进抗原特异性IgG2a的产生,诱导Th1型免疫应答,与铝佐剂协同作用能部分逆转Th2反应。同时能增强抗原特异性CD8+T淋巴细胞的杀伤作用,实验组与对照组比较差异有显著意义。结论BCG-CpG-DNA对HBsAg有较好的免疫佐剂作用,有可能成为一种新型的免疫佐剂。 展开更多

关键词 BCG—CpG-DNA 免疫佐剂 HBSAG

下载PDF 职称材料

重组结核分枝杆菌11000蛋白对结核分枝杆菌感染的鉴别作用 被引量：17

4

作者 徐苗 罗永艾 +4 位作者 黎友伦 陈保文 沈小兵 苏城 王国治 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期762-765,共4页

目的研究重组结核分枝杆菌11000蛋白对结核分枝杆菌感染的鉴别作用。方法以不同分枝杆菌分别致敏豚鼠,致敏成功后给所有动物皮内注射重组结核分枝杆菌11000蛋白和结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)或胞内分枝杆菌纯蛋白衍生物(PPD-B),用双盲法... 目的研究重组结核分枝杆菌11000蛋白对结核分枝杆菌感染的鉴别作用。方法以不同分枝杆菌分别致敏豚鼠,致敏成功后给所有动物皮内注射重组结核分枝杆菌11000蛋白和结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)或胞内分枝杆菌纯蛋白衍生物(PPD-B),用双盲法记录注射后24h和(或)48h注射局部皮肤反应的纵、横径,计算其均值。结果PPD或PPD-B对所有分枝杆菌致敏豚鼠的皮肤反应均为阳性,局部硬结直径均大于10mm;重组结核分枝杆菌11000蛋白对结核分枝杆菌活菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌致敏豚鼠的皮肤试验为阳性,局部硬结直径依次为(14.7±2.0)、(9.3±3.8)、(18.7±2.4)和(14.8±4.2)mm,而对灭活结核分枝杆菌、卡介苗和其他非结核分枝杆菌致敏豚鼠的皮肤试验均为阴性。结论重组结核分枝杆菌11000蛋白可有效鉴别结核分枝杆菌活菌感染和卡介苗接种、结核分枝杆菌死菌致敏以及其他非结核分枝杆菌的感染。 展开更多

关键词 重组蛋白质类 分枝杆菌 结核 动物 实验

原文传递

BCG-CpG-DNA免疫活性作用的初步研究 被引量：13

5

作者 赵爱华 寇丽杰 +2 位作者 乔来艳 贾淑珍 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期574-577,共4页

目的研究BCG-CpG-DNA的免疫学活性。方法通过淋巴细胞增殖、T细胞亚群分析、细胞因子产生、对NK细胞杀伤功能影响等试验,检测BCG-CpG-DNA的免疫活性。结果BCG-CpG-DNA能促进小鼠T、B淋巴细胞增殖,活化巨噬细胞分泌IL-12,并能增强ConA诱... 目的研究BCG-CpG-DNA的免疫学活性。方法通过淋巴细胞增殖、T细胞亚群分析、细胞因子产生、对NK细胞杀伤功能影响等试验,检测BCG-CpG-DNA的免疫活性。结果BCG-CpG-DNA能促进小鼠T、B淋巴细胞增殖,活化巨噬细胞分泌IL-12,并能增强ConA诱导IFN-γ产生,提高小鼠脾细胞中CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群的含量,同时增强小鼠NK细胞的杀伤活性。实验组与对照组所有结果差异均有显著意义(P<0.05)。结论BCG-CpG-DNA能活化抗原呈递细胞(APC),并具有较好的免疫活性。 展开更多

关键词 BCG-CPG-DNA 佐剂 免疫活性

下载PDF 职称材料

噬菌体D29对耐药结核病豚鼠的治疗作用 被引量：13

6

作者 彭丽 陈保文 +4 位作者 罗永艾 沈小兵 黎友伦 苏城 王国治 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第17期1576-1579,共4页

目的:观察噬菌体D29对患耐药结核病豚鼠的治疗作用.方法:采用皮下攻击法建立耐药结核病豚鼠模型,建模成功后随机将动物分为对照组、利福平(RFP)组、联合化疗组、噬菌体组4组.分别给予生理盐水、RFP单独、多种抗结核药物联合灌胃、噬菌体... 目的:观察噬菌体D29对患耐药结核病豚鼠的治疗作用.方法:采用皮下攻击法建立耐药结核病豚鼠模型,建模成功后随机将动物分为对照组、利福平(RFP)组、联合化疗组、噬菌体组4组.分别给予生理盐水、RFP单独、多种抗结核药物联合灌胃、噬菌体D29滴鼻,3次/wk,隔日给药.于治疗4,7wk后观察各组动物的一般情况、脏器质量指数(WI)、脏器病理组织学改变.脾脏结核分枝杆菌定量培养,并用ELISA方法检测血液中IL-2,IL-4,IFN-γ含量.结果:RFP组、联合化疗组在给药4wk内,体质量增长量明显小于对照组(P<0.05),而噬菌体组的体质量增长正常,与对照组相比较差异不显著.治疗4wk时各治疗组的病变指数均低于对照组,其中噬菌体组病变程度最轻,荷菌量(CFU)最低,差异具有统计学意义(P<0.05).7wk时动物的均一性对照组、RFP组较差,噬菌体组、联合化疗组较好.病理组织学改变噬菌体组、联合化疗组肺脏以纤维化、增生结节为主,脾脏很少有干酪样坏死;对照组肺脏可见大量Langhans细胞,以增生结节为主,脾脏较多干酪样坏死;IL-2含量RFP组、噬菌体组、联合化疗组均高于对照组,其中以噬菌体组含量最高,差异具有统计学意义(P<0.05).各组IL-4,IFN-γ均无显著性差异.结论:噬菌体D29可减轻耐药结核病豚鼠的脏器病变程度和脏器CFU,可改善机体细胞免疫功能,协同噬菌体杀灭机体内的结核菌,对豚鼠无副作用,有望作为新型抗结核药物的开发对象. 展开更多

关键词 分枝杆菌噬菌体 结核 抗药性 微生物 药效学 免疫

下载PDF 职称材料

常见分枝杆菌不同株16S-23S rRNA转录间隔区序列分析 被引量：8

7

作者 闫李侠 居军 +2 位作者 陈保文 祝秉东 王国治 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期436-441,共6页

目的分析常见分枝杆菌不同株之间的基因型，为临床分离株的鉴定提供参考序列。方法用16S-23S rRNA转录间隔区（internal transcribed spacer，ITS）序列分析法对94株由德国微生物和细胞保藏中心（DSMZ）引进的常见分枝杆菌进行种内不同... 目的分析常见分枝杆菌不同株之间的基因型，为临床分离株的鉴定提供参考序列。方法用16S-23S rRNA转录间隔区（internal transcribed spacer，ITS）序列分析法对94株由德国微生物和细胞保藏中心（DSMZ）引进的常见分枝杆菌进行种内不同株的基因型分析，并分别与12株国际标准株对比。通过种内不同株间同源性序列比对，绘制16S-23SrRNAITS序列聚类分析树状谱，使用DNAStar的MegAlign软件计算株间相似性百分比。结果成功完成上述共106株菌株的16S-23S rRNA ITS测序，发现除胞内分枝杆菌（4株）、鸟分枝杆菌（4株）、海分枝杆菌（6株）和马尔摩分枝杆菌（2株）各有一个基因型且与标准株相同外，其他分枝杆菌均可分为数个不同基因型。结论16S-23S rRNA ITS序列分析可以根据种内各株的不同基因型将分枝杆菌鉴定到株，是分枝杆菌基因型分析的可靠方法。 展开更多

关键词 分枝杆菌 基因型 16S-23S rRNA转录间隔区

原文传递

冻干血吸虫病诊断试剂IgG免疫血清国家参考品的制备及标定 被引量：7

8

作者 辛晓芳 朱荫昌 +7 位作者 何伟 张谨 王国柱 梁幼生 徐明 薄淑英 曹国群 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期400-401,共2页

目的建立血吸虫病诊断试剂IgG免疫血清国家参考品。方法收集血吸虫病疫区粪检筛查阳性病人血清和非疫区正常人血清,经标定和验证合格,制成冻干参考品。结果冻干参考品血清效价符合要求,2家协作单位用3种免疫学方法标定,结果一致。结论... 目的建立血吸虫病诊断试剂IgG免疫血清国家参考品。方法收集血吸虫病疫区粪检筛查阳性病人血清和非疫区正常人血清,经标定和验证合格,制成冻干参考品。结果冻干参考品血清效价符合要求,2家协作单位用3种免疫学方法标定,结果一致。结论所制备的冻干参考品可以用于血吸虫病抗体诊断试剂的检定。 展开更多

关键词 血吸虫病 诊断试剂 参考血清

下载PDF 职称材料

结核分枝杆菌潜伏感染豚鼠模型的建立 被引量：7

9

作者 黎友伦 陈保文 +4 位作者 徐苗 罗永艾 王国治 沈小兵 苏城 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期684-687,共4页

目的建立MTB潜伏感染豚鼠模型，研究MTB体内增殖动力学及与PPD试验的关系。方法62只豚鼠按随机数字表法分成对照组（20只）和模型组（42只），模型组又分为4周组（12只）、8周组（21只）和12周组（9只）。采用恢复毒力的H37Rv株500CFU... 目的建立MTB潜伏感染豚鼠模型，研究MTB体内增殖动力学及与PPD试验的关系。方法62只豚鼠按随机数字表法分成对照组（20只）和模型组（42只），模型组又分为4周组（12只）、8周组（21只）和12周组（9只）。采用恢复毒力的H37Rv株500CFU经豚鼠腹股沟皮下注射攻毒，攻毒后2周，模型组给予异烟肼（10mg／kg）和吡嗪酰胺（40mg／kg）每周3次灌胃，控制MTB增殖，分别于4周、8周和12周停药。模型4周组停药后观察结核病自然复发情况，模型8周组和12周组停药后观察结核病自然复发和地塞米松诱导复发情况。在建立模型过程中进行PPD试验，检测豚鼠的脾、肺荷菌量及组织切片病理，分析PPD试验与结核病活动或潜伏感染的关系。结果对照组豚鼠攻毒后2周脾荷菌量为3．3lg CFU，6周后出现腹股沟淋巴结肿大，脾、肺荷菌量分别为4．5和1．8lg CFU，18周时脾、肺荷菌量分别达5．3和5．4lg CFU。观察期间，模型4周组停药后结核病均自然复发；模型8周组有结核病自然复发和地塞米松诱导复发；模型12周组无结核病自然复发，但地塞米松可诱导结核病复发。PPD试验反应越强，结核病越容易复发，PPD试验反应阴性豚鼠则无结核病复发。结论H37Rv攻毒豚鼠后，用异烟肼和毗嗪酰胺联合化疗可抑制MTB增殖，成功建立豚鼠MTB潜伏感染模型，潜伏感染可致豚鼠结核病的自然复发或地塞米松诱导复发。PPD试验反应强弱与结核病复发有关。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 豚鼠 模型 动物 感染

原文传递

BCG-CpG-DNA一般毒性的初步评价 被引量：6

10

作者 赵爱华 乔来艳 +4 位作者 贾淑珍 寇丽杰 王雯 李凤祥 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第8期797-802,共6页

目的观察BCG-CpG-DNA对小鼠急性毒性和28d长期毒性作用,评价其一般毒性。方法小鼠分别经背部皮下给予BCG-CpG-DNA100、250和500μg1次(急性毒性试验)和7次(28d长期毒性试验),对照组注射生理盐水。单次给药后观察小鼠的生长情况和体重变... 目的观察BCG-CpG-DNA对小鼠急性毒性和28d长期毒性作用,评价其一般毒性。方法小鼠分别经背部皮下给予BCG-CpG-DNA100、250和500μg1次(急性毒性试验)和7次(28d长期毒性试验),对照组注射生理盐水。单次给药后观察小鼠的生长情况和体重变化,14d后观察脏器是否发生病变;重复给药期间及末次给药后3周恢复期内,每周观察小鼠外观体征、局部刺激性和体重变化;末次给药后3d及3周检测血液学、血液生化学指标及主要脏器系数和抗双链DNA抗体水平。结果 BCG-CpG-DNA急性毒性试验中,各组小鼠均健康存活,体重增加,无毒性反应。BCG-CpG-DNA28d长期毒性试验中,动物体重、行为活动无异常,给药部位无局部刺激性表现;BCG-CpG-DNA重复给药可提高小鼠免疫细胞的数量;末次给药后3d,各试验组脾脏系数均高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05),经过3周恢复期回复正常;各试验组血清中抗双链DNA水平与对照组比较,差异无统计学意义,均低于25U/ml的临界值。结论 BCG-CpG-DNA主要影响小鼠的免疫细胞和免疫器官,未见其他明显的急性毒性和长期毒性作用,表明BCG-CpG-DNA具有较好的安全性。 展开更多

关键词 BCG-CPG-DNA 毒性试验 安全性评价

原文传递

噬菌体对结核病模型豚鼠免疫功能的影响 被引量：5

11

作者 彭丽 罗永艾 +3 位作者 陈保文 黎友伦 沈小兵 王国治 《医药导报》 CAS 2006年第8期767-770,共4页

目的观察噬菌体D29对结核病模型豚鼠体液免疫功能与细胞免疫功能的影响。方法采用皮下攻击法建立敏感和耐药结核分枝杆菌感染的结核病豚鼠模型，分别将感染敏感菌和耐药菌的豚鼠随机分为对照组、噬菌体组、利福平（RFP）组和联合化疗组... 目的观察噬菌体D29对结核病模型豚鼠体液免疫功能与细胞免疫功能的影响。方法采用皮下攻击法建立敏感和耐药结核分枝杆菌感染的结核病豚鼠模型，分别将感染敏感菌和耐药菌的豚鼠随机分为对照组、噬菌体组、利福平（RFP）组和联合化疗组。对照组给予0．9％氯化钠溶液隔日灌胃；RFP组给予RFP溶液隔日灌胃，每次给药剂量为15mg·kg^-1，每周3次；联合化疗组采用RFP＋乙胺丁醇＋吡嗪酰胺＋左氧氟沙星隔日灌胃，4种药物的剂量分别为15，25，25，6mg·kg^-1，每周3次；噬菌体组采用滴鼻的方式隔日给予噬菌体，每次1×10^8PFU（0．5mL），每周3次。均共治疗4～7周。观察治疗期间豚鼠血清中噬菌体中和抗体的动态变化，以及实验开始4周后豚鼠血清中白细胞介素．2（IL-2）、IL-4、γ干扰素（IFN-γ）的变化，并在电镜下观察巨噬细胞对噬菌体的吞噬情况。结果结核病模型豚鼠采用噬菌体治疗18d后，血清中均开始出现噬菌体中和抗体，抗体滴度与时间呈正相关。电镜观察发现巨噬细胞可以吞噬、消化部分噬菌体。敏感结核分枝杆菌感染模型采用利福平或噬菌体治疗4周后，血清中IL-2含量高于对照组；耐药结核分枝杆菌感染模型中RFP组、噬菌体组和联合化疗组的IL-2含量均高于对照组，其中噬菌体组血清IL-2含量最高，与对照组比较，差异有显著性（P〈0．05）。各组IL-4、IFN-γ均差异无显著性。结论噬菌体具有抗原的特性，可刺激机体产生中和抗体，同时可改善机体的细胞免疫功能，协同噬菌体杀灭机体内的结核分枝杆菌。 展开更多

关键词 噬菌体 结核分枝杆菌 豚鼠 免疫功能

下载PDF 职称材料

ELISA检测抗荚膜组织胞浆菌抗体方法的建立 被引量：5

12

作者 王璞 陈保文 +2 位作者 罗永艾 徐苗 王国治 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期87-89,共3页

目的建立检测小鼠血清中抗荚膜组织胞浆菌抗体的ELISA方法。方法制备荚膜组织胞浆菌(HC)抗原和结核分枝杆菌(MTB)抗原免疫小鼠,通过不同免疫次数获得不同效价的小鼠抗HC血清。以荚膜组织胞浆菌蛋白提取物(P-HTPM)为包被抗原,“方阵滴定... 目的建立检测小鼠血清中抗荚膜组织胞浆菌抗体的ELISA方法。方法制备荚膜组织胞浆菌(HC)抗原和结核分枝杆菌(MTB)抗原免疫小鼠,通过不同免疫次数获得不同效价的小鼠抗HC血清。以荚膜组织胞浆菌蛋白提取物(P-HTPM)为包被抗原,“方阵滴定法”确定包被抗原和抗血清的最适工作浓度,建立检测抗HC抗体ELISA法。结果HC抗原免疫小鼠3次获得4份低效价抗血清,平均A值为0.345,免疫4次获得8份高效价血清,平均A值为0.991。ELISA方法中包被抗原和抗血清的最佳工作浓度为1μg?孔及1∶1000。P-HTPM和TB-PPD与各自免疫血清均呈阳性反应,A值分别为0.993±0.216和1.606±0.263,但二者之间无交叉反应。结论本文建立的ELISA方法将成为荚膜组织胞浆菌病和结核病的一种鉴别诊断方法。 展开更多

关键词 荚膜组织胞浆菌 ELISA 结核分枝杆菌

下载PDF 职称材料

分枝杆菌噬菌体生物学特性探讨 被引量：5

13

作者 彭丽 罗永艾 +1 位作者 沈小兵 王国治 《微生物学免疫学进展》 2005年第1期19-23,共5页

为了确定不同分枝杆菌噬菌体的宿主菌以及扩增方法和最佳保存方法,观察了七种分枝杆菌噬菌体对结核分枝杆菌、耻垢分枝杆菌的裂解情况,并分别于感染后 24、48小时采用离心 过滤、孵育 过滤方法收集噬菌体比较扩增效率,采用不同稳定剂对... 为了确定不同分枝杆菌噬菌体的宿主菌以及扩增方法和最佳保存方法,观察了七种分枝杆菌噬菌体对结核分枝杆菌、耻垢分枝杆菌的裂解情况,并分别于感染后 24、48小时采用离心 过滤、孵育 过滤方法收集噬菌体比较扩增效率,采用不同稳定剂对分枝杆菌噬菌体进行液体和冻干保存,在不同时间段采用琼脂双层法检测其效价。结果显示:①D29分枝杆菌噬菌体能同时较高效地裂解结核分枝杆菌和耻垢分枝杆菌;②感染 48小时后采用孵育 过滤方法收集的噬菌体效价高,方法简单;③液体 4℃保存的噬菌体稳定性好, 70℃液体保存和冻干后 4℃、室温、37℃保存依据不同稳定剂而相差较大。因此,在 48小时后采用孵育 过滤方法收集噬菌体具有高效率特性并且简单易行,噬菌体液体 4℃保存简单、有效,值得推荐。 展开更多

关键词 噬菌体 稳定剂 结核分枝杆菌 耻垢分枝杆菌

下载PDF 职称材料

结核分枝杆菌噬菌体试剂盒的研制与初步评价 被引量：6

14

作者 彭丽 沈小兵 +1 位作者 罗永艾 王国治 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期389-392,共4页

目的:研制能快速检测标本中结核分枝杆菌的噬菌体试剂盒,并对之在临床上的应用做出初步评价。方法:采用不同方法对噬菌体的生产和保存工艺进行探讨,并且观察该方法中所用试剂的稳定性。建立噬菌体快速检测结核分枝杆菌的方法,分别用噬... 目的:研制能快速检测标本中结核分枝杆菌的噬菌体试剂盒,并对之在临床上的应用做出初步评价。方法:采用不同方法对噬菌体的生产和保存工艺进行探讨,并且观察该方法中所用试剂的稳定性。建立噬菌体快速检测结核分枝杆菌的方法,分别用噬菌体法与传统培养法检测34份临床标本中的结核分枝杆菌,以培养法作为金标准观察噬菌体法的敏感度、特异度和符合率。结果:①在37℃环境中采用琼脂双层法进行噬菌体扩增生产,48h后采用孵育-过滤法收集,可以获得较为理想的产量且简单易行。②噬菌体以液体形式4℃保存或以噬菌体宿主菌的无细胞菌苗作为保护剂进行真空冻干后4℃保存,28周后效价下降不足10的一个数量级。③噬菌体法中的重要试剂:辅助细菌和杀病毒剂,4℃保存40周均具有良好的稳定性。④34份痰标本培养4周,其中2份污染,29份阳性,3份阴性;噬菌体法检测标本中结核分枝杆菌的敏感度、特异度和符合率分别为86.2%(25/29)、66.7%(2/3)、84.4%(27/32)。结论:噬菌体法在48h内可以快速检测标本中的结核分枝杆菌活菌,并且具有以试剂盒形式进行商业化生产的可行性,将有助于临床结核病的快速诊断。 展开更多

关键词 噬菌体 分枝杆菌 结核 诊断

下载PDF 职称材料

依赖利福平结核分枝杆菌的动物实验研究 被引量：4

15

作者 黎友伦 罗永艾 +4 位作者 钟敏 陈保文 沈小兵 苏城 王国治 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期617-621,共5页

目的通过对依赖利福平结核分枝杆菌的豚鼠结核病模型研究,探讨依赖利福平结核分枝杆菌是否存在。方法豚鼠按随机数字法分成依赖利福平结核分枝杆菌(1130株、1219株、b858株)组、耐利福平结核分枝杆菌(1290株)组和对豚鼠强毒力致病株(ATC... 目的通过对依赖利福平结核分枝杆菌的豚鼠结核病模型研究,探讨依赖利福平结核分枝杆菌是否存在。方法豚鼠按随机数字法分成依赖利福平结核分枝杆菌(1130株、1219株、b858株)组、耐利福平结核分枝杆菌(1290株)组和对豚鼠强毒力致病株(ATCC 35810株)组,每株组再设实验组和对照组。建立豚鼠1130株、1219株、b858株、1290株和 ATCC 35810株攻毒模型,实验组用利福平治疗,对照组用生理盐水治疗,各组分别于4、7、10周观察豚鼠脏器(脾、肺、肝)致病指数、脏器重量指数(WI)、脏器(脾、肺)结核分枝杆菌培养的荷菌量及组织病理学检查。结果 1130株、1219株、1290株和 b858株攻毒豚鼠7周时,致病指数值:实验组分别为68.7±13.8、60.0±13.5、70.0±5.8和23.8±18.9,对照组分别为76.2±18.9、40.0±16.8、63.8±10.3和22.5±15.5,差异均无统计学意义(t 值分别为0.64、1.85、0.35和0.10,P 均>0.05);脾 WI 值:实验组分别为0.229±0.048、0.256±0.067、0.324±0.054和0.199±0.029,对照组分别为0.278±0.025、0.216±0.076、0.368±0.033和0.213±0.038,差异均无统计学意义(t 值分别为1.75、0.79、1.41和0.57,P 均>0.05);脾荷菌量的对数值:实验组分别为(4.98±0.30)、(4.68±1.26)、(5.07±0.47)和(3.85±0.45)CFU,对照组分别为(4.90±1.03)、(4.79±0.45)、(5.08±0.55)和(4.23±0.95)CFU,差异均无统计学意义(t 值分别为0.11、0.15、0.03和0.73,P 均>0.05),实验组和对照组的病理检查结果相似。结论依赖利福平结核分枝杆菌豚鼠结核病模型研究结果与耐利福平结核分枝杆菌株豚鼠结核病模型近似,未见明显依赖利福平现象。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 利福平 物质相关性障碍 豚鼠

原文传递

BCG-CpG-DNA重复给药对小鼠免疫毒性的初步评价 被引量：5

16

作者 郑亮 赵爱华 +6 位作者 王雯 乔来艳 贾淑珍 寇丽杰 李凤祥 吴小南 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第9期922-925,929,共5页

目的观察BCG-CpG-DNA重复给药对小鼠免疫器官和免疫功能的影响,评价BCG-CpG-DNA的免疫毒性。方法将BALB/c小鼠随机分为4组,对照组注射生理盐水,实验组分别注射低(100μg)、中(250μg)、高(500μg)剂量的BCG-CpG-DNA,于28d内分别经背部... 目的观察BCG-CpG-DNA重复给药对小鼠免疫器官和免疫功能的影响,评价BCG-CpG-DNA的免疫毒性。方法将BALB/c小鼠随机分为4组,对照组注射生理盐水,实验组分别注射低(100μg)、中(250μg)、高(500μg)剂量的BCG-CpG-DNA,于28d内分别经背部皮下免疫7次,分别于初次免疫后14d、末次免疫后3d和3周,检测各组小鼠免疫器官脏器系数、淋巴细胞转化功能、细胞因子释放(ELISPOT法)、T细胞亚群变化(免疫荧光法)和NK细胞杀伤活性(乳酸脱氢酶法)。结果 BCG-CpG-DNA重复给药7次,主要影响小鼠初级免疫器官,表现为脾肿大,对胸腺、肝脏和肾脏无影响;对细胞免疫功能的影响是增强淋巴细胞转化功能;降低中、高剂量组CD3+T细胞亚群含量;提高体内分泌IFNγ和IL-4的细胞数二者的比例;增强NK细胞的杀伤能力。结论 BCG-CpG-DNA重复给药累计达3.5mg,小鼠表现为免疫功能增强,对免疫器官和免疫功能无不良影响,未见免疫毒性副作用。 展开更多

关键词 BCG-CPG-DNA 免疫毒性 安全性评价

原文传递

结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白对不同分枝杆菌致敏动物的鉴别作用 被引量：4

17

作者 都伟欣 陈保文 +1 位作者 徐苗 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第8期807-808,814,共3页

目的探讨结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白对不同分枝杆菌致敏动物的鉴别作用。方法以不同分枝杆菌分别致敏豚鼠,致敏成功后,每只豚鼠皮内分别注射结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白和结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)。用双盲法记录注射后24和... 目的探讨结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白对不同分枝杆菌致敏动物的鉴别作用。方法以不同分枝杆菌分别致敏豚鼠,致敏成功后,每只豚鼠皮内分别注射结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白和结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)。用双盲法记录注射后24和48h注射局部硬结的纵径和横径,计算其均值。结果PPD对结核分枝杆菌活菌、死菌和卡介苗致敏豚鼠的皮肤反应均为阳性,局部硬结直径分别为(13.91±1.04)mm、(13.11±1.40)mm和(13.16±1.43)mm。结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白对结核分枝杆菌活菌致敏豚鼠的皮肤反应为强阳性(≥10mm),局部硬结直径为(10.53±2.66)mm;对结核分枝杆菌死菌致敏豚鼠的皮肤反应为弱阳性(≤5mm)或阴性,局部硬结直径为(1.61±1.39)mm;对卡介苗致敏豚鼠的皮肤反应为阴性,局部硬结直径为0。结论结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白可鉴别结核分枝杆菌活菌、死菌和卡介苗致敏动物。 展开更多

关键词 分枝杆菌 CFP10-ESAT6融合蛋白 致敏 鉴别

原文传递

荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物的制备 被引量：3

18

作者 陈保文 沈小兵 +1 位作者 苏城 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期617-618,622,共3页

目的研制荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物。方法采用液体表面膜培养方法培养荚膜组织胞浆菌,培养液经盐析和弱酸沉淀法纯化,再经透析和除菌,制成荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物原液,并进行豚鼠的皮肤反应试验和安全性检测。结果荚膜组织胞... 目的研制荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物。方法采用液体表面膜培养方法培养荚膜组织胞浆菌,培养液经盐析和弱酸沉淀法纯化,再经透析和除菌,制成荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物原液,并进行豚鼠的皮肤反应试验和安全性检测。结果荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物的蛋白纯度达80%以上,其1μg/ml的浓度诱导的豚鼠皮肤反应与国外同类制品等效,且具有良好的安全性。结论荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物可作为体内诊断制品,用于检查人体荚膜组织胞浆菌的感染以及荚膜组织胞浆菌病的临床诊断。 展开更多

关键词 荚膜组织胞浆菌素 纯蛋白衍生物 皮肤反应

下载PDF 职称材料

结核分枝杆菌脂多糖的提取及其检测血清结核抗体的研究 被引量：3

19

作者 周丽蓉 罗永艾 王国治 《中国防痨杂志》 CAS 2007年第3期235-237,共3页

目的提取结核分枝杆菌(MTB)脂多糖抗原,检测结核血清参考品,评价其在血清学诊断中的价值。方法将MTB菌体冰浴超声破碎,用酚/氯仿、氯仿/甲醇抽提除去蛋白和脂质,再用DNase I酶和RNase酶作用除去DNA和RNA,得到初步纯化的脂多糖即LPS-1,LP... 目的提取结核分枝杆菌(MTB)脂多糖抗原,检测结核血清参考品,评价其在血清学诊断中的价值。方法将MTB菌体冰浴超声破碎,用酚/氯仿、氯仿/甲醇抽提除去蛋白和脂质,再用DNase I酶和RNase酶作用除去DNA和RNA,得到初步纯化的脂多糖即LPS-1,LPS-1在去污剂Triton-X114作用后,分成含有阿拉伯甘露糖(AM)的水相即LPS-2和含有脂阿拉伯甘露糖(LAM)和脂甘露糖(LM)的有机相即LPS-3,以三种多糖作为抗原,通过ELISA方法检测结核阳性和阴性血清参考品。结果LPS-1对结核血清参考品检测的敏感性为71.7%,特异性为96%,LPS-3的敏感性为43.9%(18/41),而特异性达到100%。结论脂多糖抗原检测血清结核抗体显示出较强的特异性,可望成为结核病血清学的诊断组合抗原之一。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 脂多糖 抗原

下载PDF 职称材料

结核杆菌利福平与异烟肼耐药基因快速检测用参考品的制备 被引量：3

20

作者 陈保文 沈小兵 +2 位作者 苏城 王国治 景奉香 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期402-404,406,共4页

目的建立结核杆菌利福平与异烟肼耐药基因快速检测用国家参考品。方法收集分枝杆菌菌株,用经典的药敏试验及培养基鉴别试验进行鉴定;用分子生物学技术对耐药菌株的耐药基因进行核苷酸序列分析,并进行突变位点的筛选;选取完全耐药菌株,... 目的建立结核杆菌利福平与异烟肼耐药基因快速检测用国家参考品。方法收集分枝杆菌菌株,用经典的药敏试验及培养基鉴别试验进行鉴定;用分子生物学技术对耐药菌株的耐药基因进行核苷酸序列分析,并进行突变位点的筛选;选取完全耐药菌株,用膜过滤法制备单细胞菌液,进行显微计数。结果选出阳性参考品符合率检测用、含不同突变位点的结核分枝杆菌耐药菌株20株;阴性参考品符合率检测用菌株10株,其中敏感菌株5株,致病性非结核分枝杆菌菌株5株;最低检出量检测用结核分枝杆菌耐药菌株5株,制备浓度为1×106个/ml的单细胞菌液。结论该参考品可以用作结核菌利福平与异烟肼耐药基因快速检测试剂质量的标准。 展开更多

关键词 结核杆菌 药敏试验 耐药基因 参考品

下载PDF 职称材料