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运用变性高效液相色谱对肺炎克雷伯菌产ESBL进行基因分型 被引量：20
1
作者 刘朝晖 王汉平 +3 位作者 陈劲龙 杨银梅 叶惠芬 曾军 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期764-767,共4页
目的通过运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对前期研究已确认产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的肺炎克雷伯菌临床分离株TEM型质粒进行基因分型,试图建立一种方便快捷的用于ESBL分子诊断及其流行病学监测的新方法。方法利用PCR技术从肺炎克雷... 目的通过运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对前期研究已确认产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的肺炎克雷伯菌临床分离株TEM型质粒进行基因分型,试图建立一种方便快捷的用于ESBL分子诊断及其流行病学监测的新方法。方法利用PCR技术从肺炎克雷伯菌临床分离株中扩增出TEM型质粒的编码序列,扩增产物运用DHPLC技术进行分析,分析提示,异常的样本通过测序确定其基因突变的类型,最后通过比对确定其基因型。结果共分析了101例肺炎克雷伯菌临床分离株,全部样本均扩增出TEM型质粒的编码序列,经过DHPLC分析,52例(51.4%)样本表现为单一的洗脱峰,其形态与TEM-1标准菌株的峰型相一致,测序确定它们的碱基序列亦相一致,不存在变异,为TEM-1型;49例(48.6%)样本表现为异常的洗脱峰,它们均为双峰,形态一致,但异源双链峰的高度有差异,测序结果表明它们均存在四种相同的基因突变,在NCBI网站比对后确定为TEM-116;测序结果还提示,部分样本中TEM-1和TEM-116混合存在,其比例的不同表现为DHPLC时异源双链峰高度的差异;文献检索表明,本次确定的TEM-116为一新的基因亚型,为国内首次报道。结论DHPLC具有简便快捷、高通量和自动化的特点,重复性好,不仅可对已知突变作出即时诊断,还可发现新的基因亚型,不失为一种较好的ESBL分子诊断方法及其流行病学监测手段。 展开更多
关键词 变性高效液相色谱 肺炎克雷伯菌 超广谱β-内酰胺酶 tem型质粒 基因分型 变性高效液相色谱 肺炎克雷伯菌 ESBL 基因分型 产超广谱β-内酰胺酶 tem-1型 流行病学监测 临床分离株 DHPLC
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鲍曼不动杆菌的耐药性及β-内酰胺酶基因的研究 被引量：14
2
作者 史伟峰 姜建平 姚玉华 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期275-276,共2页
目的调查鲍曼不动杆菌耐药特点及β-内酰胺酶基因类型.方法用Phoenix-100系统对细菌进行鉴定和药敏试验.用琼脂稀释法测定头孢噻肟等6种抗生素的最低抑菌浓度;用PCR法检测β-内酰胺酶基因,并对耐药基因测序分析.结果247株鲍曼不动杆菌... 目的调查鲍曼不动杆菌耐药特点及β-内酰胺酶基因类型.方法用Phoenix-100系统对细菌进行鉴定和药敏试验.用琼脂稀释法测定头孢噻肟等6种抗生素的最低抑菌浓度;用PCR法检测β-内酰胺酶基因,并对耐药基因测序分析.结果247株鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美洛培南耐药率仅为3.2%和4.1%,而对阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林/他唑巴坦等其余14种抗生素耐药率为31.9%～67.2%.20株多重耐药性鲍曼不动杆菌中17株具TEM基因,任选3株经DNA测序为TEM-1型基因,与GeneBank(χ 54604)比较,共有4处同义突变.未检出SHV、OXA、CTX-M、PER和VEB型β-内酰胺酶基因.结论本地区鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药除与TEM型耐药基因有关外,可能还与其他耐药机制有关. 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 内酰胺酶基因 哌拉西林/他唑巴坦 β-内酰胺类抗生素 tem型耐药基因 β-内酰胺酶 PCR法检测 tem-1型 琼脂稀释法 tem基因 多重耐药性 DNA测序 基因类型 耐药特点 药敏试验 头孢噻肟 测序分析 美洛培南 亚胺培南
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同时产PER-1型和TEM-1型β内酰胺酶铜绿假单胞菌的检出 被引量：10
3
作者 侯天文 尹晓琳 +4 位作者 王永祥 陈兴 李烛 张林 李玮 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第4期295-298,共4页
目的　分析多重耐药铜绿假单胞菌临床株 (编号 0 10 7)对 β内酰胺类抗生素耐药情况及其原因。 方法　用改良三维试验分析 0 10 7株产生的 β内酰胺酶表型 ,以碱裂解法提取质粒 ,用聚合酶链反应 (PCR)方法扩增质粒的酶基因型别 ,并对阳... 目的　分析多重耐药铜绿假单胞菌临床株 (编号 0 10 7)对 β内酰胺类抗生素耐药情况及其原因。 方法　用改良三维试验分析 0 10 7株产生的 β内酰胺酶表型 ,以碱裂解法提取质粒 ,用聚合酶链反应 (PCR)方法扩增质粒的酶基因型别 ,并对阳性产物测序。结果　 0 10 7号铜绿假单胞菌临床株产生超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs) ,携有blaPER - 1基因 ,同时还有blaTEM - 1型基因。结论　 0 10 7号菌株耐 β内酰胺类抗生素耐药的可能原因是产生PER - 1型的ESBLs和TEM - 1型的广谱酶。 展开更多
关键词 PER-1型 tem-1型 Β内酰胺酶 铜绿假单胞菌 质粒 基因型
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肝硬化患者检出产TEM型耐药基因的多重耐药气单胞菌 被引量：5
4
作者 曲芬 鲍春梅 +3 位作者 崔恩博 史佳彬 郭桐生 毛远丽 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期43-45,共3页
目的　研究肝硬化患者感染的多重耐药气单胞菌产 β 内酰酶的情况 ,以指导临床合理用药 ,减少耐药菌产生并控制其传播。方法　 4株多重耐药的气单胞菌分离自解放军第三○二医院的住院重症肝硬化患者 ,TEM耐药基因检测用PCR及琼脂糖凝胶... 目的　研究肝硬化患者感染的多重耐药气单胞菌产 β 内酰酶的情况 ,以指导临床合理用药 ,减少耐药菌产生并控制其传播。方法　 4株多重耐药的气单胞菌分离自解放军第三○二医院的住院重症肝硬化患者 ,TEM耐药基因检测用PCR及琼脂糖凝胶电泳法。结果　 4株多重耐药的气单胞菌为分离自血液及腹水中的温和气单胞菌 1株、嗜水气单胞菌 3株 ,检测TEM阳性的有 3株 ,此3株经测序 ,序列均为TEM-1型。重症肝硬化患者感染多重耐药的气单胞菌可直接影响其预后 ,死亡率达 3 4。结论　我国肝硬化患者感染的多重耐药气单胞菌中检测到TEM 1型 β-内酰酶 ,检出率为3/ 4 ,TEM-1耐药基因是气单胞菌的主要耐药机制 。 展开更多
关键词 多重耐药 温和气单胞菌 肝硬化患者 药气 感染 耐药基因 tem-1型 嗜水气单胞菌 分离 测序
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鲍曼不动杆菌启动子突变TEM-1型β-内酰胺酶基因研究 被引量：2
5
作者 黄支密 毛培华 +2 位作者 陈榆 吴晶 仵蕾 《世界感染杂志》 2004年第2期154-157,共4页
目的 分析浙江湖州地区临床分离的鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶(BLA)耐药基因序列，并确定其亚型。方法 采用微量稀释法对在2001年1月至2002年12月间自临床分离的39株鲍曼不动杆菌进行药敏试验、三维试验检测ESBLs，采用聚合酶链反应(PCR)... 目的 分析浙江湖州地区临床分离的鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶(BLA)耐药基因序列，并确定其亚型。方法 采用微量稀释法对在2001年1月至2002年12月间自临床分离的39株鲍曼不动杆菌进行药敏试验、三维试验检测ESBLs，采用聚合酶链反应(PCR)技术检测TEM、SHV、OXA、CTX-M、PER及VEB型BLA耐药基因，并对7株TEM基因型阳性的分离株(编号分别为HZ08、HZ09、HZ17、HZ24、HZ35、HZ37、HZ40)进行耐药基因序列分析。结果 39株鲍曼不动杆菌TEM型BLA耐药基因PCR扩增均呈阳性，其余基因PCR扩增均为阴性。7株TEM基因测序结果表明他们的基因片段全长均含1022个核苷酸，经GenBank网上同源性比较，发现这些序列与广谱酶TEM-1(GenBank注册号：AF188200)的编码区域序列相同，但在启动子区域-47位点处均有1个核苷酸发生突变(G→T)。其中HZ40株的TEM-1序列已在GenBank核酸数据库中成功注册(GenBank注册号：AY263331)。HZ08、HZ09、HZ24、HZ35、HZ37和HZ40株ESBLs均阳性，HZ17株ESBLs阴性。结论 临床分离的鲍曼不动杆菌携带伴启动子区域核苷酸突变的TEM-1亚型BLA耐药基因，此基因可以导致ESBLs表型阳性。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 细菌启动子突变 tem-1型 Β-内酰胺酶 BLA 基因序列
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TEM-1型β-内酰胺酶编码基因的克隆表达
6
作者 张翔 刘刚 +3 位作者 赵廷坤 袁斌 凌保东 雷军 《四川生理科学杂志》 2005年第2期52-53,共2页
目的:构建TEM-l型β-内酰胺酶基因的表达载体。方法:通过PCR扩增TEM-l全编码基因,将其连接入pBK-CMV载体中,并在大肠杆菌JM109中表达。采用琼脂二倍稀释法对TEM-l克隆菌株进行MIC检测,双纸片法筛选及确证实验检测其表型,等电聚焦(IEF)... 目的:构建TEM-l型β-内酰胺酶基因的表达载体。方法:通过PCR扩增TEM-l全编码基因,将其连接入pBK-CMV载体中,并在大肠杆菌JM109中表达。采用琼脂二倍稀释法对TEM-l克隆菌株进行MIC检测,双纸片法筛选及确证实验检测其表型,等电聚焦(IEF)电泳测定其等电点(pIs)。结果:经酶切测序鉴定TEM-l基因的表达载体构建正确。重组菌产pI为5.4的TEM-l广谱酶,仅对青霉素类耐药。结论:TEM-l基因原核表达载体正确构建,为进一步研究打下了基础。 展开更多
关键词 Β内酰胺酶 tem-1 基因 克隆 表达 tem-1型 Β-内酰胺酶 克隆表达 编码基因 表达载体构建
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TEM-1型β-内酰胺酶及CarO蛋白介导的耐舒巴坦鲍曼不动杆菌临床株耐药机制研究 被引量：3
7
作者 李楠 张豪杰 +5 位作者 王悦 祁萌 郭文学 王哲 祁伟 李国琪 《天津医药》 CAS 北大核心 2018年第3期246-250,共5页
目的研究TEM-1型β-内酰胺酶及Car O蛋白介导的鲍曼不动杆菌临床株对舒巴坦的耐药机制。方法将24株非重复鲍曼不动杆菌临床株通过琼脂稀释法分为舒巴坦非敏感组(18株)和敏感组(6株),用纸片扩散法(K-B)行药敏试验,PCR扩增bla_(TEM-1)和ca... 目的研究TEM-1型β-内酰胺酶及Car O蛋白介导的鲍曼不动杆菌临床株对舒巴坦的耐药机制。方法将24株非重复鲍曼不动杆菌临床株通过琼脂稀释法分为舒巴坦非敏感组(18株)和敏感组(6株),用纸片扩散法(K-B)行药敏试验,PCR扩增bla_(TEM-1)和car O基因,选取4株bla_(TEM-1)阳性菌株(A3、A5、1327、C1),对其扩增产物测序,BLAST软件分析;应用实时荧光定量RT-PCR技术检测2组菌株bla_(TEM-1)和car O基因m RNA转录情况。结果敏感组临床株对美罗培南、亚胺培南、头孢哌酮、环丙沙星、庆大霉素、氨苄西林耐药率分别为1/6、2/6、3/6、1/6、5/6、5/6;非敏感组分别为6/18、10/18、18/18、18/18、18/18。敏感组未检出bla_(TEM-1),非敏感组中16株临床株扩增出bla_(TEM-1);24株临床菌株全部扩增出car O基因。测序显示4株临床株bla_(TEM-1)基因均未出现有义突变;A3、A5、1327启动序列为P4,C1为P3。BlaTEM-1基因阳性菌株m RNA相对表达量与其对舒巴坦MIC值呈正相关(rs=0.551,P=0.027);car O基因m RNA相对表达在敏感组和非敏感组中无差异。结论临床分离鲍曼不动杆菌受试菌株耐药严重,其对舒巴坦的耐药机制与TEM-1型β-内酰胺酶高表达有关,而bla_(TEM-1)基因启动子调控可能是TEM-1型β-内酰胺酶高表达的原因之一。 展开更多
关键词 鲍氏不动杆菌 Β内酰胺酶类 微生物敏感性试验 carO基因 blatem-1基因 tem-1型β-内酰胺酶
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