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有限稀释法分选人骨肉瘤143-B干细胞及鉴定
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作者 毛德举 胡旭 +7 位作者 张莹 沈伟伟 陈武桂 陈培 何建荣 卓云云 张超 初同伟 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期16-23,共8页
目的:探索人骨肉瘤143-B干细胞的分选及鉴定方法。方法:采用有限稀释法对143-B细胞进行干细胞的分选,并检测所获取细胞表面干细胞标志物Nanog和OCT4的表达水平;对所获取的细胞进行成骨及成脂诱导分化,以检测其是否具有多向分化的潜能;... 目的:探索人骨肉瘤143-B干细胞的分选及鉴定方法。方法:采用有限稀释法对143-B细胞进行干细胞的分选,并检测所获取细胞表面干细胞标志物Nanog和OCT4的表达水平;对所获取的细胞进行成骨及成脂诱导分化,以检测其是否具有多向分化的潜能;动物成瘤实验鉴定细胞的成瘤能力,耐药实验检测顺铂对细胞半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)的影响。结果:分选获得的单克隆143-L细胞具有较高的成球能力;143-L细胞表面Nanog和OCT4 m RNA和蛋白的表达水平均明显高于亲代143-B细胞;对其进行成骨及成脂多向诱导分化成功。143-L细胞的成瘤能力及耐药能力(顺铂对143-B及143-L细胞的IC50值分别为0.83和2.51μg/m L)均明显高于143-B细胞。结论:有限稀释法可以用于143-B细胞干细胞的分选。 展开更多
关键词 骨肉瘤 肿瘤干细胞 肿瘤干细胞测定 143-b细胞
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外源性FrzB拮抗Wnt信号转导并抑制人骨肉瘤细胞143B增殖 被引量:2
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作者 司维柯 赵辰 +4 位作者 赵宸 李军 潘静 李招权 何通川 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期202-205,共4页
目的 Wnt信号异常激活与肿瘤发生有关,观察Wnt信号的天然拮抗剂FrzB对Wnt信号转导的影响和对肿瘤细胞增殖抑制。方法采用AdEasy系统构建重组腺病毒AdFrzB;卡那霉素抗性筛选、酶切鉴定及荧光显微镜和Western blot检测标记基因GFP和His表... 目的 Wnt信号异常激活与肿瘤发生有关,观察Wnt信号的天然拮抗剂FrzB对Wnt信号转导的影响和对肿瘤细胞增殖抑制。方法采用AdEasy系统构建重组腺病毒AdFrzB;卡那霉素抗性筛选、酶切鉴定及荧光显微镜和Western blot检测标记基因GFP和His表达等方法鉴定AdFrzB。AdFrzB与AdWnt3A共感染人骨肉瘤细胞株143B,AdGFP与AdWnt3A共感染为对照,β-catenin/Tcf荧光素酶反应系统检测FrzB对Wnt信号转导的影响;MTT实验检测FrzB对细胞增殖的抑制。结果卡那霉素抗性筛选及酶切鉴定获得pAdFrzB-His;检测到报告基因GFP和His表达,确证AdFrzB构建成功。FrzB抑制了Wnt信号转导并抑制了143B细胞增殖。结论 AdEasy系统有效构建了AdFrzB;外源性FrzB拮抗Wnt信号转导并抑制143B细胞增殖,FrzB可能是一种天然抗肿瘤因子。 展开更多
关键词 sFRP3/Frzb sFRPs WNT信号 143b细胞 重组腺病毒
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黄连解毒汤对骨肉瘤143B细胞的抑制作用及机制 被引量:1
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作者 温蕊嘉 董鑫 +6 位作者 王俊岩 李志鹏 彭力阳 丁寿常 李楠 麦泳欣 张锦芳 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期6823-6827,共5页
目的:探讨黄连解毒汤(HLJDD)对人骨肉瘤143B细胞的抑制作用及潜在机制。方法:SPF级大鼠随机平均分成4组,每组6只:HLJDD高、中、低剂量组分别给予HLJDD 6.30、3.15、1.58 g/kg灌胃,对照组给予等量水灌胃,均2次/d,连续灌胃1周,用于含药血... 目的:探讨黄连解毒汤(HLJDD)对人骨肉瘤143B细胞的抑制作用及潜在机制。方法:SPF级大鼠随机平均分成4组,每组6只:HLJDD高、中、低剂量组分别给予HLJDD 6.30、3.15、1.58 g/kg灌胃,对照组给予等量水灌胃,均2次/d,连续灌胃1周,用于含药血清的制备。人骨肉瘤143B细胞分别应用低、中、高剂量HLJDD含药血清进行干预,通过CCK-8试剂盒检测不同剂量HLJDD对骨肉瘤143B细胞的增殖影响;通过划痕愈合实验观察不同剂量HLJDD对骨肉瘤143B细胞迁移的作用;通过流式细胞技术观察不同剂量HLJDD含药血清培养骨肉瘤143B细胞后的凋亡变化;通过Western Blot检测不同剂量HLJDD含药血清对骨肉瘤143B细胞的增殖相关蛋白(PCNA)、迁移相关蛋白(MMP-9、vimentin)及凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3、caspase-3、Bax、Bcl-2)的影响,Western Blot进一步检测低、中、高剂量HLJDD含药血清对β-catenin及其相关信号分子c-Myc的影响。结果:与空白组和对照组比较,骨肉瘤143B细胞经不同剂量的HLJDD处理后,细胞的增殖率、迁移率均显著降低(P<0.05),中、高剂量组细胞凋亡率显著增加(P<0.05);HLJDD低、中、高剂量组均能够显著下调细胞增殖相关蛋白PCNA、迁移相关蛋白MMP-9(HLJDD低剂量组除外)、vimentin水平以及抗凋亡蛋白Bcl-2水平(P<0.05);此外,中、高剂量组HLJDD含药血清能够显著上调促凋亡蛋白Bax水平以及caspase凋亡通路中cleaved caspase-3水平(P<0.05),而caspase-3表达显著下调(P<0.05);β-catenin和c-Myc表达水平在HLJDD各剂量组均被显著下调(P<0.05)。结论:HLJDD促进了人骨肉瘤143B细胞的凋亡,抑制了人骨肉瘤143B细胞的增殖和迁移,从而起抗肿瘤作用,可能是通过抑制Wnt信号通路实现的。 展开更多
关键词 黄连解毒汤 骨肉瘤 143b细胞 WNT信号通路 机制 抗肿瘤
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土木香内酯对人骨肉瘤143B细胞恶性生物学行为的影响 被引量:1
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作者 杨春梅 张露露 +7 位作者 黄华坤 袁晓慧 张平 叶彩红 魏梦琪 黄衍然 罗小辑 罗进勇 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期377-384,共8页
目的:探讨土木香内酯(alantolactone,ALT)对人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其作用机制。方法:用不同浓度(0、4、6、8、10μmol/L)的ALT处理人骨肉瘤143B细胞后,用结晶紫染色法和MTT实验检测细胞的增殖能力,用划痕愈合... 目的:探讨土木香内酯(alantolactone,ALT)对人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其作用机制。方法:用不同浓度(0、4、6、8、10μmol/L)的ALT处理人骨肉瘤143B细胞后,用结晶紫染色法和MTT实验检测细胞的增殖能力,用划痕愈合实验、Transwell小室法、Hoechst33258染色法分别检测细胞的迁移、侵袭和凋亡水平,用qPCR及Western blotting(WB)分别检测细胞中E-cadherin和N-cadherin、caspase-3、cleaved-caspase-3(c-caspase-3)、PARP和cleaved-PARP(c-PARP)mRNA和蛋白表达水平。用荧光素酶报告基因实验检测T细胞淋巴因子或淋巴增强因子(T cell lymphocyte factor/lymphoid enhancer factor,TCF/LEF)转录活性,qPCR及WB检测β-catenin及MMP-7、c-Myc mRNA和蛋白表达水平。结果:ALT能够抑制骨肉瘤143B细胞的增殖、迁移和侵袭,同时促进细胞凋亡(P<0.05或P<0.01)。经8、10μmol/L ALT处理后,143B细胞中PARP m RNA和蛋白水平显著上调,c-caspase-3和c-PARP蛋白水平表达增加(均P<0.05);E-cadherin mRNA和蛋白水平表达上调、N-cadherin mRNA和蛋白表达水平下调,同时TCF/LEF转录活性明显下降(P<0.05或P<0.01),β-catenin、MMP-7和c-Myc mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.05或P<0.01)。结论:ALT通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性从而抑制人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡。 展开更多
关键词 土木香内酯 骨肉瘤 143b细胞 迁移 侵袭 凋亡 WNT/Β-CATENIN信号通路
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沉默MAT1基因通过SDF1-CXCR4信号通路抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移
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作者 巨啸晨 舒莉 +1 位作者 周玲 孙荣鑫 《医学研究杂志》 2020年第5期88-92,共5页
目的探讨沉默MAT1基因表达对骨肉瘤细胞增殖与迁移的影响,以及对SDF1-CXCR4信号通路的作用。方法qRT-PCR检测人成骨细胞hFOB1.19与骨肉瘤细胞株Saos-2、MG63、U2OS、143B中MAT1 mRNA的表达水平。将对数生长期143B细胞分为空白对照组(不... 目的探讨沉默MAT1基因表达对骨肉瘤细胞增殖与迁移的影响,以及对SDF1-CXCR4信号通路的作用。方法qRT-PCR检测人成骨细胞hFOB1.19与骨肉瘤细胞株Saos-2、MG63、U2OS、143B中MAT1 mRNA的表达水平。将对数生长期143B细胞分为空白对照组(不进行转染)、阴性对照组(转染阴性对照siRNA-NC)和siRNA-MAT1组(转染siRNA-MAT1),通过CCK-8、流式细胞术及Transwell小室法分别检测各组143B细胞增殖活力、细胞周期和迁移能力,Western blot法检测各组143B细胞中SDF1和CXCR4蛋白表达情况。结果与hFOB1.19细胞比较,骨肉瘤细胞株Saos-2、MG63、U2OS中MAT1 mRNA的表达水平明显升高(P<0.01),143B细胞中MAT1 mRNA的表达水平显著升高(P=0.000);siRNA-MAT1组143B细胞中MAT1 mRNA的表达水平较空白对照组(Blank组)和siRNA-NC组明显下降(P<0.01);与Blank组和siRNA-NC组比较,siRNA-MAT1组143B细胞增殖力明显降低,G 1期比例升高而S期比例降低,细胞迁移能力受到抑制,SDF1和CXCR4蛋白表达水平也明显下降(P<0.01)。结论沉默FOSL2基因的表达可抑制骨肉瘤细胞143B的增殖和迁移能力,机制可能与下调SDF1和CXCR4表达有关。 展开更多
关键词 骨肉瘤细胞 143b细胞 MAT1基因 增殖 迁移 SDF1-CXCR4
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丹参酮ⅡA对荷骨肉瘤裸鼠肿瘤生长及相关细胞因子水平的影响 被引量:6
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作者 董伯升 董亚飞 张静 《中华实用诊断与治疗杂志》 2020年第10期986-989,共4页
目的探讨丹参酮ⅡA对荷骨肉瘤裸鼠肿瘤生长及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-2(interleukin-2, IL-2)、可溶性血管黏附分子-1(soluble vascular cell adhesion molecule-1, sVCAM-1)水平的影响。方法 4... 目的探讨丹参酮ⅡA对荷骨肉瘤裸鼠肿瘤生长及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-2(interleukin-2, IL-2)、可溶性血管黏附分子-1(soluble vascular cell adhesion molecule-1, sVCAM-1)水平的影响。方法 40只裸鼠皮下接种人骨肉瘤143B细胞建立异种移植瘤模型后,随机分为低、中、高剂量干预组(分别腹腔注射丹参酮ⅡA 10、20、40 mg/kg)和模型组(腹腔注射生理盐水),每组10只,连续给予相应药物3周后,计算各组抑瘤率;采用ELISA法检测血清TNF-α、IL-2及sVCAM-1水平;采用Western blot法检测肿瘤组织β-catenin、Dkk-1蛋白相对表达量;采用实时荧光定量PCR法检测肿瘤组织β-catenin、Dkk-1 mRNA相对表达量。结果低、中、高剂量干预组抑瘤率(38.21%、46.19%、56.42%)依次增高(P<0.05);低、中、高剂量干预组血清TNF-α[(25.56±1.86)、(26.38±2.35)、(27.98±1.60)ng/L]、IL-2[(512.56±27.86)、(553.49±24.35)、(584.73±31.57)ng/L]高于模型组[(21.45±2.15)、(449.36±12.35)ng/L](P<0.05),sVCAM-1[(139.26±14.21)、(120.37±12.45)、(109.91±11.61)ng/L]低于模型组[(176.39±18.25)ng/L](P<0.05),肿瘤组织Dkk-1蛋白(0.47±0.05、0.59±0.02、0.78±0.04)及Dkk-1 mRNA相对表达量(0.43±0.05、0.57±0.06、0.81±0.05)高于模型组(0.36±0.03、0.34±0.03)(P<0.05),β-catenin蛋白(0.69±0.03、0.55±0.04、0.38±0.03)及β-catenin mRNA相对表达量(0.55±0.04、0.42±0.04、0.40±0.06)均低于模型组(0.81±0.05、0.68±0.05)(P<0.05);低、中、高剂量干预组血清IL-2水平及肿瘤组织Dkk-1蛋白和Dkk-1 mRNA相对表达量均依次升高(P<0.05),血清sVCAM-1水平及肿瘤组织β-catenin蛋白相对表达量均依次降低(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA可通过抑制Wnt/β-catenin信号活性,上调TNF-α、IL-2水平,下调sVCAM-1水平,发挥抗体内骨肉瘤活性,其机制可能与激活抑制因子Dkk-1有关。 展开更多
关键词 骨肉瘤 丹参酮ⅡA WNT/Β-CATENIN信号通路 人骨肉瘤143b细胞 肿瘤坏死因子-α 细胞介素-2 可溶性血管黏附分子-1 裸鼠
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miR-590-5p靶向调控STAT3基因对骨肉瘤143B细胞迁移和侵袭的影响 被引量:5
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作者 许国泰 周姣丽 +2 位作者 郭胜 朱小华 桂景雄 《蚌埠医学院学报》 CAS 2017年第9期1165-1169,共5页
目的:探讨miR-590-5p和信号转导与转录激活因子3(STAT3)基因在骨肉瘤143B细胞中的表达,探讨miR-590-5p对STAT3基因的靶向作用及其对143B细胞迁移和侵袭的影响。方法:运用生物信息学方法对miR-590-5p和STAT3基因的靶向配对关系进行预测,... 目的:探讨miR-590-5p和信号转导与转录激活因子3(STAT3)基因在骨肉瘤143B细胞中的表达,探讨miR-590-5p对STAT3基因的靶向作用及其对143B细胞迁移和侵袭的影响。方法:运用生物信息学方法对miR-590-5p和STAT3基因的靶向配对关系进行预测,采用荧光素酶报告系统鉴定;脂质体2000转染miR-590-5p模拟物以及干扰STAT3的siRNA后,real-time PCR检测miR-590-5p和STAT3 mRNA在癌细胞中的表达,Western blotting检测STAT3蛋白在癌细胞中的表达,细胞划痕实验检测癌细胞的迁移情况以及Transwell小室检测癌细胞体外的侵袭性。结果:生物信息学软件Target Scan和miRanda显示miR-590-5p和STAT3基因二者靶向配对良好,荧光素酶报告系统鉴定发现miR-590-5p能够抑制STAT3 mRNA表达。Realtime PCR和Western blotting检测结果均表明过表达miR-590-5p能够降低STAT3 mRNA和蛋白的表达。细胞划痕实验和Transwell实验发现过表达miR-590-5p能够分别抑制143B细胞的迁移和侵袭。结论:miR-590-5p通过负性靶向调控骨肉瘤143B细胞中STAT3基因的表达,进而抑制癌细胞的迁移和侵袭。 展开更多
关键词 骨肿瘤 微小RNA 信号转导与转录激活因子3 骨肉瘤143b细胞
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miR-144-3p靶向调控跨膜蛋白16A基因抑制骨肉瘤143B细胞的增殖和侵袭实验 被引量:3
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作者 王涛 田鹤 穆长征 《解放军医学院学报》 CAS 2017年第5期467-470,480,共5页
目的阐明骨肉瘤143B细胞中miR-144-3p与跨膜蛋白16A(transmembrane protein 16,TMEM16A)的表达关系,明确miR-144-3p与143B细胞增殖和侵袭的关系。方法预测miR-144-3p和TMEM16A基因的互补配对关系,转染miR-144-3p模拟物后,Real-time PCR... 目的阐明骨肉瘤143B细胞中miR-144-3p与跨膜蛋白16A(transmembrane protein 16,TMEM16A)的表达关系,明确miR-144-3p与143B细胞增殖和侵袭的关系。方法预测miR-144-3p和TMEM16A基因的互补配对关系,转染miR-144-3p模拟物后,Real-time PCR检测各组癌细胞中miR-144-3p和TMEM16A m RNA的相对表达水平,Western blot检测各组癌细胞中TMEM16A蛋白的相对表达,MTT法检测各组癌细胞的增殖,Transwell检测各组癌细胞体外的侵袭情况。结果 Target Scan和miRanda均显示miR-144-3p与TMEM16A基因互补配对较好。Real-time PCR和Western blot检测结果表明miR-144-3p的过表达能够降低TMEM16A m RNA和蛋白的相对表达水平。MTT法和Transwell实验发现miR-144-3p的过表达能够抑制143B细胞的增殖和侵袭。结论 miR-144-3p通过下调骨肉瘤143B细胞中TMEM16A的表达水平进而抑制癌细胞的增殖和侵袭。 展开更多
关键词 骨肉瘤143b细胞 微小RNA 跨膜蛋白16A
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蛋白激酶C在人骨肉瘤细胞多药耐药中的作用及机制 被引量:1
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作者 陈渝 邓忠良 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第18期1900-1903,共4页
目的研究蛋白激酶C(PKC)主要亚型在人骨肉瘤143B细胞中的表达情况及其与143B细胞耐药的关系。方法采用Western blot法检测PKC主要亚型α、β和γ磷酸化形式p-PKCα、p-PKCβ、p-PKCγ和多药耐药蛋白-1(mutidrugresistance protein-1,MDR... 目的研究蛋白激酶C(PKC)主要亚型在人骨肉瘤143B细胞中的表达情况及其与143B细胞耐药的关系。方法采用Western blot法检测PKC主要亚型α、β和γ磷酸化形式p-PKCα、p-PKCβ、p-PKCγ和多药耐药蛋白-1(mutidrugresistance protein-1,MDR-1)在人骨肉瘤143B/WT野生型细胞和143B/ADM耐药细胞中的表达水平,通过PKC特异性抑制剂staurosporine抑制PKC对MDR-1蛋白表达的影响;CCK法检测药物敏感性;荧光分光光度计法检测细胞内阿霉素浓度,流式细胞术检测细胞凋亡水平和细胞外排罗丹明水平。结果相对于143B/WT野生型细胞,143B/ADM耐药细胞中p-PKCα表达显著增加,而p-PKCβ和p-PKCγ表达则无明显差异,同时143B/ADM耐药细胞中MDR-1表达也明显上调;143B/ADM耐药细胞对阿霉素的耐药指数为15.7,而加入staurosporine抑制143B/ADM细胞PKC表达后,细胞耐药指数下降为5.5(P<0.01);143B/ADM耐药细胞接受ADM处理后,细胞凋亡率为(28.41±4.33)%,而其PKC表达被抑制后,细胞内阿霉素浓度增加的同时(P<0.01),细胞凋亡率增加为(70.63±4.80)%(P<0.01),外排罗丹明减少,同时MDR-1蛋白表达明显下调。结论人骨肉瘤耐药细胞中过表达的PKCα可通过调控MDR-1参与骨肉瘤耐药。 展开更多
关键词 人骨肉瘤143b细胞 阿霉素 蛋白激酶C 多药耐药蛋白-1
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