本试验基于获得高效纤维素优势分解菌的目的,通过分离纯化初步得到30株菌株,利用刚果红染色法初筛共得到14株纤维素分解菌,并通过滤纸条崩解实验进一步进行筛选得到5株效果较好的纤维素分解菌,通过发酵产酶利用DNS显色法测定CMC酶活力和...本试验基于获得高效纤维素优势分解菌的目的,通过分离纯化初步得到30株菌株,利用刚果红染色法初筛共得到14株纤维素分解菌,并通过滤纸条崩解实验进一步进行筛选得到5株效果较好的纤维素分解菌,通过发酵产酶利用DNS显色法测定CMC酶活力和FPA酶活力最终确定了4株优势纤维素分解菌,通过测定4株菌株的羧甲基纤维素酶(CMCase)、滤纸酶(FPA)以及β-葡萄糖苷酶(β-Gase)活,验证4株纤维素优势分解菌的产酶能力,并分别命名为X-1、X-6、X-7和X-11,并将该4株优势纤维素分解菌应用于秸秆的液态发酵,其对秸秆的降解率较自然降解相比,降解率分别提高了31.92%、40.15%、35.29%和39.98%。对4株优势菌株进行了分子鉴定,根据16S r DNA序列比对结果表明,菌株X-1、X-7和X-11均为粪产碱杆菌;菌株X-6属于解糖假苍白杆菌。展开更多
讨论了大肠杆菌 L -天冬酰胺酶发酵液酶活力的影响因素 ,筛选了大肠杆菌产酶的优化条件 .发现了发酵液酶活力的最适 p H随缓冲介质的变化而变化 ;甘氨酸介质中 ,p H 6 .5 0～ 9.5 0均适于酶活测定 ,且 p H 8.0 0时酶活最高 ;硼酸、Tris...讨论了大肠杆菌 L -天冬酰胺酶发酵液酶活力的影响因素 ,筛选了大肠杆菌产酶的优化条件 .发现了发酵液酶活力的最适 p H随缓冲介质的变化而变化 ;甘氨酸介质中 ,p H 6 .5 0～ 9.5 0均适于酶活测定 ,且 p H 8.0 0时酶活最高 ;硼酸、Tris、磷酸介质中 ,在 p H 8.5 0时 ,酶活力依次下降 ;酶反应的适宜温度 4 0～ 5 0℃ .对菌株培养的研究表明 ,葡萄糖对产酶有抑制作用 ,适当提高摇床转速可使发酵液酶活力由原来的 136 U /m L增至 14 5 U /m L .在确定的最优培养条件 37℃ ,p H 7.0 0 ,2 5 0 r/min下 ,产酶稳定期可持续 12 h.展开更多
阿特拉津氯水解酶(AtzA)是一种对除草剂的生物降解和环境净化有重要意义的酶.采用定点诱变方法将假单胞菌ADP株的atzA基因第832位碱基(鸟嘌呤)诱变成腺嘌吟,然后将其插入表达载体pET21b(+),并在大肠杆菌中表达.表达的蛋白特性研究表明:A...阿特拉津氯水解酶(AtzA)是一种对除草剂的生物降解和环境净化有重要意义的酶.采用定点诱变方法将假单胞菌ADP株的atzA基因第832位碱基(鸟嘌呤)诱变成腺嘌吟,然后将其插入表达载体pET21b(+),并在大肠杆菌中表达.表达的蛋白特性研究表明:AtzA或AtzA-NK融合蛋白系水溶性蛋白,很容易通过Ni-NTA Magnetic Agarose Beads分离纯化.采用阿特拉津脱氯反应产生HCl而引起pH指示剂颜色改变的测定方法能方便地对其酶活力进行定量.酶活力结果表明,突变酶的比活力与假单胞菌ADP菌株的AtzA相比没有明显改变,暗示突变位点(第278位缬氨酸突变成甲硫氨酸)不是酶的活性中心或底物结合部位.展开更多
以筛选与鉴定尉犁县黑湖产淀粉酶细菌,并对筛选出的细菌进行产酶条件优化为研究目的,从43株细菌中筛选出淀粉酶高产菌株HM-22,并对其进行了菌株形态学鉴定、16S r DNA分子鉴定以及产酶条件优化。从尉犁县黑湖采样的30个水、土和泥样样...以筛选与鉴定尉犁县黑湖产淀粉酶细菌,并对筛选出的细菌进行产酶条件优化为研究目的,从43株细菌中筛选出淀粉酶高产菌株HM-22,并对其进行了菌株形态学鉴定、16S r DNA分子鉴定以及产酶条件优化。从尉犁县黑湖采样的30个水、土和泥样样品中分离筛选43株细菌,从中筛选出14株产淀粉酶的菌株,采用Yoo改良法对产透明圈较大的菌株进行酶活力测定,从中筛选出了一株产酶活性较高的菌株HM-22。经革兰氏染色、菌落形态观察、生理生化检测和16S r DNA序列比对鉴定该菌与Bacillus tequilensis的相似性为99.8%,属于芽孢杆菌属。对菌株HM-22产酶条件进行初步优化确定其产酶的最佳条件是:该菌产淀粉酶最适温度为40℃,最适碳源为可溶性淀粉,最适氮源为牛肉膏,最适反应pH为6.0,最适产酶培养时间为24 h。优化后菌株HM-22的酶活力从最初的的酶活力122.45 U/m L达到147.53 U/m L,酶活力提高了17%。该研究为从新疆盐湖细菌中筛选淀粉酶活力较高的菌种资源及应用提供了理论依据和参考。展开更多
文摘本试验基于获得高效纤维素优势分解菌的目的,通过分离纯化初步得到30株菌株,利用刚果红染色法初筛共得到14株纤维素分解菌,并通过滤纸条崩解实验进一步进行筛选得到5株效果较好的纤维素分解菌,通过发酵产酶利用DNS显色法测定CMC酶活力和FPA酶活力最终确定了4株优势纤维素分解菌,通过测定4株菌株的羧甲基纤维素酶(CMCase)、滤纸酶(FPA)以及β-葡萄糖苷酶(β-Gase)活,验证4株纤维素优势分解菌的产酶能力,并分别命名为X-1、X-6、X-7和X-11,并将该4株优势纤维素分解菌应用于秸秆的液态发酵,其对秸秆的降解率较自然降解相比,降解率分别提高了31.92%、40.15%、35.29%和39.98%。对4株优势菌株进行了分子鉴定,根据16S r DNA序列比对结果表明,菌株X-1、X-7和X-11均为粪产碱杆菌;菌株X-6属于解糖假苍白杆菌。
文摘讨论了大肠杆菌 L -天冬酰胺酶发酵液酶活力的影响因素 ,筛选了大肠杆菌产酶的优化条件 .发现了发酵液酶活力的最适 p H随缓冲介质的变化而变化 ;甘氨酸介质中 ,p H 6 .5 0～ 9.5 0均适于酶活测定 ,且 p H 8.0 0时酶活最高 ;硼酸、Tris、磷酸介质中 ,在 p H 8.5 0时 ,酶活力依次下降 ;酶反应的适宜温度 4 0～ 5 0℃ .对菌株培养的研究表明 ,葡萄糖对产酶有抑制作用 ,适当提高摇床转速可使发酵液酶活力由原来的 136 U /m L增至 14 5 U /m L .在确定的最优培养条件 37℃ ,p H 7.0 0 ,2 5 0 r/min下 ,产酶稳定期可持续 12 h.
文摘阿特拉津氯水解酶(AtzA)是一种对除草剂的生物降解和环境净化有重要意义的酶.采用定点诱变方法将假单胞菌ADP株的atzA基因第832位碱基(鸟嘌呤)诱变成腺嘌吟,然后将其插入表达载体pET21b(+),并在大肠杆菌中表达.表达的蛋白特性研究表明:AtzA或AtzA-NK融合蛋白系水溶性蛋白,很容易通过Ni-NTA Magnetic Agarose Beads分离纯化.采用阿特拉津脱氯反应产生HCl而引起pH指示剂颜色改变的测定方法能方便地对其酶活力进行定量.酶活力结果表明,突变酶的比活力与假单胞菌ADP菌株的AtzA相比没有明显改变,暗示突变位点(第278位缬氨酸突变成甲硫氨酸)不是酶的活性中心或底物结合部位.
