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透明颤菌血红蛋白在肉桂地链霉菌中的表达对其细胞生长及抗生素合成的影响 被引量：17
1
作者 文莹 宋渊 李季伦 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期24-28,共5页
肉桂地链霉菌 (S .cinnamonensis)是莫能菌素 (Monensin)的产生菌。大肠杆菌 链霉菌穿梭表达载体pHZ12 5 2中的透明颤菌血红蛋白基因 (vhb)位于硫链丝菌素诱导启动子PtipA之下 ,它在肉桂地链霉菌中的结构不稳定 ,发生了重组缺失 ,缺失... 肉桂地链霉菌 (S .cinnamonensis)是莫能菌素 (Monensin)的产生菌。大肠杆菌 链霉菌穿梭表达载体pHZ12 5 2中的透明颤菌血红蛋白基因 (vhb)位于硫链丝菌素诱导启动子PtipA之下 ,它在肉桂地链霉菌中的结构不稳定 ,发生了重组缺失 ,缺失的片段包括大肠杆菌质粒部分和vhb基因。但来自阿维链霉菌 (S .avermitilis)中缺失了大肠杆菌质粒部分却保留了完整的vhb基因及tipA启动子的 pHZ12 5 2 ,可在肉桂地链霉菌中稳定复制 ,不再发生缺失 ,经硫链丝菌素诱导表达出了有生物活性的VHb蛋白。摇瓶发酵实验证明 ,VHb蛋白在氧限条件下可明显促进肉桂地链霉菌的菌体生长和抗生素合成。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白 肉桂地链霉菌 vhB基因表达 抗生素 合成
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CO差光谱法分析重组大肠杆菌中的透明颤菌血红蛋白 被引量：12
2
作者 于慧敏 史悦 +1 位作者 沈忠耀 杨胜利 《清华大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第5期615-618,共4页
为检测产聚 β-羟基丁酸酯 (PHB)的重组大肠杆菌VG1(p TU14)中表达的透明颤菌血红蛋白 (VHb) ,建立了改进的 CO差光谱法。结果表明 ,PHB对 VHb的检测有较严重的干扰。 VG1(p TU14)的全细胞悬浊液经过 4次冻融、低速离心和过量的 Na2 S2... 为检测产聚 β-羟基丁酸酯 (PHB)的重组大肠杆菌VG1(p TU14)中表达的透明颤菌血红蛋白 (VHb) ,建立了改进的 CO差光谱法。结果表明 ,PHB对 VHb的检测有较严重的干扰。 VG1(p TU14)的全细胞悬浊液经过 4次冻融、低速离心和过量的 Na2 S2 O4还原后 ,在试样端通入 CO进行3m in络合反应并在黑暗条件下静置 5 min,最后进行 VHb的 CO差光谱分析。当菌浓小于 2 5 m g/ m L缓冲液时 ,其定量关系符合 L am ber- Beer定律 ,可以准确地定量分析 展开更多
关键词 CO差光谱法 重组大肠杆菌 透明颤菌血红蛋白 聚Β-羟基丁酸酯 定量分析 Lamber-Beer定律 基因表达
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透明颤菌血红蛋白基因vgb和腈水解酶基因bxn在毕赤酵母中的表达研究 被引量：9
3
作者 王清路 张锐 +2 位作者 倪万潮 陈毓荃 郭三堆 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期730-735,共6页
为获得高效表达外源蛋白的Pichiapastoris菌株而设计了重组质粒pPIC9K_vgbbxn ,其中透明颤菌血红蛋白基因vgb胞内表达以提高菌体的发酵密度 ,腈水解酶基因bxn分泌表达。转化GS115菌株后 ,通过PCR、SDS_PAGE检测证实两基因已经整合进酵... 为获得高效表达外源蛋白的Pichiapastoris菌株而设计了重组质粒pPIC9K_vgbbxn ,其中透明颤菌血红蛋白基因vgb胞内表达以提高菌体的发酵密度 ,腈水解酶基因bxn分泌表达。转化GS115菌株后 ,通过PCR、SDS_PAGE检测证实两基因已经整合进酵母基因组且能高效表达 ,以及用准确的蛋白活性测定方法成功地检测到二者所表达的产物均具有正常的活性。摇瓶发酵实验证明 。 展开更多
关键词 毕赤酵母 分泌型表达载体 腈水解酶 透明颤菌血红蛋白
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顶头孢霉pcbAB-pcbC双向启动子区域的克隆与应用 被引量：9
4
作者 张丕燕 朱春宝 朱宝泉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期255-257,共3页
用PCR方法从丝状真菌顶头孢霉中克隆出全长 1 3kb的pcbAB_pcbC双向启动子DNA片段 ,通过转化子对博莱霉素的抗性证明了该启动子在顶头孢霉中的双向启动功能。另外 ,利用所克隆的pcbAB_pcbC双向启动子构建了一个用于顶头孢霉转化的质粒pYG... 用PCR方法从丝状真菌顶头孢霉中克隆出全长 1 3kb的pcbAB_pcbC双向启动子DNA片段 ,通过转化子对博莱霉素的抗性证明了该启动子在顶头孢霉中的双向启动功能。另外 ,利用所克隆的pcbAB_pcbC双向启动子构建了一个用于顶头孢霉转化的质粒pYG13,并成功地将该质粒转化入顶头孢霉。pYG13含有博莱霉素抗性基因和透明颤菌血红蛋白基因 (vgb) ,Southern杂交和CO结合实验分析显示vgb整合到顶头孢霉的基因组DNA中并表达了有活性的透明颤菌血红蛋白。 展开更多
关键词 顶头孢霉 双向启动子 DNA片段 转化子 克隆 博莱霉素 透明颤菌血红蛋白 抗性 基因
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毕赤酵母中表达透明颤菌血红蛋白提高重组脂肪酶的表达 被引量：7
5
作者 汪小锋 孙永川 +4 位作者 申旭光 柯锋 徐莉 刘云 闫云君 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1755-1764,共10页
解脂耶氏酵母胞外脂肪酶Lip2(YlLip2)是一种具有广泛应用前景的工业酶。为了改善高密度发酵生产YlLip2过程中的溶氧限制,提高YlLip2的表达量,将YlLip2基因lip2和透明颤菌血红蛋白(VHb)基因vgb分别置于AOX1启动子和PsADH2启动子的调控之... 解脂耶氏酵母胞外脂肪酶Lip2(YlLip2)是一种具有广泛应用前景的工业酶。为了改善高密度发酵生产YlLip2过程中的溶氧限制,提高YlLip2的表达量,将YlLip2基因lip2和透明颤菌血红蛋白(VHb)基因vgb分别置于AOX1启动子和PsADH2启动子的调控之下,进行YlLip2和VHb在毕赤酵母中的共表达。PsADH2启动子来源于树干毕赤酵母Pichia stipitis,在低氧条件下能被激活。SDS-PAGE和CO-差式光谱分析表明,YlLip2和VHb在重组菌中成功实现了共表达。在氧限制性条件下,VHb表达的细胞(VHb+,GS115/9Klip2-pZPVT)与对照细胞(VHb?,GS115/9Klip2)相比,摇瓶和10 L发酵罐中YlLip2表达量分别提高了25%和83%。此外,在低氧条件下,VHb+细胞在10 L发酵罐中的生物量也比VHb?细胞高。文中也获得了一株表达了VHb的并携带有多个lip2基因拷贝的克隆子GS115/9Klip2-pZPVTlip2 49#,在低氧条件下,该克隆子在10 L发酵罐中的最高脂肪酶水解活力达33 900 U/mL。因此,在毕赤酵母中用PsADH2启动子表达VHb,同时增加lip2基因的拷贝数是提高YlLip2表达量的一种有效策略。 展开更多
关键词 脂肪酶 透明颤菌血红蛋白 PsADH2启动子 解脂耶氏酵母 毕赤酵母 表达
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透明颤菌血红蛋白的研究及应用 被引量：4
6
作者 周煜 刘涤 胡之璧 《药物生物技术》 CAS CSCD 2000年第4期251-253,共3页
透明颤菌血红蛋白是来自专性好氧的革兰氏阴性细菌透明颤菌属的一种同源双亚基血红蛋白 ,其基因的转录受生境中氧浓度的调节。当这种蛋白在多种原核及真核生物中表达时 ,具有促进生长和提高各种有用代谢产物的作用。
关键词 透明颤菌血红蛋白 基因克隆 转基因
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透明颤菌血红蛋白基因在产黄青霉中的克隆与表达 被引量：5
7
作者 李兵 李术娜 +2 位作者 周艳芬 赵晓瑜 朱宝成 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期400-402,共3页
将透明颤菌血红蛋白基因(vgb)克隆至质粒载体pMK4中,构建成表达载体pMK4-LV,并将表达载体pMK4-LV转化青霉素生产菌株———产黄青霉的原生质体,获得转化子。经发酵实验表明,vgb的表达可以使产黄青霉的生物量提高9.76%,青霉素的产量提高9... 将透明颤菌血红蛋白基因(vgb)克隆至质粒载体pMK4中,构建成表达载体pMK4-LV,并将表达载体pMK4-LV转化青霉素生产菌株———产黄青霉的原生质体,获得转化子。经发酵实验表明,vgb的表达可以使产黄青霉的生物量提高9.76%,青霉素的产量提高9.68%。 展开更多
关键词 产黄青霉 透明颤菌血红蛋白 原生质体 转化 效价
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透明颤菌血红蛋白基因的克隆与表达 被引量：5
8
作者 孙艳 郑煜焱 +2 位作者 王洪军 张志强 王立强 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期436-437,共2页
目的　用野生型透明颤菌菌株中获得的血红蛋白基因 ,构建透明血红蛋白 (VHb)重组表达质粒 ,并在大肠埃希菌 (E .cloi)中实现表达。方法　将环境中筛选出的透明颤菌菌株 ,直接通过聚合酶链式反应 (PCR)克隆血红蛋白基因 ,以质粒pBluescri... 目的　用野生型透明颤菌菌株中获得的血红蛋白基因 ,构建透明血红蛋白 (VHb)重组表达质粒 ,并在大肠埃希菌 (E .cloi)中实现表达。方法　将环境中筛选出的透明颤菌菌株 ,直接通过聚合酶链式反应 (PCR)克隆血红蛋白基因 ,以质粒pBluescriptSK为载体。构建透明颤菌血红蛋白重组表达质粒 pBlueV ,并转化到大肠埃希菌DH - 5a中 ,使用CO示差光谱、十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳 (SDS -PAGE)电泳和蛋白印记 (westernblot)进行分析。结果　PCR扩增的产物透明颤菌血红蛋白基因 (vgb)在琼脂糖凝胶电泳图 0 . 5kb处显示 1条亮带 ,测序结果证实与已发表的vgb序列的同源性 10 0 %。经质粒转化的大肠埃希菌菌株在 16kb处有 1条特征蛋白带 ,而未经质粒转化的菌株则没有。结论　成功构建透明颤菌血红蛋白重组质粒 ,并在大肠埃希菌中得到表达。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白 大肠埃希菌 克隆 表达
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透明颤菌血红蛋白对黄芪甲苷生物合成的调控作用 被引量：6
9
作者 王子艳 胡之璧 王峥涛 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期355-360,共6页
为了研究透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin,VHb)对黄芪甲苷生物合成的调控作用,本文运用农杆菌介导法,将透明颤菌血红蛋白基因(Vitreoscilla hemoglobin gene,vgb)导入黄芪毛状根中,经PCR特征性引物扩增得到54个转基因株系。So... 为了研究透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin,VHb)对黄芪甲苷生物合成的调控作用,本文运用农杆菌介导法,将透明颤菌血红蛋白基因(Vitreoscilla hemoglobin gene,vgb)导入黄芪毛状根中,经PCR特征性引物扩增得到54个转基因株系。Southern blot分析,证明vgb基因已经整合到转基因黄芪毛状根基因组中。RT-PCR分析结果表明,vgb基因在转录水平获得表达。转基因黄芪毛状根培养15天,其生长量和增长倍数皆比非转基因黄芪毛状根高;黄芪甲苷含量测定结果显示,转基因黄芪毛状根黄芪甲苷含量是非转基因黄芪毛状根的5～6倍,是山西产黄芪药材的10～12倍。研究结果表明,vgb基因的表达促进了转基因毛状根的生长,提高了黄芪甲苷含量。 展开更多
关键词 黄芪 透明颤菌血红蛋白 黄芪甲苷 生物合成
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D-氨基酸氧化酶与麦芽糖结合蛋白和透明颤菌血红蛋白的融合表达 被引量：5
10
作者 于慧敏 马现锋 +2 位作者 罗晖 文程 沈忠耀 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1004-1009,共6页
D-氨基酸氧化酶(DAAO)是一种重要的工业酶。为了进一步提高DAAO在大肠杆菌中的可溶性和活性表达,分别构建了麦芽糖结合蛋白(MBP)和透明颤菌血红蛋白与三角酵母DAAO(TvDAAO)的N-端融合蛋白。其中,MBP融合蛋白MBP-TvDAAO在组成型(JM105/pM... D-氨基酸氧化酶(DAAO)是一种重要的工业酶。为了进一步提高DAAO在大肠杆菌中的可溶性和活性表达,分别构建了麦芽糖结合蛋白(MBP)和透明颤菌血红蛋白与三角酵母DAAO(TvDAAO)的N-端融合蛋白。其中,MBP融合蛋白MBP-TvDAAO在组成型(JM105/pMKC-DAAO)和诱导型菌株(JM105/pMKL-DAAO)中表达时,目标蛋白的可溶性表达量分别达到全细胞蛋白表达量的28%以上和17%左右,比无MBP融合的对照菌株BL21(DE3)/pET-DAAO分别提高3.7和1.8倍;但其酶活水平显著下降。VHb融合蛋白VHb-TvDAAO在重组菌BL21(DE3)/pET-VDAAO中摇瓶诱导表达时,DAAO酶活达到了3.24u/mL,比对照菌株BL21(DE3)/pET-DAAO提高了约90%。 展开更多
关键词 D-氨基酸氧化酶 大肠杆菌麦芽糖结合蛋白 透明颤菌血红蛋白 融合表达
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透明颤菌血红蛋白的分离纯化与分析检测 被引量：2
11
作者 于慧敏 史悦 沈忠耀 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第4期94-98,共5页
透明颤菌血红蛋白 (Vitreoscillahemoglobin ,VHb)是惟一一种研究得较为透彻的原核生物氧结合蛋白血红蛋白。它支持细胞在微氧条件下进行好氧生长 ,克服发酵过程中的溶氧限制 ,因此在需氧微生物发酵工业中具有重要的应用价值。简述了VH... 透明颤菌血红蛋白 (Vitreoscillahemoglobin ,VHb)是惟一一种研究得较为透彻的原核生物氧结合蛋白血红蛋白。它支持细胞在微氧条件下进行好氧生长 ,克服发酵过程中的溶氧限制 ,因此在需氧微生物发酵工业中具有重要的应用价值。简述了VHb的分离纯化过程 ,综述了VHb的各种定性检测和定量分析方法 ,比较了各种检测分析方法的优缺点和适用性。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白 分离 纯化 定性检测 定量分析 改进一氧化碳差光谱法 发酵工业 临界氧浓度
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在链霉菌中表达透明颤菌血红蛋白需要异源启动子 被引量：4
12
作者 崔风文 杨胜利 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期91-95,共5页
构建了质粒ｐＩＪ４０８３Ｍｐｒｏ、ｐＩＪ４０８３ｐｒｏ、ｐＷＬＤ８和ｐＦＷ３。在浅青紫链霉菌ＴＫ２４中，启动子探针质粒ｐＩＪ４０８３上的邻苯二酚双加氧酶基因（ｘｙｌＥ）不能被透明颤菌血红蛋白基因（ｖｇｂ）的启动子带... 构建了质粒ｐＩＪ４０８３Ｍｐｒｏ、ｐＩＪ４０８３ｐｒｏ、ｐＷＬＤ８和ｐＦＷ３。在浅青紫链霉菌ＴＫ２４中，启动子探针质粒ｐＩＪ４０８３上的邻苯二酚双加氧酶基因（ｘｙｌＥ）不能被透明颤菌血红蛋白基因（ｖｇｂ）的启动子带动转录，表明ｖｇｂ启动子在链霉菌中无作用。ＴＫ２４中，ｐＷＬＤ８和ｐＦＷ３均能表达透明颤菌血红蛋白（ＶＨｂ），ｐＷＬＤ８上可能是由Ｐｌａｃ带动ｖｇｂ的表达；ｐＦＷ３上ｖｇｂ基因去掉了非必要部分，克隆在ＰＣＲ扩增得到的ｇｌｎＡ启动子下游，两者连成嵌合基因。 展开更多
关键词 浅青紫链霉菌 透明颤菌血红蛋白 异源表达 供氧
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透明颤菌血红蛋白的研究与发展前景 被引量：3
13
作者 凌永胜 杜娟 +2 位作者 肖宇 胡晓倩 林忠平 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1-7,共7页
在缺氧条件下,透明颤菌血红蛋白(VHb)通过促进氧输送增强呼吸和能量代谢,并在各种宿主中表达,显示出改善增长,蛋白质分泌,代谢产物的生产力和提高宿主抗逆性等的生理效应,从而使蛋白质在代谢工程尤其在优化植物代谢中应用前景广阔。概括... 在缺氧条件下,透明颤菌血红蛋白(VHb)通过促进氧输送增强呼吸和能量代谢,并在各种宿主中表达,显示出改善增长,蛋白质分泌,代谢产物的生产力和提高宿主抗逆性等的生理效应,从而使蛋白质在代谢工程尤其在优化植物代谢中应用前景广阔。概括了VHb在生物技术工业的诸多研究领域中的应用潜力,探讨VHb功能的细胞机制,并显示出各领域所采取的各种方法。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白 代谢工程 植物生物技术
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透明颤菌血红蛋白的研究进展及其在发酵工业中的应用 被引量：4
14
作者 裴海生 杨光 +2 位作者 李春 张刚 曹竹安 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期133-138,共6页
透明颤菌血红蛋白(vitreoscilla hemoglobin,VHb)是20世纪70年代后期发现的一种血红蛋白,该蛋白质能使透明颤菌在低氧的环境下生存,并保持较高的生长速率。随着其作用机理的深入研究,VHb在生物工程领域的应用越来越广泛。总结了近年来VH... 透明颤菌血红蛋白(vitreoscilla hemoglobin,VHb)是20世纪70年代后期发现的一种血红蛋白,该蛋白质能使透明颤菌在低氧的环境下生存,并保持较高的生长速率。随着其作用机理的深入研究,VHb在生物工程领域的应用越来越广泛。总结了近年来VHb的研究进展,包括蛋白结构、细胞定位、基因改组、作用机理等方面的研究,并概述了其在微生物发酵工业中的应用。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白 微生物发酵 DNA改组 抗生素
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从透明颤菌血红蛋白谈到植物缺氧与转基因作物 被引量：2
15
作者 焦瑞身 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期381-386,共6页
扼要介绍透明颤菌血红蛋白基因在多种微生物的表达、调节和生理功能 ,特别是在生物工程方面可能的应用。但最值得重视的是这一基因在烟草中的表达及其生理效应 ,它为我们提出一个重要的问题 ,就是植物是否缺氧 。
关键词 透明颤菌血红蛋白 植物缺氧 转基因作物 异源宿主 表达
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共表达透明颤菌血红蛋白提高脂肪酶在毕赤酵母中的表达 被引量：4
16
作者 卢俊裕 林影 +1 位作者 梁书利 叶燕锐 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2014年第6期110-115,共6页
为了克服巴斯德毕赤酵母高密度发酵过程中的溶氧限制,提高外源蛋白的表达量,本文以启动子YPT介导透明颤菌血红蛋白(VHb)在培养过程中组成型表达。同时以启动子AOX1介导的南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)基因作为报告基因,使CALB在甲醇诱导阶... 为了克服巴斯德毕赤酵母高密度发酵过程中的溶氧限制,提高外源蛋白的表达量,本文以启动子YPT介导透明颤菌血红蛋白(VHb)在培养过程中组成型表达。同时以启动子AOX1介导的南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)基因作为报告基因,使CALB在甲醇诱导阶段表达。另外,还将绿色荧光蛋白在过氧化物表面表达,将红色荧光蛋白在过氧化物基质中表达以检测信号肽能否定位在相应的位置。最后,将VHb分别在过氧化物酶体表面和基质两个位置表达,以观察表达位置的不同所产生的影响。通过SDS-PAGE和Western Blot分析表明,CALB和VHb在重组菌中成功实现了共表达。在限氧条件下,重组菌株GS115/ExVHb、GS115/VHbSKL的外源蛋白CALB的表达量比对照菌株GS115/CALB分别提高了27.57%和20.52%。这说明VHb与外源基因共表达可以改善酵母在发酵过程中的摄氧情况,提高外源蛋白的表达量。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白 脂肪酶 氧限制 毕赤酵母 分泌表达
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共表达透明颤菌血红蛋白对毕赤酵母产β-甘露聚糖酶发酵过程的影响 被引量：3
17
作者 张晓龙 肖静 +3 位作者 王瑞明 汪俊卿 王兴吉 王正祥 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期193-199,共7页
为了改善高密度发酵生产β-甘露聚糖酶过程中的溶氧限制,提高β-甘露聚糖酶产量,将VHb和β-甘露聚糖酶基因置于AOX1启动子调控之下,进行VHb和β-甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的共表达。经密码子优化合成VHb基因,插入表达载体p PICZαA,... 为了改善高密度发酵生产β-甘露聚糖酶过程中的溶氧限制,提高β-甘露聚糖酶产量,将VHb和β-甘露聚糖酶基因置于AOX1启动子调控之下,进行VHb和β-甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的共表达。经密码子优化合成VHb基因,插入表达载体p PICZαA,整合到β-甘露聚糖酶工程菌中,通过G418和Zeocin抗性筛选共表达VHb基因的重组酵母工程菌。在30 L发酵罐水平上分析共表达VHb菌株(VHb+)与初始菌株(VHb-)对β-甘露聚糖酶表达的差异。结果显示,限氧条件下,VHb+菌株的β-甘露聚糖酶的表达量比对照菌株VH b-高90%,且透明颤菌血红蛋白提高了甲醇耐受性,缩短发酵周期约40 h。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白 Β-甘露聚糖酶 毕赤酵母 高密度发酵表达
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putA与vgb基因对反式-4-羟基-L-脯氨酸产量的影响 被引量：3
18
作者 张胜利 林凡 +3 位作者 刘合栋 张震宇 孙付保 夏紫薇 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1307-1316,共10页
反式-4-羟基-L-脯氨酸是在自然界中分布最广泛的一种羟脯氨酸,在医药、化工、食品和美容业等领域有广泛应用。为了在生物转化法生产反式-4-羟基-L-脯氨酸的过程中减少菌体对底物脯氨酸的降解,利用Red/ET同源重组系统敲除putA基因,并比... 反式-4-羟基-L-脯氨酸是在自然界中分布最广泛的一种羟脯氨酸,在医药、化工、食品和美容业等领域有广泛应用。为了在生物转化法生产反式-4-羟基-L-脯氨酸的过程中减少菌体对底物脯氨酸的降解,利用Red/ET同源重组系统敲除putA基因,并比较野生型菌株与缺失型菌株在不同培养基中的反式-4-羟基-L-脯氨酸产量,再引入vgb基因,考察该基因对反式-4-羟基-L-脯氨酸产量的影响。结果表明:putA基因的缺失能阻止菌体降解脯氨酸;碳源充足的情况下,GC培养基更有利于反式-4-羟基-L-脯氨酸的生产;putA基因缺失型菌株能将被消耗的脯氨酸全部转化为反式-4-羟基-L-脯氨酸;vgb基因的存在能显著提高反式-4-羟基-L-脯氨酸的产量。 展开更多
关键词 反式-4-羟基-L-脯氨酸 大肠杆菌 生物转化 基因敲除 透明颤菌血红蛋白
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VHb在产L-苯丙氨酸工程菌中的表达及其抗贫氧效率 被引量：3
19
作者 黄钦耿 吴伟斌 +2 位作者 翁雪清 施巧琴 吴松刚 《氨基酸和生物资源》 CAS 2012年第2期9-12,共4页
人工设计合成密码子优化的VHb基因及其天然的低氧启动子序列,并进行融合T7终止子克隆至L-Phe的高表达质粒中,构建高产L-phe的抗贫氧高密度发酵基因工程菌。高密度发酵过程中的低氧情况可诱导VHb基因的表达,含VHb的工程菌较对照工程菌发... 人工设计合成密码子优化的VHb基因及其天然的低氧启动子序列,并进行融合T7终止子克隆至L-Phe的高表达质粒中,构建高产L-phe的抗贫氧高密度发酵基因工程菌。高密度发酵过程中的低氧情况可诱导VHb基因的表达,含VHb的工程菌较对照工程菌发酵结果显示:菌株的稳定期延长约4h,提高菌株的产酸周期,L-phe产量提高约14%。 展开更多
关键词 L-苯丙氨酸 透明颤菌血红蛋白 低氧诱导 发酵
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透明颤菌血红蛋白的DNA改组研究 被引量：3
20
作者 袁宁 胡又佳 +1 位作者 朱春宝 朱宝泉 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期14-19,共6页
为提高透明颤菌血红蛋白在限氧条件下促进宿主细胞生长的能力,首先采用易错PCR向透明颤菌血红蛋白基因中引入突变,再结合DNA改组对其进行改造,将改组基因置于透明颤菌血红蛋白天然启动子下游,转化大肠杆菌DH5α,构建改组文库,以限氧培... 为提高透明颤菌血红蛋白在限氧条件下促进宿主细胞生长的能力,首先采用易错PCR向透明颤菌血红蛋白基因中引入突变,再结合DNA改组对其进行改造,将改组基因置于透明颤菌血红蛋白天然启动子下游,转化大肠杆菌DH5α,构建改组文库,以限氧培养条件下菌体沉淀的颜色为指标进行试管初筛,再以限氧和极端限氧条件下菌体湿重为指标进行摇瓶复筛,最终得到一个高活性突变蛋白VHb′042506。该蛋白使宿主菌体的湿重在限氧和极端限氧条件下较原基因转化子分别提高了31.25%和58.75%。经测序比对,该基因较原基因发生了11处碱基点突变,致氨基酸4处错义突变。CO差光谱显示该蛋白具有更强的特征吸收。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白 易错PCR DNA改组
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