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氨基酰-tRNA合成酶及其与相关tRNA的相互作用研究 被引量：4
1
作者 王恩多 《中国科学院院刊》 2001年第5期349-352,共4页
氨基酰tRNA合成酶是生物体蛋白质合成过程中的一类关键酶 ,对它的研究具有重要的生物学意义和应用前景。该项目系统研究了大肠杆菌亮氨酰 和精氨酰 tRNA合成酶及其与相关tR NA的相互作用。用酶和tRNA的基因克隆和高表达 ,tRNA体外转... 氨基酰tRNA合成酶是生物体蛋白质合成过程中的一类关键酶 ,对它的研究具有重要的生物学意义和应用前景。该项目系统研究了大肠杆菌亮氨酰 和精氨酰 tRNA合成酶及其与相关tR NA的相互作用。用酶和tRNA的基因克隆和高表达 ,tRNA体外转录 ,基因定点突变 ,酶片段的体外重组等手段研究了酶与tRNA的相互作用的结构基础 ,得到一系列重要结果。 展开更多
关键词 大肠杆菌 亮氨酰-trna合成酶 精氨酰-trna 合成酶 trna 相互作用 氨基酰-trna合成酶
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大肠杆菌JM83精氨酰－tRNA合成酶基因的克隆、测序及表达 被引量：3
2
作者 王恩多 陆身楠 王应睐 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第2期141-145,共5页
用聚合酶链反应（ＰＣＲ）以大肠杆菌ＪＭ８３基因组ＤＮＡ为模板，扩增了精氨酰－ｔＲＮＡ合成酶（ＡｒｇＲＳ）基因。将该基因重组到载体ｐＵＣ１８上转化到大肠杆菌ＴＧ１中，得到在转化子中ＡｒｇＲＳ的高表达。粗抽液中ＡｒｇＲＳ... 用聚合酶链反应（ＰＣＲ）以大肠杆菌ＪＭ８３基因组ＤＮＡ为模板，扩增了精氨酰－ｔＲＮＡ合成酶（ＡｒｇＲＳ）基因。将该基因重组到载体ｐＵＣ１８上转化到大肠杆菌ＴＧ１中，得到在转化子中ＡｒｇＲＳ的高表达。粗抽液中ＡｒｇＲＳ的氨酰化活力，ＴＧ１和ＴＧ１转化子分别为１．６５Ｕ／ｍｇ和２１０Ｕ／ｍｇ，后者为前者的１２７倍。ＤＮＡ顺序测定表明，与从大肠杆菌ＪＡ２００中克隆到的ＡｒｇＲＳ基因相比９１３位碱基为Ａ而不为Ｃ，这种变化使ＡｒｇＲＳ的３０５位氨基酸残基由Ｇｌｎ变为Ｌｙｓ，但这种改变不影响酶的活力。 展开更多
关键词 精氨酰-trna 合成酶 基因克隆 序列 表达
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缺血预处理通过抑制精氨酰-tRNA合成酶和Caspase-3表达减少脑梗死大鼠脑细胞的凋亡 被引量：3
3
作者 王梓 邢宏义 +1 位作者 范宇葱 符荣 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1214-1221,共8页
目的探讨缺血预处理对脑梗死大鼠脑细胞的保护作用及其机制。方法120只SD大鼠按随机数字表法分为缺血预处理组(50只)、脑梗死组(50只)、假手术组(10只)、正常组(10只),前2组大鼠采用改良Longa线栓法制备大脑中动脉闭塞(MCAO)致脑梗死模... 目的探讨缺血预处理对脑梗死大鼠脑细胞的保护作用及其机制。方法120只SD大鼠按随机数字表法分为缺血预处理组(50只)、脑梗死组(50只)、假手术组(10只)、正常组(10只),前2组大鼠采用改良Longa线栓法制备大脑中动脉闭塞(MCAO)致脑梗死模型(缺血预处理组大鼠在造模前将线栓置入大脑中动脉阻断血流15 min),假手术组大鼠行假缺血预处理和假阻断大脑中动脉血流,正常组大鼠不做任何处理。分别于正常组和假手术组造模后24 h,缺血预处理组和脑梗死组造模后2 h、6 h、12 h、24 h、48 h,每组取10只大鼠,采用TUNEL染色检测小鼠缺血半暗带区细胞凋亡率,免疫组化染色检测小鼠缺血半暗带区含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)的表达,RT-PCR和Western blotting法分别检测小鼠缺血半暗带区精氨酰-tRNA合成酶(ArgRs)基因和ArgRs蛋白的表达。结果与正常组和假手术组比较,脑梗死组大鼠造模后不同时间点缺血半暗带区细胞凋亡率、Caspase-3阳性表达率、ArgRs基因和ArgRs蛋白的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与脑梗死组比较,缺血预处理组大鼠造模后不同时间点缺血半暗带区细胞凋亡率、Caspase-3阳性表达率、ArgRs基因和ArgRs蛋白的表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脑缺血预处理可以抑制脑梗死大鼠脑缺血半暗带区ArgRS基因及ArgRS蛋白、Caspase-3的表达,减少脑细胞的凋亡,从而起到脑保护作用。 展开更多
关键词 缺血预处理 细胞凋亡 精氨酰-trna合成酶 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3 脑梗死
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精氨酰-tRNA合成酶在局灶性脑缺血再灌注大鼠中的表达及机制研究 被引量：3
4
作者 沈寅 范云智 +1 位作者 范宇葱 符荣 《实用心脑肺血管病杂志》 2016年第6期54-58,共5页
背景目前,临床上针对哺乳动物氨基酰-tRNA合成酶的研究主要集中在精氨酰-tRNA合成酶、亮氨酰-tRNA合成酶、甲硫氨酰-tRNA合成酶、丙氨酰-tRNA合成酶的结构和功能方面,对哺乳动物尤其是大鼠脑缺血与氨基酰-tRNA合成酶关系的研究报道极少... 背景目前,临床上针对哺乳动物氨基酰-tRNA合成酶的研究主要集中在精氨酰-tRNA合成酶、亮氨酰-tRNA合成酶、甲硫氨酰-tRNA合成酶、丙氨酰-tRNA合成酶的结构和功能方面,对哺乳动物尤其是大鼠脑缺血与氨基酰-tRNA合成酶关系的研究报道极少。目的探讨精氨酰-tRNA合成酶在局灶性脑缺血再灌注大鼠中的表达及机制。方法选取清洁级健康雄性SD大鼠60只,其中4只大鼠进行预实验,采用线栓法栓塞大脑中动脉建立局灶性脑缺血再灌注模型。然后将剩余的56只大鼠随机分为正常组8只、假手术组8只、脑缺血再灌注组40只。正常组不做任何外科处理;假手术组大鼠外科操作步骤与脑缺血再灌注组相同,只是线栓不进入颈内动脉、不造成脑缺血;脑缺血再灌注组大鼠建立局灶性脑缺血再灌注模型。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定正常组、假手术组、脑缺血再灌注组大鼠再灌注后不同时间点精氨酰-tRNA合成酶mRNA相对表达量,采用Western Blotting法测定正常组、假手术组、脑缺血再灌注组大鼠再灌注后不同时间点精氨酰-tRNA合成酶蛋白相对表达量。结果假手术组与脑缺血再灌注组大鼠再灌注2 h、脑缺血再灌注组再灌注48 h精氨酰-tRNA合成酶mRNA相对表达量及蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);假手术组大鼠精氨酰-tRNA合成酶mRNA相对表达量及蛋白相对表达量均低于脑缺血再灌注组再灌注6 h、12 h及24 h(P<0.05);脑缺血再灌注组大鼠再灌注6 h精氨酰-tRNA合成酶mRNA相对表达量及蛋白相对表达量均高于再灌注2 h和12 h(P<0.05);脑缺血再灌注组大鼠再灌注24 h精氨酰-tRNA合成酶mRNA相对表达量及蛋白相对表达量均高于再灌注12 h和48 h(P<0.05)。结论大鼠局灶性脑缺血再灌注后6 h及24 h精氨酰-tRNA合成酶表达明显升高,可能与缺血和再灌注两次损伤有关。 展开更多
关键词 脑缺血 再灌注损伤 精氨酰-trna合成酶
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RARS2基因表达对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及化疗敏感性的影响 被引量：1
5
作者 刘悦泽 邱江东 +2 位作者 杨刚 赵方宇 张太平 《中华肝胆外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期368-372,共5页
目的研究线粒体精氨酰-tRNA合成酶(RARS2)基因表达对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及化疗敏感性的影响。方法人胰腺癌细胞株AsPC-1及PANC-1分别设置阴性对照组、RARS2干扰组-1、RARS2干扰组-2、过表达对照组、RARS2过表达组,通过瞬时转染... 目的研究线粒体精氨酰-tRNA合成酶(RARS2)基因表达对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及化疗敏感性的影响。方法人胰腺癌细胞株AsPC-1及PANC-1分别设置阴性对照组、RARS2干扰组-1、RARS2干扰组-2、过表达对照组、RARS2过表达组,通过瞬时转染法降低或过表达RARS2。细胞计数CCK-8法检测细胞增殖以及化疗敏感性,采用Transwell检测细胞侵袭及迁移。采用Western印迹检测RARS2在不同浓度及不同时间吉西他滨作用下的表达。Western印迹与聚合酶链式反应检测耐药株RARS2表达。结果在胰腺癌细胞AsPC-1及PANC-1中,干扰降低RARS2的表达可以显著抑制细胞增殖能力,增强吉西他滨化疗敏感性;过表达RARS2后细胞增殖能力增强,吉西他滨化疗敏感性降低。在AsPC-1细胞中,阴性对照组、RARS2干扰组-1、RARS2干扰组-2、过表达对照组、RARS2过表达组迁移细胞数(100倍显微镜下)(586.7±37.4)个/视野、(195.7±18.6)个/视野、(237.0±17.1)个/视野、(157.7±19.1)个/视野、(456.0±23.1)个/视野,侵袭细胞数分别为(87.7±13.2)个/视野、(24.7±6.5)个/视野、(31.7±6.1)个/视野、(29.3±4.5)个/视野、(94.3±9.3)个/视野。降低RARS2表达后细胞迁移与侵袭能力降低,过表达RARS2细胞迁移与侵袭能力增强。聚合酶链式反应与Western印迹实验表明,吉西他滨耐药株AsPC-1中RARS2的相对表达高于普通细胞株。在AsPC-1细胞中,随着吉西他滨浓度及处理时间增加,RARS2表达随之上升。结论RARS2基因调控胰腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移及化疗敏感性,且RARS2表达与吉西他滨浓度与处理时间正相关。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 细胞增殖 线粒体精氨酰-trna合成酶 侵袭 迁移 化疗敏感性
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牛带绦虫ATE基因功能预测及原核表达
6
作者 刘玉江 戴佳琳 +1 位作者 黄江 王宇 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期73-74,共2页
目的分析和预测牛带绦虫成虫精氨酰-tRNA转移酶（arginyl-tRNA-protein transferase,ATE）基因及其编码蛋白的结构域特性,并进行原核表达。方法利用在线生物信息学网站及工具对牛带绦虫精氨酰-tRNA转移酶基因的功能进行预测并将其编码... 目的分析和预测牛带绦虫成虫精氨酰-tRNA转移酶（arginyl-tRNA-protein transferase,ATE）基因及其编码蛋白的结构域特性,并进行原核表达。方法利用在线生物信息学网站及工具对牛带绦虫精氨酰-tRNA转移酶基因的功能进行预测并将其编码区序列克隆到原核表达载体pET-28 a（＋）上,测序鉴定重组质粒。结果该基因全长1 476 bp,编码区为141~1 617 bp,编码491个氨基酸;该基因为全长基因,无跨膜区,具有多个磷酸化位点,蛋白的理化性质稳定,理论分子量为56 436.3Da;没有质体、线粒体定位序列;十二烷基-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结果表明,目的基因在大肠埃希菌BL21~DE3中表达成功。结论筛选出牛带绦虫成虫精氨酰-tRNA转移酶基因,成功构建重组原核表达质粒。 展开更多
关键词 牛带绦虫 精氨酰-trna转移酶 生物信息学 原核表达
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本氏烟草NbRS基因克隆及响应镉胁迫中的功能初步分析
7
作者 娄冰冰 赵一博 +2 位作者 辛翠花 卞晓燕 郭江波 《种子》 北大核心 2022年第3期6-11,共6页
为了研究精氨酰-tRNA合成酶(arginyl-tRNA synthetase,RS)在植物响应镉胁迫中的作用,本研究扩增本氏烟草NbRS基因,进行生物信息学分析,并通过实时荧光定量PCR和BSP技术对镉胁迫下基因的表达和甲基化状态进行分析;利用病毒诱导的基因沉默... 为了研究精氨酰-tRNA合成酶(arginyl-tRNA synthetase,RS)在植物响应镉胁迫中的作用,本研究扩增本氏烟草NbRS基因,进行生物信息学分析,并通过实时荧光定量PCR和BSP技术对镉胁迫下基因的表达和甲基化状态进行分析;利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术下调该基因表达,分析该基因下调对植物发育、对镉的耐受能力的影响。结果表明,NbRS基因大小为1947 bp,编码649个氨基酸,与茄科植物精氨酰-tRNA合成酶亲缘关系最近;不同浓度Cd^(2+)处理会影响该基因表达,且Cd^(2+)处理下基因甲基化状态发生变化;NbRS基因下调导致植物发育异常,且植物对Cd^(2+)胁迫的敏感性增加。研究表明,NbRS基因在植物耐受Cd^(2+)胁迫中起重要作用,可以作为潜在的培育耐受或低积累Cd^(2+)工程植物的靶基因做进一步研究。 展开更多
关键词 NbRS基因 精氨酰-trna合成酶 镉胁迫 病毒诱导的基因沉默
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大鼠Rars基因siRNA重组腺病毒载体的构建与鉴定
8
作者 沈寅 符荣 +3 位作者 赵洪洋 王海均 王文良 张立志 《中国临床神经外科杂志》 2016年第5期290-293,共4页
目的构建针对大鼠Rars基因的si RNA重组腺病毒载体,并观察大鼠神经元细胞病毒转染前后目的蛋白表达量变化。方法将原代培养的大鼠神经元细胞随机分为观察组、阴性对照组及空白对照组。观察组细胞转染携带Rars si RNA序列的重组腺病毒,... 目的构建针对大鼠Rars基因的si RNA重组腺病毒载体,并观察大鼠神经元细胞病毒转染前后目的蛋白表达量变化。方法将原代培养的大鼠神经元细胞随机分为观察组、阴性对照组及空白对照组。观察组细胞转染携带Rars si RNA序列的重组腺病毒,阴性对照组细胞转染携带Scramble无意义序列的重组腺病毒,空白对照组不转染任何病毒。观察各对照组表达绿色荧光蛋白(GFP)的阳性细胞数,计算转染率,并检测转染前后Rars基因对应产物精氨酰-t RNA合成酶(Arg RS)蛋白的表达量,评价基因沉默效率。结果成功构建包含Rars基因干扰序列及Scramble序列的重组腺病毒,病毒滴度达1010级。利用重组腺病毒感染大鼠神经元细胞48 h后,绝大部分细胞表达GFP,转染率>95%。含Rars干扰序列的病毒转染细胞可使Arg RS蛋白表达量显著降低(P<0.01),沉默效率>60%。含Scramble对照序列的病毒则不能产生明显的基因沉默效应。结论本实验所构建的si RNA重组腺病毒载体可有效沉默大鼠Rars基因,降低Arg RS蛋白表达。 展开更多
关键词 Rars基因 小分子干扰RNA 重组腺病毒载体 精氨酰-trna合成酶
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精氨酰-tRNA合成酶基因研究进展 被引量：2
9
作者 贺引弟 池俊玲 +1 位作者 王雅茹 郭江波 《种子》 北大核心 2018年第4期49-52,共4页
精氨酰tRNA合成酶(ArgRS)是蛋白质生物合成过程中具有重要作用的酶,其主要功能是参与tRNA酰基化,属于第一类氨酰tRNA合成酶。作为一种特殊的氨酰tRNA合成酶,精氨酰tRNA合成酶的结构与功能具有重要的探索价值。因此对精氨酰tRNA合成酶基... 精氨酰tRNA合成酶(ArgRS)是蛋白质生物合成过程中具有重要作用的酶,其主要功能是参与tRNA酰基化,属于第一类氨酰tRNA合成酶。作为一种特殊的氨酰tRNA合成酶,精氨酰tRNA合成酶的结构与功能具有重要的探索价值。因此对精氨酰tRNA合成酶基因及表达特性的深入研究,和对其潜在功能的挖掘都是探索蛋白质生物合成机制的关键所在。本文概述了该酶基本的生物学特性,从遗传表达调控和实际应用等方面介绍了精氨酰tRNA合成酶的研究进展,总结了精氨酰tRNA合成酶在临床应用中发挥的作用,以及展望了探索其功能的重要性和今后研究的意义。 展开更多
关键词 精氨酰trna合成酶 蛋白质生物合成 表达调控
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重组结核分枝杆菌精氨酰tRNA合成酶活性验证及晶体生长 被引量：1
10
作者 王炜 陈磊 +3 位作者 陈明心 张岱 蒋露 任伟宏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期430-434,461,共6页
目的建立重组结核分枝杆菌ArgRS的制备方法,并验证重组蛋白的生物活性。方法将结核分枝杆菌ArgRS基因插入到pQE60质粒中,通过IPTG诱导表达重组蛋白,使用分子筛制备重组蛋白,并评价重组蛋白分子量。使用圆二色谱评价重组蛋白的折叠情况... 目的建立重组结核分枝杆菌ArgRS的制备方法,并验证重组蛋白的生物活性。方法将结核分枝杆菌ArgRS基因插入到pQE60质粒中,通过IPTG诱导表达重组蛋白,使用分子筛制备重组蛋白,并评价重组蛋白分子量。使用圆二色谱评价重组蛋白的折叠情况。通过Thermal Shift Assay进一步验证重组蛋白的生物活性。采用气相扩散法筛选晶体。结果使用pQE60载体获得了重组表达的ArgRS蛋白。凝胶过滤层析纯化重组蛋白并验证了其分子量与天然蛋白一致;Thermal Shift Assay证明重组蛋白的生物活性。使用气相扩散法获得结核分枝杆菌ArgRS分子晶体。结论成功制备出具有天然活性的重组结核分枝杆菌ArgRS蛋白,并获得蛋白质晶体。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 精氨酰trna合成酶 重组表达 结晶
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