期刊文献+
共找到4,448篇文章
< 1 2 223 >
每页显示 20 50 100
乙型肝炎病毒X蛋白反式激活SV40病毒早期启动子的研究 被引量:56
1
作者 刘妍 董菁 +6 位作者 成军 钟彦伟 夏小兵 李克 王琳 施双双 段惠娟 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期404-406,共3页
聚合酶链反应 (PCR)扩增HBVX基因 ,克隆至真核表达载体 pVR10 12中 ,构建HBVX基因重组表达载体 pVR10 12 X ;以该质粒转染HepG2细胞 ,酶联免疫吸附法 (ELISA)检测细胞X蛋白的瞬时表达 ;与报告质粒pSV lacZ共转染HepG2细胞 ,用试剂盒法... 聚合酶链反应 (PCR)扩增HBVX基因 ,克隆至真核表达载体 pVR10 12中 ,构建HBVX基因重组表达载体 pVR10 12 X ;以该质粒转染HepG2细胞 ,酶联免疫吸附法 (ELISA)检测细胞X蛋白的瞬时表达 ;与报告质粒pSV lacZ共转染HepG2细胞 ,用试剂盒法检测 β 半乳糖苷酶表达活性。结果质粒 pVR10 12 X在HepG2细胞瞬时表达X蛋白 ,共转染实验中 pVR10 12 X组 β 半乳糖苷酶的表达是空质粒对照的 3 2倍。表明构建的表达载体能在哺乳动物细胞中表达 。 展开更多
关键词 乙肝病毒X基因 表达 反式激活 SV40早期启动子 乙型肝炎
下载PDF
猪细小病毒结构蛋白VP_1和VP_2的基因免疫研究 被引量:25
2
作者 赵俊龙 陈焕春 +3 位作者 吕建强 王祥 肖少波 周复春 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期47-51,共5页
利用真核表达载体pCIneo和pcDNA3 1( +)分别构建了含有猪细小病毒VP1基因的 pCIneoVP1和含有VP2基因的 pCIneoVP2 与 pcDNAVP2 三种真核表达质粒。将上述三种真核表达质粒分别转染IBRS 2细胞 ,利用间接ELISA检测表达情况 ,结果表明上述... 利用真核表达载体pCIneo和pcDNA3 1( +)分别构建了含有猪细小病毒VP1基因的 pCIneoVP1和含有VP2基因的 pCIneoVP2 与 pcDNAVP2 三种真核表达质粒。将上述三种真核表达质粒分别转染IBRS 2细胞 ,利用间接ELISA检测表达情况 ,结果表明上述三种质粒均能在IBRS 2细胞表达 ,表达产物位于细胞中。在此基础上 ,利用这三种质粒分别以肌内注射的方式 ,间隔 2周 2次免疫小鼠 ,结果发现所有表达质粒均能诱导产生明显的细胞免疫和体液免疫 ,其中pCIneoVP1质粒诱导的体液免疫最强 ,与猪细小病毒灭活疫苗免疫组相当 ,pCIneoVP2 诱导的细胞免疫应答强于PPV灭活组 ,pCIneoVP1和 pCIneoVP2 联合免疫并没有加强作用。 展开更多
关键词 猪细小病毒 结构蛋白 表达 基因免疫
下载PDF
影响非洲绿猴肾细胞脂质体转染效率的因素 被引量:14
3
作者 钱锋 肖成祖 《生物技术通报》 CAS CSCD 1998年第5期31-36,共6页
已有实验表明,细胞转染效率可能决定于DNA-脂质体复合物的形成以及所转染的细胞种类。利用脂质体LipofectAMINE,研究了影响Vero细胞转染效率的参数如DNA和脂质体的用量,转染的细胞数量以及细胞暴露于DNA... 已有实验表明,细胞转染效率可能决定于DNA-脂质体复合物的形成以及所转染的细胞种类。利用脂质体LipofectAMINE,研究了影响Vero细胞转染效率的参数如DNA和脂质体的用量,转染的细胞数量以及细胞暴露于DNA-脂质体复合物的时间长度。通过检测报告基因β-半乳糖苷酶(β-gal)的表达,发现最高转染率只在一较窄范围内获得。β-gal的表达随脂质体量增加而显著增加。在标准转染条件下,增加DNA用量和延长细胞暴露时间反而使转染效率下降。转染细胞数量为4×104细胞/24孔时,细胞转染效率最高。 展开更多
关键词 基因表达 脂质体 转染 表达 VERO细胞
下载PDF
禽流感病毒HA基因真核表达质粒的构建与表达 被引量:19
4
作者 张强哲 秦曦明 +5 位作者 梁荣 邓明俊 何宏轩 张彦明 郑昌学 段明星 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第3期483-487,共5页
血凝素蛋白 (HA)基因是禽流感病毒 (AIV)重要的保护性抗原基因 .为了研究HA基因疫苗 ,用PCR扩增H5亚型AIVHA基因 ,将其克隆到质粒 pcDNA4/HisMax和pRc/CMV上得到真核表达质粒 pC4H5和pCMVH5 .采用TfxTM 2 0、Superfect转染试剂和电转染... 血凝素蛋白 (HA)基因是禽流感病毒 (AIV)重要的保护性抗原基因 .为了研究HA基因疫苗 ,用PCR扩增H5亚型AIVHA基因 ,将其克隆到质粒 pcDNA4/HisMax和pRc/CMV上得到真核表达质粒 pC4H5和pCMVH5 .采用TfxTM 2 0、Superfect转染试剂和电转染法转染HeLa细胞 ,转染后的HeLa细胞经蛋白质印迹和血凝试验检测HA蛋白及其活性 .结果表明 ,Superfect转染和电转染均能正确表达HA蛋白并具有生物学活性 ,蛋白质印迹检测到HA和HA裂解的HA1和HA2 ,与AIV的HA、HA1、HA2蛋白的分子质量一致 .从血凝试验结果看 ,Superfect和电转染表达的HA均具有血凝活性 ,而经Superfect转染的 pC4H5的表达量是pCMVH5的8倍 ,表明 展开更多
关键词 禽流感病毒 HA基因 表达 质粒构建 表达 血凝素蛋白
下载PDF
日本血吸虫脂肪酸结合蛋白DNA疫苗诱导小鼠保护性免疫力的研究 被引量:13
5
作者 朱晓华 石佑恩 +2 位作者 胡萍 宁长修 朱红刚 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2005年第1期4-8,共5页
目的构建日本血吸虫脂肪酸结合蛋白(Sj14FABP)重组质粒,并观察其在小鼠体内诱导的抗日本血吸虫感染保护作用。方法RT-PCR特异性扩增Sj14FABP基因,将其克隆入真核表达载体pVIVO2,通过PCR、双酶切及测序鉴定。获得的重组质粒pVIVO2-Sj14F... 目的构建日本血吸虫脂肪酸结合蛋白(Sj14FABP)重组质粒,并观察其在小鼠体内诱导的抗日本血吸虫感染保护作用。方法RT-PCR特异性扩增Sj14FABP基因,将其克隆入真核表达载体pVIVO2,通过PCR、双酶切及测序鉴定。获得的重组质粒pVIVO2-Sj14FABP转染HepG2细胞,间接免疫荧光(IFA)检测蛋白表达;并免疫BALB/c小鼠,30d后攻击感染,感染后45天剖杀,计数检获成虫数和肝脏虫卵数。结果RT-PCR扩增出大小为440bp的Sj14FABP片段,重组质粒经PCR和双酶切后均获得目的片段,转染细胞IFA结果显示有较强荧光。重组质粒免疫小鼠后分别获得24.1%减虫率和27.2%减卵率。结论成功构建和表达重组质粒pVIVO2-Sj14FABP,该核酸疫苗能够诱导小鼠产生部分抗血吸虫感染的保护力。 展开更多
关键词 日本血吸虫 脂肪酸结合蛋白 酸疫苗 表达 免疫保护性
下载PDF
HBsAg在不同真核表达载体中的表达 被引量:13
6
作者 古柏燕 任红 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 1999年第2期98-100,共3页
目的建立HBsAg及其变异体的高效真核表达系统。方法从已构建的pBluescriptKS+-HBs系列突变重组体获取HBV-S基因片段,将其亚克隆到真核表达载体pMEP4,pCEP4,pLXSN,PXT1及pcDNA... 目的建立HBsAg及其变异体的高效真核表达系统。方法从已构建的pBluescriptKS+-HBs系列突变重组体获取HBV-S基因片段,将其亚克隆到真核表达载体pMEP4,pCEP4,pLXSN,PXT1及pcDNA3,从而构建了含HBV-S基因及其突变型的一系列表达载体,并将其转染(或感染)人肝癌细胞系HepGe2。结果获得稳定分泌HBsAgR其突变体的抗性细胞系。结论各组真核表达载体皆能表达HBsAg及其突变体,但在转染率、表达量及稳定性上存在差异。选择其中的高效、准确表达系统,将为HBsAg变异株生物学性状的深入研究及进一步基因治疗、基因免疫的研究提供有用的工具。 展开更多
关键词 乙肝表面抗原 载体 表达
原文传递
鹅γ-干扰素成熟蛋白的表达及其生物学活性研究 被引量:12
7
作者 李洪涛 马波 +1 位作者 王君伟 金红岩 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期190-195,共6页
【目的】检测重组鹅IFN-γ的生物学活性。【方法】将鹅IFN-γ成熟蛋白基因分别克隆到原核表达载体pET30a,杆状病毒转移载体pMelBacA和pBlueBacHis2A。对鹅IFN-γ成熟蛋白进行原核和真核表达系统表达;利用体外活性试验检测表达产物的生... 【目的】检测重组鹅IFN-γ的生物学活性。【方法】将鹅IFN-γ成熟蛋白基因分别克隆到原核表达载体pET30a,杆状病毒转移载体pMelBacA和pBlueBacHis2A。对鹅IFN-γ成熟蛋白进行原核和真核表达系统表达;利用体外活性试验检测表达产物的生物学活性。【结果】原核和真核表达系统表达了重组鹅IFN-γ成熟蛋白,并制备其原核表达产物的多克隆抗体;重组鹅成熟IFN-γ可以诱导鹅巨噬细胞产生NO,并能抑制GPMV在鹅胚成纤维细胞中的增殖。【结论】重组鹅成熟IFN-γ具有鹅巨噬细胞激活活性和抗病毒活性。 展开更多
关键词 干扰素(IFN) 成熟蛋白 表达 表达 生物学活性
下载PDF
HaSNPV几丁质酶基因在大肠杆菌和昆虫细胞中的表达及其产物对Bt杀虫剂的增效作用 被引量:10
8
作者 王芳 顾奇伟 +1 位作者 武家才 张传溪 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期792-797,共6页
为了探索杆状病毒几丁质酶对微生物杀虫剂的增效作用及其利用途径 ,分别在大肠杆菌和昆虫细胞中表达棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒 (HaSNPV)几丁质酶 .用PCR方法扩增出不含N端信号肽编码序列的几丁质酶基因片段 ,并分别克隆至原核表... 为了探索杆状病毒几丁质酶对微生物杀虫剂的增效作用及其利用途径 ,分别在大肠杆菌和昆虫细胞中表达棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒 (HaSNPV)几丁质酶 .用PCR方法扩增出不含N端信号肽编码序列的几丁质酶基因片段 ,并分别克隆至原核表达载体pET2 8a和重组到杆状病毒BactoBac表达系统 ,在大肠杆菌 (E .coli)BL2 1和粉纹夜蛾 (Trichoplusiani)细胞系Tn 5B1 4中分别进行了表达 .在大肠杆菌中表达量约占细菌总蛋白 15 % ,在昆虫细胞中表达量约占细胞总蛋白10 % .将含有几丁质酶的大肠杆菌和昆虫细胞表达产物添加到苏云金杆菌 (Bt)菌液中一起喂食 2龄家蚕 .结果显示 ,HaSNPV几丁质酶基因的 2种表达产物和Bt杀虫剂的混合物使处理的家蚕的致死时间较对照处理均明显缩短 .昆虫细胞和大肠杆菌表达产物与Bt混合物处理的LT50 分别从 93 5h和 95 1h缩短到 5 6 2h及 6 7 2h ,并且供试家蚕的生长速度明显缓慢 .研究结果表明 。 展开更多
关键词 HASNPV 几丁质酶 表达 表达 BT杀虫剂 增效作用
下载PDF
羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒构建及其在MDBK细胞中的表达 被引量:16
9
作者 刘嫒 冯将 +3 位作者 鲜思美 刘宗胜 李鹏飞 罗代兵 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1124-1128,共5页
目的为构建羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒,同时验证其在MDBK细胞中的表达。方法本试验以pVAX1为真核表达载体,在前期构建的克隆质粒pMD18-T-B2L和pMD18-T-F1L基础上,构建真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L,对其分别进行双酶切和... 目的为构建羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒,同时验证其在MDBK细胞中的表达。方法本试验以pVAX1为真核表达载体,在前期构建的克隆质粒pMD18-T-B2L和pMD18-T-F1L基础上,构建真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L,对其分别进行双酶切和测序鉴定,将鉴定正确的真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L转染至MDBK细胞,采用RT-PCR和间接免疫荧光试验(IFA)检测目的基因表达。结果双酶切鉴定和序列测定表明真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L构建成功,RT-PCR和IFA同时验证目的基因在MDBK细胞浆中能瞬时表达。结论本试验构建成功的真核表达质粒为下一步羊口疮病毒核酸疫苗研究奠定基础。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 F1L基因 B2L基因 表达
下载PDF
大鼠脑红蛋白(NGB)的原核表达、抗体制备及其细胞分布 被引量:13
10
作者 张成岗 李林 +5 位作者 邓美玉 王春丽 谢芳 周婉琼 王航雁 贺福初 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期80-84,共5页
脑红蛋白 (NGB)是新发现的与脑内氧供应密切相关的分子 .为了检测细胞内脑红蛋白的表达、亚细胞分布从而对该分子进行深入的功能研究 ,成功地将大鼠脑红蛋白基因编码区构建于原核表达载体pGEX 4T 2 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,获得融合... 脑红蛋白 (NGB)是新发现的与脑内氧供应密切相关的分子 .为了检测细胞内脑红蛋白的表达、亚细胞分布从而对该分子进行深入的功能研究 ,成功地将大鼠脑红蛋白基因编码区构建于原核表达载体pGEX 4T 2 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,获得融合表达产物 .对含有融合蛋白的包含体进行溶解和复性 ,用谷胱甘肽S 转移酶 (GST)亲和层析柱纯化 ,通过免疫家兔获得了兔源性抗NGB多克隆抗体 .采用Western印迹分析技术 ,用该抗体检测NGB基因的真核表达产物 ,证明该抗体有较好的针对NGB蛋白的专一性 ,可用于对NGB的结构和功能研究 .同时 ,用该抗体进行免疫组化分析发现 ,正常成年大鼠神经系统中有较多的NGB免疫反应阳性细胞分布 。 展开更多
关键词 大鼠 脑红蛋白 表达 抗体制备 表达 免疫组化 细胞分布
下载PDF
外源蛋白表达系统及其应用的研究进展 被引量:14
11
作者 李航 戚睿斌 +2 位作者 陈宗艳 刘光清 李传峰 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第7期34-37,47,共5页
外源蛋白表达技术可用于如蛋白质间相互作用分析、基因调控分析、蛋白质结构及功能分析等多种下游应用。在考虑重组蛋白功能性、可溶性、生产速度及得率等因素下,正确选择蛋白表达系统和调控元件对试验能否成功具有重要意义。文章综述... 外源蛋白表达技术可用于如蛋白质间相互作用分析、基因调控分析、蛋白质结构及功能分析等多种下游应用。在考虑重组蛋白功能性、可溶性、生产速度及得率等因素下,正确选择蛋白表达系统和调控元件对试验能否成功具有重要意义。文章综述了常用的原核表达系统和真核表达系统及其优化和应用,以期为科研人员的研究和生产提供一定的技术支持。 展开更多
关键词 外源蛋白 表达 表达 蛋白表达优化 应用
原文传递
细胞因子与猪瘟病毒E_2基因真核双表达载体的构建及其免疫增强作用 被引量:8
12
作者 陈创夫 余兴龙 +4 位作者 马正海 李作生 李红卫 涂长春 殷震 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1406-1410,共5页
构建了猪瘟病毒E2 基因与IL 2、IL 3基因的双表达真核表达载体 ,观察其表达水平 ,并对其免疫增强效果进行了观察。结果表明 ,构建了 2种猪瘟病毒E2 基因与白细胞介素 2、3的真核表达质粒pIRSTIL 2 ,pIRSTIL 3。将 2种质粒转染BHK 2 1细... 构建了猪瘟病毒E2 基因与IL 2、IL 3基因的双表达真核表达载体 ,观察其表达水平 ,并对其免疫增强效果进行了观察。结果表明 ,构建了 2种猪瘟病毒E2 基因与白细胞介素 2、3的真核表达质粒pIRSTIL 2 ,pIRSTIL 3。将 2种质粒转染BHK 2 1细胞 ,均可在体外表达E2 抗原和有生物活性的IL 2、IL 3两种质粒能诱导产生CSFV的特异性免疫反应。pIRSTIL 2 ,pIRSTIL 3所诱导的免疫应答反应比使用单表达质粒 pIRST强。试验表明 ,细胞因子与目的基因构建的双表达基因疫苗能有效提高基因疫苗的免疫效果。 展开更多
关键词 细胞因子 猪瘟病毒 E2基因 免疫增强作用 表达载体 猪瘟 基因疫苗 表达
下载PDF
增强型绿色荧光蛋白真核表达载体的构建和表达 被引量:8
13
作者 李小月 何金生 +3 位作者 沈继龙 宋蔚 汪学龙 胡元生 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2005年第1期12-15,共4页
 目的 构建增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein, EGFP)编码基因的真核表达载体 pcDNA3.1(+) GFP,并观察其在Hep 2细胞中的表达情况。 方法 据已知的EGFP基因序列,设计合成 1 对引物,并引入Hind Ⅲ和EcoR Ⅴ酶...  目的 构建增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein, EGFP)编码基因的真核表达载体 pcDNA3.1(+) GFP,并观察其在Hep 2细胞中的表达情况。 方法 据已知的EGFP基因序列,设计合成 1 对引物,并引入Hind Ⅲ和EcoR Ⅴ酶切位点。应用PCR技术,从含有 EGFP的 pAdTrack CMV中扩增 EGFP编码基因。通过 TA连接将其克隆入pGEM T easy载体,经PCR及限制性内切酶鉴定后,插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,转化Esche richia coli DH5α感受态细胞,于Amp+ LB平板上筛选阳性克隆。重组子经 Hind Ⅲ和EcoRⅤ双酶切、PCR鉴定,将该载体转染人喉癌细胞 Hep 2 后 48 h观察 EGFP表达情况。 结果 成功构建了含 EGFP 编码基因的真核表达载体pcDNA3.1(+) GFP,并成功转染Hep 2细胞,在倒置荧光显微镜下呈现绿色光。 结论 获得可产生绿色荧光的 EG FP,能方便地用作报告基因和筛选标记。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 表达 载体 表达
下载PDF
猪圆环病毒2型ORF4基因编码蛋白的体外表达 被引量:11
14
作者 李增魁 陈婷飞 +1 位作者 李益飞 周继勇 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期837-841,共5页
为了探讨猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF4基因结构及其所编码蛋白在PK15细胞中的表达特性,以PCV-2杭州株病毒DNA为模板进行PCR,结果扩增出了ORF4基因,并分别构建了pGEX-4T-1-ORF4原核表达载体和pEGFP-C2-ORF4真核表达载体。序列分析、SDS-PAG... 为了探讨猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF4基因结构及其所编码蛋白在PK15细胞中的表达特性,以PCV-2杭州株病毒DNA为模板进行PCR,结果扩增出了ORF4基因,并分别构建了pGEX-4T-1-ORF4原核表达载体和pEGFP-C2-ORF4真核表达载体。序列分析、SDS-PAGE分析和Western-blot检测表明,PCV-2 ORF4基因长180 bp,共编码60个氨基酸;其编码蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式存在,分子质量大小约为6.685 ku。真核PK15细胞的转染试验显示,ORF4重组蛋白在PK15细胞的细胞核和细胞浆中均有表达,但对其有一定的毒性。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 ORF4基因 表达 表达 纯化
下载PDF
家蝇抗菌肽基因Cecropin在COS-7细胞中的表达及产物活性初步研究 被引量:13
15
作者 金小宝 朱家勇 +1 位作者 马艳 刘雷山 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期566-568,共3页
目的初步研究家蝇抗菌肽Cecropin cDNA在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达及其产物的抗菌作用。方法以Cecropin基因为模板设计2条特异引物,扩增在C端含6×His标签的Cecropin开放阅读框序列,将此序列与真核表达载体pcDNA3.1(+)进行重组... 目的初步研究家蝇抗菌肽Cecropin cDNA在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达及其产物的抗菌作用。方法以Cecropin基因为模板设计2条特异引物,扩增在C端含6×His标签的Cecropin开放阅读框序列,将此序列与真核表达载体pcDNA3.1(+)进行重组,构建重组质粒pcDNA3.1(+)/Cecropin-His_6。以脂质体LipofectamineTM2000为载体,对COS-7细胞进行重组质粒pcDNA3.1(+)/Cecropin-His_6和空载体pcDNA3.1(+)的转染,72h后收集细胞培养上清液,表达产物经His-TrapHP亲合层析柱分离纯化和Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定后,进行杀菌活性的初步检测。结果转染了重组质粒pcDNA3.1(+)/Cecropin-His_6细胞培养上清液的纯化物,行Tricine-SDS-PAGE电泳得到与预期分子量大小相符的单一目的条带,该纯化物对大肠杆菌E.coli K12D31具有一定的杀菌活性。结论家蝇抗菌肽Cecropin cDNA在COS-7中得到了正确表达。 展开更多
关键词 天蚕素 表达 转染 杀菌活性
下载PDF
人TRAIL cDNA的真核表达和体外肿瘤细胞的凋亡诱导作用 被引量:9
16
作者 史须 黄家强 +2 位作者 张颖妹 宋泉声 马大龙 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期145-149,共5页
目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体( TRAIL)全长 cDNA及其胞外区真核表达产物体外诱导肿瘤细胞的凋亡作用,为 TRAIL基因治疗提供实验依据。方法 从胎心 cDNA文库中经 PCR扩增获得两种形式 cDNAs,构建相应的真核表达载体后进行... 目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体( TRAIL)全长 cDNA及其胞外区真核表达产物体外诱导肿瘤细胞的凋亡作用,为 TRAIL基因治疗提供实验依据。方法 从胎心 cDNA文库中经 PCR扩增获得两种形式 cDNAs,构建相应的真核表达载体后进行基因转染,并筛选得到稳定表达细胞株;收集表达上清进行肿瘤细胞的体外凋亡诱导,同时观察凋亡相关蛋白 TFAR19与表达上清共同存在时对肿瘤细胞的作用。结果 成功获得表达两种目的蛋白的真核细胞系,其表达上清均能诱导肿瘤细胞 HeLa和 Hec-1a的凋亡,而且 TFAR19能增强表达上清的凋亡诱导作用。结论 证明 TRAIL基因的真核表达产物同样能诱导肿瘤细胞凋亡,如有 TFAR19存在则效果更佳。 展开更多
关键词 肿瘤坏死在子相关凋亡诱导配体 CDNA 表达 体外肿瘤细胞 细胞凋亡 TFAR19
下载PDF
通过载体DHFR基因的弱化提高抗体在CHO细胞中的表达 被引量:10
17
作者 白银 王琰 +3 位作者 张海荣 周丽君 吕英谦 俞莉章 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期62-64,67,共4页
目的:提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体在二氢叶酸还原酶缺陷的CHO细胞株(CHO/DHFR-)中表达的产量。方法:对表达载体中DHFR基因表达调控序列进行一系列的删除突变和点突变后,构建不同的嵌合抗体表达载体。用这些载体转染CHO细胞并以递增量... 目的:提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体在二氢叶酸还原酶缺陷的CHO细胞株(CHO/DHFR-)中表达的产量。方法:对表达载体中DHFR基因表达调控序列进行一系列的删除突变和点突变后,构建不同的嵌合抗体表达载体。用这些载体转染CHO细胞并以递增量的氨甲喋呤(MTX)筛选,用ELISA法测定每个加压水平的各组细胞中抗体的表达水平。结果:通过对表达载体中DHFR基因表达调控序列的突变,使DHFR的基础表达水平产生了不同程度的弱化。转染CHO细胞后,可明显提高MTX加压增加抗体表达的效果,抗体表达水平的增加基本与DHFR基因的弱化程度呈正相关。从弱化程度最高的pWS2-BDI组中,我们筛选得到表达量达55μg/(106细胞·24 h)的高表达细胞株,经锌离子进一步诱导后,表达量可达100μg/(106细胞·24 h)以上。结论:弱化表达载体中DHFR的表达,可提高MTX对工程抗体表达的增加效果。 展开更多
关键词 载体 DHFR基因 表达 抗体 CHO细胞
下载PDF
Effect of naked eukaryotic expression plasmid encoding rat augmenter of liver regeneration on acute hepatic injury and hepatic failure in rats 被引量:10
18
作者 Li-MeiZhang Dian-WuLiu +4 位作者 Jian-BoLiu Xiao-LinZhang Xiao-BoWang Long-MeiTang Li-QinWang 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2005年第24期3680-3685,共6页
AIM: To study the protective effect of eukaryotic expression plasmid encoding augmenter of liver regeneration (ALR) on acute hepatic injury and hepatic failure in rats. METHODS: The PCR-amplified ALR gene was recombin... AIM: To study the protective effect of eukaryotic expression plasmid encoding augmenter of liver regeneration (ALR) on acute hepatic injury and hepatic failure in rats. METHODS: The PCR-amplified ALR gene was recombined with pcDNA3 plasmid, and used to treat rats with acute hepatic injury. The rats with acute hepatic injury induced by intraperitoneal injection of 2 mL/kg 50% carbon tetrachloride (CCl4) were randomly divided into saline control group and recombinant pcDNA3-ALR plasmid treatment groups. Recombinant pcDNA3-ALR plasmid DNA (50 or 200 μg/kg) was injected into the rats with acute hepatic injury intravenously, intraperitoneally, or intravenously and intraperitoneally in combination 4 h after CCl4 administration, respectively. The recombinant plasmid was injected once per 12 h into all treatment groups four times, and the rats were decapitated 12 h after the last injection. Hepatic histopathological alterations were observed after HE staining, the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in liver tissue was detected by immunohistochemical staining, and the level of serum aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) was determined by biochemical method. The recombinant plasmid DNA (200 μg/kg) and saline were intraperitoneally injected into the rats with acute hepatic failure induced by intraperitoneal injection of 4 mL/kg 50% CCl4 after 4 h of CCl4 administration, respectively. Rats living over 96 h were considered as survivals.RESULTS: The sequence of ALR cDNA of recombinant pcDNA3-ALR plasmid was accordant with the reported sequence of rat ALR cDNA. After the rats with acute hepatic injury were treated with recombinant pcDNA3-ALR plasmid, the degree of liver histopathological injury markedly decreased. The pathologic liver tissues, in which hepatic degeneration and necrosis of a small amount of hepatocytes and a large amount of infiltrating inflammatory cells were observed, and they became basically normal in the most effective group after four times of injection 展开更多
关键词 ALR Acute hepatic injury Hepatic failure Gene therapy
下载PDF
人β-防御素3基因在COS-7细胞中的表达 被引量:12
19
作者 庹晓晔 柴家科 +2 位作者 徐明达 陈璧 盛志勇 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2004年第4期344-346,共3页
目的 :构建人 β 防御素 3(hBD3)的真核表达载体 ,建立稳定表达hBD3的细胞株。 方法 :用EcoRⅠ酶切含有hBD3全长基因的pGEM hBD3重组质粒 ,获得其编码区全长序列 ,将其连接入EcoRⅠ预处理过的pcDNA3中 ,转化大肠杆菌 ,酶切鉴定筛选出插... 目的 :构建人 β 防御素 3(hBD3)的真核表达载体 ,建立稳定表达hBD3的细胞株。 方法 :用EcoRⅠ酶切含有hBD3全长基因的pGEM hBD3重组质粒 ,获得其编码区全长序列 ,将其连接入EcoRⅠ预处理过的pcDNA3中 ,转化大肠杆菌 ,酶切鉴定筛选出插入方向正确的转化子。采用脂质体转染法将重组pcDNA3 hBD3真核表达载体导入COS 7细胞 ,用G4 18进行抗性筛选 ,用RT PCR和Western印迹检测目的基因hBD3的mRNA和蛋白表达水平。结果与结论 :构建的pcDNA3 hBD3真核表达载体转染COS 7细胞后可稳定表达hBD3的mRNA和蛋白 ,且蛋白主要以分泌形式存在于培养上清中。 展开更多
关键词 人β—防御素3 表达 基因转染 细胞
原文传递
HBV靶向核糖核酸酶真核表达载体的构建及其在2.2.15细胞内的表达 被引量:9
20
作者 李英辉 刘军 薛采芳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期217-220,共4页
目的 构建人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素(hEDN)与乙肝病毒核心蛋白 (HBVc)的融合真核表达载体(该融合蛋白即为构建的靶向核糖核酸酶 ) ,抑制乙肝病毒在细胞内的复制。方法 分别从HL 6 0细胞和 2 2 15细胞中提取总RNA ,用RT PCR特异... 目的 构建人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素(hEDN)与乙肝病毒核心蛋白 (HBVc)的融合真核表达载体(该融合蛋白即为构建的靶向核糖核酸酶 ) ,抑制乙肝病毒在细胞内的复制。方法 分别从HL 6 0细胞和 2 2 15细胞中提取总RNA ,用RT PCR特异性扩增hEDN及HBVc编码基因 ,将hEDN和HBVc克隆入真核表达载体pcDNA3 1(- ) ,hEDN克隆入原核表达载体 pGEX4T 1,并以纯化的原核表达产物免疫Balb/c小鼠 ,制备特异性抗体。用免疫荧光法检验 pcDNA3 1(- ) /HBVc -hEDN在转染 2 2 15细胞内地表达。结果 成功地构建了hEDN和HBVc的真核融合表达载体 ,并在 2 2 15细胞中较高效地表达。结论 pcDNA3 1(- ) /HBVc hEDN的构建和在 2 2 15细胞内的表达 。 展开更多
关键词 靶向酸酶 乙肝病毒 表达
下载PDF
上一页 1 2 223 下一页 到第
使用帮助 返回顶部