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影响多重PCR扩增效果的因素 被引量：128
1
作者 黄银花 胡晓湘 +4 位作者 徐慰倬 高宇 冯继东 孙汉 李宁 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期65-68,共4页
不同循环参数、PCR缓冲液及反应体积的对比实验表明,循环参数中退火温度和时间、延伸时间及PCR缓冲液的成分影响多重PCR的扩增效果,而反应体积、循环次数对其扩增效果影响较小。
关键词 多重pcr 扩增效果 循环效果 pcr缓冲液 反应体积
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多重PCR—一种高效快速的分子生物学技术 被引量：70
2
作者 陈明洁 方倜 +2 位作者 柯涛 熊志勇 何光源 《武汉理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第10期33-36,共4页
多重PCR是在一个反应体系中同时扩增多个目的片段的PCR技术,具有高特异性、高灵敏度、高效率、低成本的特点,适合大量样本的分析与鉴定。简述了多重PCR的基本原理,综述了多重PCR在医学、遗传学、植物生物学、海洋生物学等生命科学领域... 多重PCR是在一个反应体系中同时扩增多个目的片段的PCR技术,具有高特异性、高灵敏度、高效率、低成本的特点,适合大量样本的分析与鉴定。简述了多重PCR的基本原理,综述了多重PCR在医学、遗传学、植物生物学、海洋生物学等生命科学领域的应用现状,对目的片段选择、引物设计、复性温度和时间等PCR技术要素进行了分析,并介绍了其最新进展。 展开更多
关键词 多重pcr 鉴定 应用 进展
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分子标记辅助培育水稻抗白叶枯病和稻瘟病三基因聚合系 被引量：67
3
作者 倪大虎 易成新 +7 位作者 李莉 汪秀峰 张毅 赵开军 王春连 章琦 王文相 杨剑波 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期100-105,共6页
水稻的白叶枯病和稻瘟病是水稻的两大主要病害，通过分子标记辅助选择与传统的杂交、自交相结合的方法，将抗稻瘟病的Pi9（t）基因和抗白叶枯病的Xa21及Xa23基因聚合到同一株系中，经多代大田或／和温室接菌鉴定、室内标记选择和田间农... 水稻的白叶枯病和稻瘟病是水稻的两大主要病害，通过分子标记辅助选择与传统的杂交、自交相结合的方法，将抗稻瘟病的Pi9（t）基因和抗白叶枯病的Xa21及Xa23基因聚合到同一株系中，经多代大田或／和温室接菌鉴定、室内标记选择和田间农艺性状的筛选，获得了4个三基因聚合且农艺性状优良的株系L17-L20。用不同国家和地区的20个稻瘟病小种、中国流行的7个白叶枯病菌系c1-c7以及安徽省流行的白叶枯病菌系进行大田或，和温室抗病性鉴定，结果显示，株系L17-L20对20个稻瘟病小种均表现出抗性，抗性水平与Pi9（t）基因的供体亲本75-1-127相当，抗谱相同；对白叶枯病的抗性和抗谱与Xa23基因相似，不论在苗期还是在成株期均抗白叶枯病。与Xa21、Xa23基因的供体亲本M12和CBB23相比，成株期的抗性水平有所增强。利用多重PCR技术，在同一PCR反应中可同时选择Pig（t）和Xa21基因，提高了PCR选择效率。 展开更多
关键词 白叶枯病 稻瘟病 Pi9(t)基因 XA21基因 Xa23基因 分子标记辅助选择 多重pcr
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食品中4种肉类成分多重PCR的快速鉴别方法 被引量：62
4
作者 何玮玲 张驰 +2 位作者 杨静 黄明 杨军 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1873-1880,共8页
【目的】建立快速可靠的用于食品中4种肉类(猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉)成分快速鉴别的通用引物多重PCR(universal primers-multiplex PCR,UP-M-PCR)方法。【方法】使用DNeasy试剂盒提取法、SDS-蛋白酶K法和CTAB-蛋白酶K法分别提取肉类中总... 【目的】建立快速可靠的用于食品中4种肉类(猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉)成分快速鉴别的通用引物多重PCR(universal primers-multiplex PCR,UP-M-PCR)方法。【方法】使用DNeasy试剂盒提取法、SDS-蛋白酶K法和CTAB-蛋白酶K法分别提取肉类中总DNA,通过比较提取效率和纯度,确定提取肉类中总DNA的方法;基于动物线粒体细胞色素b基因的差异性位点,设计两组各5条长度不同的多重PCR引物,建立并优化多重PCR反应体系,通过电泳检测扩增产物分子量差异实现4种肉类的快速鉴别;应用优化的多重PCR方法对80份市售食品样本进行盲样检测,验证鉴别方法的准确性。【结果】SDS-蛋白酶K法与DNeasy试剂盒提取法的DNA效率显著优于CTAB-蛋白酶K法;在优化的反应条件下,选择特异性高、序列较长的多重PCR引物可有效地进行食品中猪、牛、羊和鸡源性成分的快速鉴定,检测灵敏度达到皮克级DNA;对市售食品样本的鉴别验证了方法的实用价值。【结论】多重PCR方法精确稳定,可用于食品中多种动物源性成分的快速鉴别。 展开更多
关键词 多重pcr 鉴别 猪肉 牛肉 羊肉 鸡肉
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玉米通用SSR核心引物筛选及高通量多重PCR复合扩增体系建立 被引量：58
5
作者 王凤格 赵久然 +6 位作者 戴景瑞 易红梅 匡猛 孙艳美 于新艳 郭景伦 王璐 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第23期2738-2746,共9页
利用国内15个代表性自交系及15个来自国家区域试验的玉米杂交种进行实验室复筛,并对玉米数据库MaizeGDB上已公布的1900个玉米SSR(simple sequence repeats)引物进行文献初筛,确定了500个高多态性引物,建立了玉米高多态性引物遗传图谱;... 利用国内15个代表性自交系及15个来自国家区域试验的玉米杂交种进行实验室复筛,并对玉米数据库MaizeGDB上已公布的1900个玉米SSR(simple sequence repeats)引物进行文献初筛,确定了500个高多态性引物,建立了玉米高多态性引物遗传图谱;并按照在玉米全基因组均匀分布的原则,从每条染色体上选取10个引物,累计100个,作为一套通用的SSR核心引物,推荐供今后一般研究优先选用.对这套核心引物按照统一的标准进行重新设计并构建基于毛细管五色荧光检测系统的高通量多重PCR复合扩增体系,已经建立了两套10重PCR组合,每套组合均由每条染色体上选取1个引物,累计10个构成. 展开更多
关键词 玉米 核心引物 SSR 多重pcr 毛细管电泳 荧光标记
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靶向测序基因型检测(GBTS)技术及其应用 被引量：55
6
作者 徐云碧 杨泉女 +10 位作者 郑洪建 许彦芬 桑志勤 郭子锋 彭海 张丛 蓝昊发 王蕴波 吴坤生 陶家军 张嘉楠 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第15期2983-3004,共22页
借助于分子标记进行基因型检测的技术在生物遗传改良等领域发挥着重要的作用。国际跨国种业公司凭借其高通量、自动化、大规模的共享检测平台,基因型检测技术得到广泛应用。随着从3G时代的高成本固相芯片和随机测序式基因型检测(genotyp... 借助于分子标记进行基因型检测的技术在生物遗传改良等领域发挥着重要的作用。国际跨国种业公司凭借其高通量、自动化、大规模的共享检测平台,基因型检测技术得到广泛应用。随着从3G时代的高成本固相芯片和随机测序式基因型检测(genotyping by sequencing,GBS)发展到成本低、对检测平台要求较低、基于靶向测序基因型检测(genotyping by target sequencing,GBTS)的液相芯片,基因型检测技术完成了向4G时代的转变。在本文中首先介绍了两项最新的GBTS技术(基于多重PCR的GenoPlexs和基于液相探针捕获的GenoBaits)及其原理。同时,发展了可以在单个扩增子内检测多个SNP,称之为多聚单核苷酸多态性(multiple single-nucleotide-polymorphism cluster,mSNP或multiple dispersed nucleotide polymorphism,MNP)的技术,极大地提高了目标位点(扩增子)内变异的检测效率。与GBS和固相芯片相比,GBTS技术具有平台广适性、标记灵活性、检测高效性、信息可加性、支撑便捷性和应用广谱性。同一款标记集(例如玉米40K mSNP),可以获得3种不同的标记形式(40K mSNP、260K SNP和754K单倍型);并可以根据应用场景的需求,通过控制测序深度获得多种不同的标记密度(1-40K mSNP)。GenoPlexs和GenoBaits 2种技术相结合,可广泛应用于生物进化、遗传图谱构建、基因定位克隆、标记性状关联检测(全基因组关联分析——GWAS和混合样本分析——BSA)、后裔鉴定、基因渐渗、基因累加、品种权保护、品种质量监测、转基因成分/基因编辑/伴生生物检测等领域。目前,已经在20余种主要农作物、蔬菜以及部分动物和微生物中开发了GBTS标记50余套,并已广泛应用于上述领域。最后,展望了与未来GBTS应用相关的几个问题,包括便携式、自动化、高通量、智能化检测平台;根据用户需求定制的可变密度、多功能分子检测;GBTS与其他技术(KASP、高密度芯片� 展开更多
关键词 靶向测序基因型检测(GBTS) 多重pcr 液相探针 多聚单核苷酸多态性(mSNP) 多个分散型核苷酸多态性(MNP) 单倍型 遗传改良 开源育种
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沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR检测 被引量：50
7
作者 许一平 成炜 +1 位作者 邵彦春 陈福生 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期89-94,共6页
根据沙门菌invA基因、大肠杆菌phoA基因和金黄色葡萄球菌nuc基因序列，设计3对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化。结果表明3对引物能特异地扩增出284bp、622bp、484bp的目的条带；最佳反应条件为沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡... 根据沙门菌invA基因、大肠杆菌phoA基因和金黄色葡萄球菌nuc基因序列，设计3对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化。结果表明3对引物能特异地扩增出284bp、622bp、484bp的目的条带；最佳反应条件为沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的引物浓度分别为40nmol／L、40nmol／L、80nmol／L，Mg^2＋浓度2．4mmol／L，dNTP浓度2001μmol／L，Taq DNA聚合酶1.5u，退火温度55．0℃-57．4℃之间；在此条件下多重PCR同时检测DNA的敏感性分别是10．2pg、10．2pg、102．0pg，检测时间4h。建立的多重PCR是一种敏感、特异、准确、快速的方法，为同时检测食品中沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌奠定了基础。 展开更多
关键词 多重pcr 沙门菌 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌
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弯曲菌多重PCR检测方法的建立及其初步应用 被引量：50
8
作者 何蕊 黄金林 +3 位作者 许海燕 苏洁 潘志明 焦新安 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期5-8,共4页
以16S rRNA、mapA和ceuE为靶基因,建立检测空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的多重PCR方法。特异性试验能分别扩增出空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的特异性条带,其他参考菌株均未扩增出条带;敏感性试验表明,基于增菌培养和选择性培养的多重PCR方法对弯... 以16S rRNA、mapA和ceuE为靶基因,建立检测空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的多重PCR方法。特异性试验能分别扩增出空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的特异性条带,其他参考菌株均未扩增出条带;敏感性试验表明,基于增菌培养和选择性培养的多重PCR方法对弯曲菌检测限为10 mL或10 g模拟污染样品,最低可检测0.925 pg.μL-1空肠弯曲菌DNA和1.050 pg.μL-1结肠弯曲菌DNA。以国家标准为参照,应用该方法对180份生鲜鸡肉样品进行检测,结果表明多重PCR方法具有快速、简便、特异性强和灵敏度高等特点,可克服传统生化鉴定和血清学方法的不足,为弯曲菌检测提供新的技术。 展开更多
关键词 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 多重pcr 快速检测
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多重PCR技术在病原检测中的应用 被引量：51
9
作者 赵红庆 苑锡铜 黄留玉 《生物技术通讯》 CAS 2007年第5期863-865,共3页
多重PCR能够同时扩增不同片段,具有普通PCR方法不可比拟的优势。简要论述了多重PCR在细菌病原体的检测、病毒病原体的检测、支原体和衣原体及寄生虫的检测、微生物耐药性检测等方面的应用,分析了多重PCR的影响因素及条件优化,并进一步... 多重PCR能够同时扩增不同片段,具有普通PCR方法不可比拟的优势。简要论述了多重PCR在细菌病原体的检测、病毒病原体的检测、支原体和衣原体及寄生虫的检测、微生物耐药性检测等方面的应用,分析了多重PCR的影响因素及条件优化,并进一步综述了多重PCR的应用前景。 展开更多
关键词 多重pcr 病原 检测 影响因素
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PCR技术研究进展 被引量：40
10
作者 陶生策 张治平 张先恩 《生物工程进展》 CSCD 2001年第4期26-29,共4页
PCR(Polymerasechainreaction)在生命科学研究及相关诸多领域已经得到了广泛应用。本文对PCR技术的最新进展作一简要综述 ,包括 :热循环仪的改进 ,引物的软件设计及网络设计 ,各种DNA聚合酶体系及其特性 ,多种PCR(MultiplexPCR) ,DNAshu... PCR(Polymerasechainreaction)在生命科学研究及相关诸多领域已经得到了广泛应用。本文对PCR技术的最新进展作一简要综述 ,包括 :热循环仪的改进 ,引物的软件设计及网络设计 ,各种DNA聚合酶体系及其特性 ,多种PCR(MultiplexPCR) ,DNAshuffling ,PCR芯片 ,固相PCR和电子PCR(ElectronicPCR) 展开更多
关键词 多重pcr DNAshuffling pcr芯片 固相pcr 电子pcr 研究进展
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多重PCR检测猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒 被引量：43
11
作者 刘建柱 崔玉东 +3 位作者 李鹏 王志强 石星明 朴范泽 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期535-537,共3页
根据猪瘟病毒 ( CSFV)、猪细小病毒 ( PPV)和猪伪狂犬病病毒 ( PRV) 3种病原体的基因保守序列 ,分别设计了与CSFV的 E2基因、PPV的 VP2基因和 PRV的 g 基因序列互补的 3对引物。用这 3对引物对人为混合的样品中的PPV和 PRV的 DNA模板及 ... 根据猪瘟病毒 ( CSFV)、猪细小病毒 ( PPV)和猪伪狂犬病病毒 ( PRV) 3种病原体的基因保守序列 ,分别设计了与CSFV的 E2基因、PPV的 VP2基因和 PRV的 g 基因序列互补的 3对引物。用这 3对引物对人为混合的样品中的PPV和 PRV的 DNA模板及 CSFV反转录后的 c DNA模板进行多重 PCR扩增和多重 PCR反应条件的优化 ,结果同时得到 3条与试验设计相符的 2 88bp( CSFV)、5 75 bp( PPV)和 70 0 bp( PRV)特异性条带 ;敏感性检测结果表明 ,该多重 PCR可以检测到 14 .5 ng/ L 的 CSFV、2 7.1pg/ L 的 PPV、31.4 ng/ L 的 展开更多
关键词 猪瘟病毒 细小病毒 伪狂犬病病毒 检测 多重pcr 早期诊断
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多重PCR检测奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和酵母菌方法的建立与应用 被引量：40
12
作者 马保臣 秦卓明 +2 位作者 蔡玉梅 董玉兰 柴同杰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1202-1208,共7页
参照GenBank发表的序列,在金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和停乳链球菌16S rRNA与23S rRNA之间的区域设计了3对引物,参照念珠菌和隐球菌的18S rRNA的序列设计1对引物,建立了检测金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和酵母真菌4种乳腺... 参照GenBank发表的序列,在金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和停乳链球菌16S rRNA与23S rRNA之间的区域设计了3对引物,参照念珠菌和隐球菌的18S rRNA的序列设计1对引物,建立了检测金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和酵母真菌4种乳腺炎主要致病菌的多重PCR方法。参照Skladny的方法制备模拟了细菌感染临床标本。结果表明:本试验建立的多重PCR方法具有较好的特异性,多重PCR方法检测乳样中的金黄色葡萄球菌的细菌最小浓度为104CFU/mL,检测无乳链球菌、停乳链球菌和酵母真菌的细菌最小浓度分别为102CFU/mL、103CFU/mL和103CFU/mL。通过对采自临床型乳腺炎(46个)和隐性乳腺炎(167个)动物共计213个乳样分别用传统细菌学培养法和多重PCR方法进行检测,多重PCR对金黄色葡萄球菌和酵母真菌的检测具有更高的检出率(P<0.01),但该方法对无乳链球菌和停乳链球菌的检出率与培养法差异不显著(P>0.05)。 展开更多
关键词 多重pcr 乳腺炎 金黄色葡萄球菌 无乳链球菌 停乳链球菌 酵母真菌
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致病性嗜水气单胞菌多重PCR检测方法的建立 被引量：42
13
作者 饶静静 李寿崧 +2 位作者 黄克和 江树勋 潘群兴 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期749-755,共7页
致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是近年中国各地大规模流行的淡水养殖鱼类暴发性疾病的主要病原,本研究针对GenBank中登录的致病性嗜水气单胞菌的气溶素基因(hlyA)、溶血素基因(aerA)以及为气单胞菌属所特有的内参照基因16S r... 致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是近年中国各地大规模流行的淡水养殖鱼类暴发性疾病的主要病原,本研究针对GenBank中登录的致病性嗜水气单胞菌的气溶素基因(hlyA)、溶血素基因(aerA)以及为气单胞菌属所特有的内参照基因16S rRNA保守区设计了3对特异性引物,通过进行多重PCR反应体系优化,多重PCR产物的测序鉴定与特异性和敏感性实验,试图建立一种检测致病性嗜水气单胞菌的多重PCR检测方法。对8株嗜水气单胞菌、16株相关菌株进行多重PCR检测,结果显示,非致病性分离株均未扩增出毒力基因hlyA和aerA,而致病性分离株则至少含有hlyA基因;对40份送检的水产动物样品进行多重PCR检测,结果与常规微生物学检测符合率为97.5%。多重PCR检测方法具有较高的敏感性与特异性,最低可检测模板量为10 ng的样品。该方法的建立对水产动物嗜水气单胞菌病的快速诊断和分子流行病学的调查有重要意义。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 hlyA基因 aerA基因 多重pcr
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应用多重PCR鉴定微生物肥料常用芽孢杆菌 被引量：41
14
作者 曹凤明 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 +8 位作者 沈德龙 李俊 关大伟 姜昕 李力 冯瑞华 杨小红 陈慧君 葛一凡 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期651-656,共6页
【目的】枯草群芽孢杆菌中枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)和短小芽孢杆菌(B.pumilus)是微生物肥料中常用菌种,用传统方法鉴定费时费力,有必要建立检测和鉴定这... 【目的】枯草群芽孢杆菌中枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)和短小芽孢杆菌(B.pumilus)是微生物肥料中常用菌种,用传统方法鉴定费时费力,有必要建立检测和鉴定这些芽孢杆菌的种特异性PCR方法。【方法】利用已登录的gyrA、rpoA和16SrRNA基因序列分别设计和筛选上述菌种的特异引物并建立多重PCR反应体系。【结果】以基因组DNA为模板,扩增芽孢杆菌、类芽孢杆菌和短芽孢杆菌3属15种的标准菌株(共33株),4个目标种分别产生了大小不同的唯一的产物,除个别种与短小芽孢杆菌引物有交叉反应外,其余参考菌株均为阴性。从23株枯草群菌株的基因组DNA扩增发现,PCR鉴定与常规鉴定结果一致。【结论】本文建立的多重PCR方法具有较好的特异性,可快速准确鉴定枯草群的4个种,在微生物肥料检测方面有良好的实用前景。 展开更多
关键词 多重pcr 种特异引物 鉴定 枯草群芽孢杆菌 微生物肥料
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用多重PCR鉴别猪伪狂犬病野毒与疫苗毒的研究 被引量：38
15
作者 刘丽娜 何启盖 +3 位作者 陈焕春 刘正飞 张松林 汪招雄 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第2期95-98,共4页
根据基因库中的猪伪狂犬病病毒(PRV)各基因的序列,设计了与PRV的 gB、gD、gE基因序列互补的3对引物。对样品中的PRV DNA模板进行了多重PCR扩增及反应条件的优化,结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带,分别为549 bp(gB)、429 bp(gD)... 根据基因库中的猪伪狂犬病病毒(PRV)各基因的序列,设计了与PRV的 gB、gD、gE基因序列互补的3对引物。对样品中的PRV DNA模板进行了多重PCR扩增及反应条件的优化,结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带,分别为549 bp(gB)、429 bp(gD)、366 bp(gE)。用这3对引物对三基因缺失疫苗毒的样品DNA模板进行多次多重 PCR扩增,均能稳定得到与设计相符合的2条特异性条带。敏感性试验结果表明,多重 PCR可以检测到 106 pg三基因缺失疫苗毒或756 pg PRV野毒的核酸模板量。特异性试验结果表明,以正常对照细胞及猪圆环病毒和猪细小病毒DNA为模板进行多重PCR扩增,均无任何条带。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病 基因缺失疫苗 多重pcr PRV 引物 GE基因 酸模 扩增 鉴别 特异性
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多重PCR检测无公害畜禽肉和水产品中4种致病菌 被引量：33
16
作者 杨小鹃 吴清平 +1 位作者 张菊梅 吴慧清 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期95-101,共7页
建立无公害畜禽肉和水产品中肠出血性大肠杆菌(EHEC)、沙门氏菌、副溶血性弧菌(VP)和单核细胞增生性李斯特氏菌(LM)的多重PCR检测方法,为这些致病菌的快速诊断提供实验依据。选择分别针对EHEC溶血素基因hlyAB、副溶血性弧菌属保守序列t... 建立无公害畜禽肉和水产品中肠出血性大肠杆菌(EHEC)、沙门氏菌、副溶血性弧菌(VP)和单核细胞增生性李斯特氏菌(LM)的多重PCR检测方法,为这些致病菌的快速诊断提供实验依据。选择分别针对EHEC溶血素基因hlyAB、副溶血性弧菌属保守序列toxR基因、沙门氏菌侵袭基因invA和LM的iap基因特异的4对引物,先分别进行单重PCR扩增,再同时加入4对引物进行多重PCR扩增,扩增产物经测序验证。建立的多重PCR方法可简便、快速、灵敏地实现对EHEC、LM、沙门氏菌和VP的同时检测,在畜禽肉和水产品中的检测灵敏度达到103cfu/mL。 展开更多
关键词 食源性致病菌 多重pcr 无公害畜禽肉和水产品
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饮用水中5种致病菌多重PCR技术检测研究 被引量：37
17
作者 范宏英 吴清平 +3 位作者 吴若菁 寇晓霞 张菊梅 吴慧清 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期102-107,共6页
沙门氏菌(Salm onellasp.)、志贺氏菌(Shigellasp.)、绿脓杆菌(Pseudom onasaeruginosa)、肠出血型大肠杆菌O157(E terohaem orrhagicO157)和副溶血弧菌(Vibrio rah-aem olyticus)是5种饮用水中不得检出食源性致病菌,根据它们的毒素基... 沙门氏菌(Salm onellasp.)、志贺氏菌(Shigellasp.)、绿脓杆菌(Pseudom onasaeruginosa)、肠出血型大肠杆菌O157(E terohaem orrhagicO157)和副溶血弧菌(Vibrio rah-aem olyticus)是5种饮用水中不得检出食源性致病菌,根据它们的毒素基因、高度保守基因及特异性基因,设计合成5对寡核苷酸引物,应用PCR技术对10个属的30株细菌进行引物特异性检测。通过对多重PCR反应体系、条件进行优化,显著提高了检测灵敏度。初步应用于水样分析中,极大的缩短了检测时间、降低了成本。实验结果表明:5对寡核苷酸引物都具较高的特异性和专一性,多重PCR检测灵敏度达到101~102cfu,检测需5~6h,在水样检测的初步应用中得到了均一、稳定、清晰的结果,可推广应用于环境监测、水源检测、食品卫生监督、商品检验检疫等领域。 展开更多
关键词 多重pcr 食源性致病菌 检测
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多重PCR技术研究进展 被引量：40
18
作者 钟泽澄 王进 张师音 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期171-179,共9页
多重PCR(Multiplex polymerase chain reaction,MPCR)是指通过一次PCR反应同时对多个靶标进行扩增,结合一定的检测手段对扩增产物进行检测从而实现对多个靶标进行诊断的技术。MPCR具有高效率、高通量、低成本的特性而被深入研究。目前M... 多重PCR(Multiplex polymerase chain reaction,MPCR)是指通过一次PCR反应同时对多个靶标进行扩增,结合一定的检测手段对扩增产物进行检测从而实现对多个靶标进行诊断的技术。MPCR具有高效率、高通量、低成本的特性而被深入研究。目前MPCR技术已被广泛应用于科学研究和疾病诊断等领域,文中从MPCR扩增与检测两方面概述了MPCR技术发展及其应用,讨论了MPCR技术的优点及存在的问题,并且提出将反应体系分隔成小液滴或结合管式对流PCR(CapillaryconvectivePCR,CCPCR)技术的方式有望提高固相载体表面的扩增效率,从而开发出扩增效率高、一致性好、体系稳定、检测重数高的多重PCR技术。 展开更多
关键词 多重pcr 熔解曲线 微流控 膜层析 Luminex液相芯片
原文传递
沙门氏菌多重PCR检测方法的建立 被引量：33
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作者 邵碧英 陈彬 +2 位作者 汤敏英 吴谦 张体银 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第10期489-492,共4页
采用CTAB/NaCl法提取沙门氏菌及对照菌株的基因组DNA。对引物浓度、TaqDNA聚合酶用量进行优化,建立了沙门氏菌属特异基因-hut基因(495bp)、hilA基因(490bp)、invA基因(284bp)和hns基因(152bp)间的多重PCR检测方法,并进行了灵敏度测试。... 采用CTAB/NaCl法提取沙门氏菌及对照菌株的基因组DNA。对引物浓度、TaqDNA聚合酶用量进行优化,建立了沙门氏菌属特异基因-hut基因(495bp)、hilA基因(490bp)、invA基因(284bp)和hns基因(152bp)间的多重PCR检测方法,并进行了灵敏度测试。结果表明,建立的多重PCR检测结果与预期一致,二重PCR的检测灵敏度与单一PCR的一致,三重PCR检测灵敏度有所下降。 展开更多
关键词 沙门氏菌 基因组DNA 多重pcr 检测灵敏度
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猪链球菌2型和9型菌株的多重PCR检测 被引量：32
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作者 刘军 冯书章 +3 位作者 尹铁勇 孙洋 郭学军 祝令伟 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第6期510-514,共5页
目的建立一种快速、特异且敏感的检测方法。方法以猪链球菌2型和9型的荚膜多糖抗原编码基因簇中的cps2J和cps9H基因、猪链球菌2型的主要毒力因子编码基因epf和mrp为靶基因设计了四对引物,建立了检测猪链球菌的多重PCR反应体系。用编码cp... 目的建立一种快速、特异且敏感的检测方法。方法以猪链球菌2型和9型的荚膜多糖抗原编码基因簇中的cps2J和cps9H基因、猪链球菌2型的主要毒力因子编码基因epf和mrp为靶基因设计了四对引物,建立了检测猪链球菌的多重PCR反应体系。用编码cps2J和cps9H基因的引物可对猪链球菌2型和9型进行分型,用编码epf和mrp基因的引物可鉴定猪链球菌2型的主要毒力相关基因。用该多重PCR反应体系对10株猪链球菌分离株进行了鉴定,并以其它几株阴性对照菌株进行对照,检测了该反应体系的特异性。以新鲜培养的猪链球菌2型菌株进行倍比稀释后进行菌落计数,并将之作为模板,对该多重PCR反应体系检测的敏感性进行了鉴定。结果10株猪链球菌分离株中有5株是9型菌株,另有5株是2型菌株,2型菌株有2种基因型:3株cps2+mrp+epf+型,2株cps2+mrp-epf-型。同时还表明该多重PCR反应体系有高度的特异性和敏感性,当模板含量在10cfu时仍能检出目的菌株。结论该多重PCR反体系是一种检测和鉴定猪链球菌2型的快速、特异且敏感的方法。 展开更多
关键词 猪链球菌 多重pcr 毒力基因
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