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应用多聚酶链式反应（PCR）技术检测和定量分析柑桔黄龙病病原 被引量：93
1
作者 田亚南 柯穗 柯冲 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期243-250,共8页
应用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）技术对柑桔黄龙病病原进行检测和定量分析。研究结果表明：ＰＣＲ技术能准确、快速地检测出田间和温室内罹病的柑桔、长春花以及带菌柑桔木虱样本中的柑桔黄龙病病原（ＢＬＯ），而健康植株和柑桔木虱样本... 应用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）技术对柑桔黄龙病病原进行检测和定量分析。研究结果表明：ＰＣＲ技术能准确、快速地检测出田间和温室内罹病的柑桔、长春花以及带菌柑桔木虱样本中的柑桔黄龙病病原（ＢＬＯ），而健康植株和柑桔木虱样本则呈阴性反应。采用的ＰＣＲ引物（Ｐｒｉｍｅｒｓ）是根据柑桔黄龙病病原亚洲株系的ＤＮＡ序列（Ｉｎ－２．６，基因库号码：Ｍ９４９１）设计的。应用竞争性定量多聚酶链式反应（Ｑ－ＰＣＲ）方法能测定病原在不同样品中的含量。该技术关键在于：病原ＤＮＡ和浓度系列稀释后的竞争物ＤＮＡ，在同一试管中进行ＤＮＡ扩增反应时，共用相同的引物。由于彼此互相竞争反应引物的结果，病原的ＰＣＲ产物和竞争物的ＰＣＲ产物在数量上呈反向线性相关。因竞争物的浓度为已知，便可从线性关系中推算出病原的含量。 展开更多
关键词 柑桔 黄龙病 多聚酶链式反应 柑桔类果树
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PCR法制备地高辛标记探针斑点杂交检测白斑综合症病毒(WSSV) 被引量：24
2
作者 雷质文 史成银 +3 位作者 黄倢 杨冰 俞开康 战文斌 《青岛海洋大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2001年第2期201-204,共4页
用 PCR法成功制备了 DIG标记探针 ,探针长度为 547bp,探针的产量为 2 1.6 ng/ μL。此探针与随机引物合成探针检测样品灵敏度相近。用此探针核酸斑点杂交法检测了 54尾中国对虾。结果表明 :此探针在对白斑综合症病毒的检测。
关键词 多聚酶链式反应 核酸探针 白斑综合症病毒 中国对虾
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国内外食品微生物快速检测技术应用进展 被引量：30
3
作者 闫雪 姚卫蓉 钱和 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第6期269-272,共4页
本文对目前国际上公认且具有良好发展空间的食品微生物检测技术和特点进行综述。包括:多聚酶链式反应PCR、实时定量PCR(real-timePCR)技术、酶联免疫法ELISA、PCR-ELISA技术、直接表面荧光滤膜计数技术、生物感应器biosensor、最近似数... 本文对目前国际上公认且具有良好发展空间的食品微生物检测技术和特点进行综述。包括:多聚酶链式反应PCR、实时定量PCR(real-timePCR)技术、酶联免疫法ELISA、PCR-ELISA技术、直接表面荧光滤膜计数技术、生物感应器biosensor、最近似数测定方法MPN以及Dipstick。 展开更多
关键词 多聚酶链式反应 实时定量PCR 酶联免疫法 PCR.ELISA技术 DEFT:生物感应器 最近似数测定方法 DIPSTICK
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微生物生态学中分子生物学方法及T-RFLP技术研究 被引量：25
4
作者 王洪媛 管华诗 江晓路 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第8期42-47,共6页
根据微生物基因 (DNA)多态性来研究微生物的多样性 ,是建立在多聚酶链式反应 (PCR)基础之上分子生物学的新方法 ,克服了传统微生物培养方法的限制。从理论、实验及应用角度出发 ,介绍了几种在微生物生态学中应用较为广泛的分子生物学技... 根据微生物基因 (DNA)多态性来研究微生物的多样性 ,是建立在多聚酶链式反应 (PCR)基础之上分子生物学的新方法 ,克服了传统微生物培养方法的限制。从理论、实验及应用角度出发 ,介绍了几种在微生物生态学中应用较为广泛的分子生物学技术 ;详细阐述了微生物生态学中分子生物学的一种新研究方法———末端限制性片段长度多态性 (T -RFLP)技术 ,该技术作为一种研究微生物群落特征的理想方法已经越来越受到人们的重视。 展开更多
关键词 微生物生态学 分子生物学 T-RFLP技术 多样性 多聚酶链式反应
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上海市食源性金黄色葡萄球菌分布状况 被引量：34
5
作者 李自然 施春雷 +1 位作者 宋明辉 史贤明 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第1期268-271,共4页
采集上海市食品样品(生牛乳、生鲜肉、水产品、速冻食品、果蔬、豆制品)505份,按国标GB 4789.10—2010《金黄色葡萄球菌检验》方法进行金黄色葡萄球菌的分离和鉴定,并利用PCR技术进行进一步验证。结果表明:505份食品样品中有117份检出... 采集上海市食品样品(生牛乳、生鲜肉、水产品、速冻食品、果蔬、豆制品)505份,按国标GB 4789.10—2010《金黄色葡萄球菌检验》方法进行金黄色葡萄球菌的分离和鉴定,并利用PCR技术进行进一步验证。结果表明:505份食品样品中有117份检出了金黄色葡萄球菌,总检出率为23.2%,其中生鲜肉检出率最高,为32.9%;其次为生牛乳和速冻食品,分别为26.3%和26.7%;其他食品中金黄色葡萄球菌的检出率相对较低。该实验结果基本上反映了上海市各类食品中金黄色葡萄球菌的分布状况,为监控金黄色葡萄球菌引起的食物中毒及追溯污染源提供参考。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 分离鉴定 食品 多聚酶链式反应
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柑桔黄龙病诊断法的研究进展 被引量：26
6
作者 田亚南 柯穗 柯冲 《福建农业学报》 CAS 1998年第1期27-35,共9页
研究柑桔黄龙病的困难，在于它的病原无法人工培养。因此，长期以来对黄龙病的诊断，主要依据典型的黄梢和叶片斑驳症状。在柑桔园管理不良，缺乏营养或其它病虫混合为害时，便难依据症状作出正确的诊断。这是造成对黄龙病认识上种种混... 研究柑桔黄龙病的困难，在于它的病原无法人工培养。因此，长期以来对黄龙病的诊断，主要依据典型的黄梢和叶片斑驳症状。在柑桔园管理不良，缺乏营养或其它病虫混合为害时，便难依据症状作出正确的诊断。这是造成对黄龙病认识上种种混淆的主要原因。７０年代应用电镜观察到黄龙病病原（ＢＬＯ）之后，电镜便成为诊断黄龙病的重要手段。但因病原在病树体内的浓度较低，分布又不均匀，致电镜的检出率偏低。８０年代，应用兔丝子将黄龙病ＢＬＯ转到长春花上增殖、提纯，作为抗原，制备了多抗和单抗的血清，由于多抗血清的效价很低和单抗血清的专化性太狭，均难用于诊断。最近，在病原ＤＮＡ序列测定的基础上，合成了引物Ｐ１及Ｐ２，并在引物Ｐ１及Ｐ２之间合成另一段ＤＮＡ片段Ｐ３作为探针。使ＰＣＲ（多聚酶链式反应）及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术可能用于黄龙病的诊断。研究结果证明ＰＣＲ技术比其他方法具有更大优点，能快速而准确地检测出病原；而Ｑ－ＰＣＲ（竞争性定量多聚酶链式反应）方法则能测定病原在不同样品中的含量，进行定量分析。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 电镜 抗血清 多聚酶链式反应
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PCR引物设计 被引量：13
7
作者 王艳秋 张培军 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 1995年第5期9-10,共2页
关键词 PCR 多聚酶链式反应 分子克隆系统 分子生物学
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多聚酶链式反应检测海南槟榔黄化病 被引量：17
8
作者 罗大全 陈慕容 +1 位作者 叶沙冰 刘志昕 《热带农业科学》 2002年第6期13-16,共4页
应用多聚酶链式反应(PCR)技术检测海南槟榔黄化病。结果表明:槟榔黄化型黄化病病株样品分别用2组植原体(Phytoplasmas)通用引物(R16mF/R16mR2、R16mF2/R16R2和1067/1068)测定,均出现特异的PhytoplasmasDNA谱带,呈阳性结果;而健康植株相... 应用多聚酶链式反应(PCR)技术检测海南槟榔黄化病。结果表明:槟榔黄化型黄化病病株样品分别用2组植原体(Phytoplasmas)通用引物(R16mF/R16mR2、R16mF2/R16R2和1067/1068)测定,均出现特异的PhytoplasmasDNA谱带,呈阳性结果;而健康植株相应组织样品(对照)和其它样品则均未出现上述谱带,呈阴性反应。因此,黄化型的槟榔黄化病病株组织内存在植原体,植原体是导致槟榔发生黄化型黄化病的病原菌。 展开更多
关键词 多聚酶链式反应 海南槟榔 黄化病 检测 PCR 植原体
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亚硝酸细菌研究进展 被引量：12
9
作者 周娟 李君文 郑金来 《环境科学与技术》 CAS CSCD 2001年第z2期8-10,共3页
从硝化细菌的生长特性 ,分类 ,检测 ,亚硝酸细菌氨单加氧酶等方面概要的叙述了国外在硝化细菌方面研究的进展 。
关键词 亚硝酸细菌 变形菌 多聚酶链式反应 氨单加氧酶
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变性高效液相色谱检测食品中致泻性大肠杆菌 被引量：17
10
作者 徐君怡 曹际娟 +2 位作者 郑秋月 赵昕 闫平平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1526-1531,共6页
【目的】应用多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)技术建立食品中致泻性大肠杆菌的快速检测方法。【方法】分别根据4种致泻性大肠杆菌的特... 【目的】应用多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)技术建立食品中致泻性大肠杆菌的快速检测方法。【方法】分别根据4种致泻性大肠杆菌的特异性毒力因子基因序列设计引物,PCR扩增产物经变性高效液相色谱进行快速检测。以肠产毒性大肠杆菌等32株试验菌株做特异性检测;4种致泻性大肠杆菌标准菌株稀释成不同梯度,做灵敏度检测。【结果】试验结果表明该方法有很好的特异性,且灵敏度高,检测限可达到:肠产毒性大肠杆菌27CFU/mL、肠致病性大肠杆菌33CFU/mL、肠出血性大肠杆菌25CFU/mL、肠侵袭性大肠杆菌42CFU/mL。【结论】该方法可以快速、准确地检测食品中的致泻性大肠杆菌,是食品中病原菌检测的新技术和新方法。 展开更多
关键词 致泻性大肠杆菌 多聚酶链式反应 PCR 变性高效液相色谱 DHPLC
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RT-PCR检测小反刍兽疫病毒核酸方法的建立 被引量：12
11
作者 姚李四 陈颖 +4 位作者 徐宝梁 陈红运 林祥梅 王晶 马晓光 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2006年第5期19-20,共2页
本研究结果显示,在我国实际应用中,先用基于扩增核蛋白基因的普通PCR进行筛选,再用巢式PCR进行排除和鉴定,是为快速、准确、经济的方法。
关键词 小反刍兽疲病毒 核酸 逆转录 多聚酶链式反应
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cDNA末端快速扩增技术的研究进展 被引量：6
12
作者 邬珺超 蒋滢 《氨基酸和生物资源》 CAS 2003年第1期25-31,共7页
cDNA末端快速扩增技术是一种基于多聚酶链式反应的技术 ,它的发展大大便利了应用其它方法获得的部分cDNA序列后克隆全长cDNA 5’和 3’末端的工作。不仅RACE方法能在短时间内得到完整的cDNA末端序列 ,而且一些截短的cDNA末端常常也能在R... cDNA末端快速扩增技术是一种基于多聚酶链式反应的技术 ,它的发展大大便利了应用其它方法获得的部分cDNA序列后克隆全长cDNA 5’和 3’末端的工作。不仅RACE方法能在短时间内得到完整的cDNA末端序列 ,而且一些截短的cDNA末端常常也能在RACE的过程中被扩增 ,而这些截短的产物破坏了全长cDNA克隆的获取。许多研究者对RACE的流程提出了改进方案 ,从而提高了该技术的效力。本文介绍了许多已发表的RACE技术关键步骤的改良 ,包括一些具体有效的操作流程 ,如RNA连接酶介导的RACE/连接锚定PCR等 ,还有其有效性的例证。 展开更多
关键词 CDNA末端快速扩增技术 多聚酶链式反应 全长CDNA序列 截短cDNA末端
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犬瘟热病毒的分离 被引量：10
13
作者 鲜思美 徐在品 +3 位作者 张登祥 吴彤 周碧君 陶玉顺 《山地农业生物学报》 2005年第5期386-389,共4页
对流行病学调查、临床症状检查和血清学(ELISA)检测为阳性的自然发病犬,取肠内容物为病料,采用同步培养方法分别接种于非洲绿猴肾细胞系(Vero)、犬肾细胞系(MDCK)进行病毒的分离。用多聚酶链式反应(RT-PCR)检测感染细胞中的病毒核酸。... 对流行病学调查、临床症状检查和血清学(ELISA)检测为阳性的自然发病犬,取肠内容物为病料,采用同步培养方法分别接种于非洲绿猴肾细胞系(Vero)、犬肾细胞系(MDCK)进行病毒的分离。用多聚酶链式反应(RT-PCR)检测感染细胞中的病毒核酸。结果表明,病料接种Vero细胞、MDCK细胞均产生明显的细胞病变(CPE);用RT-PCR技术检测病毒感染的细胞培养液,扩增出特异性的产物带,扩增出的片段大小分子长为760bp,与预期设计的长度相同。用Vero细胞同步培养从肠内容物中分离出的病毒命名为犬瘟热病毒GZ1株;用MDCK细胞同步培养从另一只犬的肠内容物中分离出的病毒命名为犬瘟热病毒GZ2株。 展开更多
关键词 犬瘟热 病毒 分离 多聚酶链式反应 细胞病变
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DNA分析技术及其在植物研究中的应用 被引量：6
14
作者 邹春静 韩文卿 +1 位作者 盛晓峰 徐文铎 《生态学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期146-151,共6页
从DNA/DNA杂交、RFLP分析、DNA的限制酶图谱和核苷酸序列分析、PCR技术、DNA指纹技术、RAPD分析等六个方面详细描述DNA分析技术在植物学研究中的应用 ,并讨论了DNA分析技术与植物系统学的关系。
关键词 DNA系统学 植物系统学 多聚酶链式反应 限制酶图谱 内转录间隔区 杂交
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RAPD-PCR稳定性的探索 被引量：6
15
作者 王兵益 孙静贤 +1 位作者 刘开庆 杨小琴 《云南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2003年第4期368-372,共5页
以滇牡丹(Paeoniadelevayi)为实验材料,分别测试了Mg2+、模板DNA、聚合酶、引物等反应成分对产物的影响,以期探索RAPD-PCR体系中各成分对产物的影响,以及各成分之间相互作用的规律,为利用RAPD进行生物学研究的人们提供一些参考.
关键词 RAPD-PCR体系 滇牡丹 聚合酶 多聚酶链式反应 PCR技术 DNA多态性检测技术 随机扩增多态性DNA 滇牡丹
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血管紧张素原基因M235T多态性与脑梗死的相关性研究 被引量：9
16
作者 张晨 迟松 《临床神经病学杂志》 CAS 2001年第5期266-268,共3页
目的　探讨血管紧张素原 (angiotensinogen AGT)基因 M2 35 T多态性与中国人脑梗死 (CI)之间的关系。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)及限制性片段长度多态性分析 (RFL P)法对 75例 CI、48例健康对照者进行了 AGT基因 M2 35 T多态性检测... 目的　探讨血管紧张素原 (angiotensinogen AGT)基因 M2 35 T多态性与中国人脑梗死 (CI)之间的关系。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)及限制性片段长度多态性分析 (RFL P)法对 75例 CI、48例健康对照者进行了 AGT基因 M2 35 T多态性检测。结果　 CI组 AGT基因 T2 35等位基因频率为 0 .78,2 35 TT基因型频率为 0 .6 4,与对照组 (分别为 0 .6 0 4和 0 .375 )比较差异具有显著性 (χ2 =8.82 P<0 .0 0 5 ;χ2 =8.2 7P<0 .0 0 5 )。校正了 CI的几种危险因素 (血总胆固醇、血糖及年龄 )后 ,2 35 TT基因型仍可使 CI发生的危险性增加 (分别为 OR=3.2 89,P<0 .0 5 ;OR=2 .49,P<0 .0 5 )。结论　 AGT基因 2 35 TT型可能是中国人群 CI发病的独立危险因素。 展开更多
关键词 血管紧张素原 基因 脑梗死 多聚酶链式反应
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丝状真菌顶头孢霉染色体DNA的提取 被引量：9
17
作者 徐威 朱春宝 +1 位作者 朱宝泉 姚新生 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 2004年第3期226-229,236,共5页
目的探索提取头孢菌素C产生菌顶头孢霉基因组DNA的方法。方法采用氯化苄法、液氮研磨法和酶裂解法。结果较其他两种方法比 ,氯化苄法提取效果好。当提取液pH值为 9 0～10 0、EDTA浓度为 12 0mmol·L-1时 ,所得的顶头孢霉染色体DNA... 目的探索提取头孢菌素C产生菌顶头孢霉基因组DNA的方法。方法采用氯化苄法、液氮研磨法和酶裂解法。结果较其他两种方法比 ,氯化苄法提取效果好。当提取液pH值为 9 0～10 0、EDTA浓度为 12 0mmol·L-1时 ,所得的顶头孢霉染色体DNA的质量和数量均较理想 ,每克(湿重 )顶头孢霉菌丝体能得到 96 μg的染色体DNA。常规琼脂糖凝胶电泳分析 ,其DNA片断大于2 3kb。结论该分离方法获得的染色体DNA质量较高 。 展开更多
关键词 顶头孢霉菌 基因组DNA 提取 研磨 细胞壁 多聚酶链式反应
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利用PCR技术快速制备DNA分子量标准物 被引量：10
18
作者 刘慧娟 冯志国 何光源 《生物技术》 CAS CSCD 2008年第2期38-39,共2页
目的:制备一套DNA分子量标准物。方法:利用多聚酶链式反应技术(PCR),以连接有9个不同大小DNA片段的pMD18-T载体为模板,M13引物为通用引物,进行大规模扩增,并进行2%琼脂糖凝胶电泳分析和利用TanonGIS凝胶图像处理系统对凝胶扫描及拍照。... 目的:制备一套DNA分子量标准物。方法:利用多聚酶链式反应技术(PCR),以连接有9个不同大小DNA片段的pMD18-T载体为模板,M13引物为通用引物,进行大规模扩增,并进行2%琼脂糖凝胶电泳分析和利用TanonGIS凝胶图像处理系统对凝胶扫描及拍照。结果:DNA分子量条带大小依次为1653bp、1173bp、691bp、606bp、496bp、401bp、326bp、238bp、155bp,条带分布适度、亮度清晰。结论:制备了能满足研究和实验室的要求DNA分子量标准物,和市售的相比,成本大大降低。 展开更多
关键词 多聚酶链式反应 pMD18-T载体 DNA分子量标准物
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2011年美国胸科学会成人呼吸及重症监护患者真菌感染的治疗指南简介 被引量：10
19
作者 王汉萍 张弘 蔡柏蔷 《国际呼吸杂志》 2011年第8期561-567,共7页
肺部真菌感染的发病率、诊断率及临床严重程度近年来都呈明显增加趋势。其原因与恶性肿瘤和血液系统疾病患者的增加以及人类免疫缺陷病毒（HIV）感染的增加有关，也和器官移植或自身免疫性疾病等相关，从而造成免疫功能低下的患者增多... 肺部真菌感染的发病率、诊断率及临床严重程度近年来都呈明显增加趋势。其原因与恶性肿瘤和血液系统疾病患者的增加以及人类免疫缺陷病毒（HIV）感染的增加有关，也和器官移植或自身免疫性疾病等相关，从而造成免疫功能低下的患者增多，导致肺部真菌感染发生率的上升。而抗原检测、多聚酶链式反应、血清学检测、CT、PET、支气管镜、 展开更多
关键词 肺部真菌感染 重症监护患者 美国胸科学会 治疗指南 人类免疫缺陷病毒 自身免疫性疾病 多聚酶链式反应 呼吸
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用PCR技术检测生物硝化池污水中硝化细菌(Nitrobacteria)的研究 被引量：6
20
作者 明镇寰 岳春梅 +1 位作者 徐炳森 黄朴 《浙江大学学报（理学版）》 CAS CSCD 1999年第2期83-86,共4页
从生物硝化池污水水样中分离了硝化细菌ＤＮＡ，以其为模板，针对其１６ＳｒＲＮＡ基因及２３ＳｒＲＮＡ基因而设计合成了两对引物并分别进行了ＰＣＲ扩增，扩增产物的２％琼脂糖凝胶电泳结果显示，硝化细菌ＤＮＡ模板得到了特异性扩增... 从生物硝化池污水水样中分离了硝化细菌ＤＮＡ，以其为模板，针对其１６ＳｒＲＮＡ基因及２３ＳｒＲＮＡ基因而设计合成了两对引物并分别进行了ＰＣＲ扩增，扩增产物的２％琼脂糖凝胶电泳结果显示，硝化细菌ＤＮＡ模板得到了特异性扩增．参照分子量标准（Ｍａｒｋｅｒ）的电泳结果，被扩增的ＤＮＡ条带大小分别约为４００ｂｐ和７３０ｂｐ． 展开更多
关键词 硝化细菌 多聚酶链式反应 生物硝化池 废水
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