几丁质酶基因与抗真菌蛋白基因、葡聚糖酶基因双价表达载体的构建及农杆菌工程菌株的重组 被引量：4

1

作者 王华 周鹏 郭安平 《西北植物学报》 CAS CSCD 2002年第2期250-256,共7页

几丁质酶 (Chitinase,Chi.)、β- 1 ,3 -葡聚糖酶 (β- 1 ,3 - Glucanase,Glu.)和萝卜抗真菌蛋白 (Rs- AFP2 )是植物体内正常的表达产物 ,它们对防御植物的真菌病害具有重要的作用。基于它们在功能上具有协同作用 ,本研究利用基因工程... 几丁质酶 (Chitinase,Chi.)、β- 1 ,3 -葡聚糖酶 (β- 1 ,3 - Glucanase,Glu.)和萝卜抗真菌蛋白 (Rs- AFP2 )是植物体内正常的表达产物 ,它们对防御植物的真菌病害具有重要的作用。基于它们在功能上具有协同作用 ,本研究利用基因工程技术构建了几丁质酶和抗真菌蛋白、几丁质酶和葡聚糖酶双价表达载体 ,通过农杆菌直接转化技术将双价表达载体转入农杆菌EH A1 0 5 ,最后采用 PCR、DNA dot 展开更多

关键词 几丁质酶 葡聚糖酶 抗真菌蛋白 双价表达载体 农杆菌工程菌株 重组

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与拟南芥抗寒性相关的CBF3和AtGolS3基因克隆及其表达载体的构建 被引量：2

2

作者 钟克亚 叶妙水 +2 位作者 胡新文 符少萍 郭建春 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2006年第4期708-712,共5页

用RT-PCR技术从拟南芥(Arabidopsisthaliana)中克隆到抗寒相关基因CBF3、AtGolS3,序列分析后用BLAST软件作同源序列分析的结果显示,它们的核苷酸序列与GenBank中登录的拟南芥CBF3(AF074602)、AtGolS3(AB062850)核苷酸序列完全相同。CBF3... 用RT-PCR技术从拟南芥(Arabidopsisthaliana)中克隆到抗寒相关基因CBF3、AtGolS3,序列分析后用BLAST软件作同源序列分析的结果显示,它们的核苷酸序列与GenBank中登录的拟南芥CBF3(AF074602)、AtGolS3(AB062850)核苷酸序列完全相同。CBF3和AtGolS3基因分别与植物表达载体pVKH相连构建pVKH-35S-CBF3-pA、pVKH-35S-AtGolS3-pA以及通过中间载体pRT101,将AtGolS3连接到pVKH-35S-CBF3-pA上,成为各自带有35S启动子及PolyA终止子的双价植物表达载体pVKH-35S-CBF3-pA-35S-AtGolS3-pA。 展开更多

关键词 CBF3基因 AtGolS3基因 pVKH植物表达载体 双价表达载体

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一种快速构建35S组成型植物双价表达载体的方法 被引量：2

3

作者 刘明坤 刘昌财 +3 位作者 许志茹 魏志刚 阎秀峰 刘关君 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期87-92,共6页

通过对几种常用植物表达载体的35S和Tnos序列进行比对,设计带有酶切位点的引物35S和Tnos,通过PCR克隆了同时带有35S和Tnos序列的目的基因片段,通过定向的酶切、连接获得双价表达载体。此方法简化了植物双价表达载体构建过程,具有明显时... 通过对几种常用植物表达载体的35S和Tnos序列进行比对,设计带有酶切位点的引物35S和Tnos,通过PCR克隆了同时带有35S和Tnos序列的目的基因片段,通过定向的酶切、连接获得双价表达载体。此方法简化了植物双价表达载体构建过程,具有明显时间短、效率高、不需要中间载体、检测简单等特点,而且引物对于多数常用35S组成型植物表达载体是通用的,为快速构建35S组成型植物双价表达载体提供了一种新方法。 展开更多

关键词 35S Tnos pROKⅡ 双价表达载体

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西伯利亚蓼铜伴侣蛋白与铜锌超氧化物歧化酶基因共转化烟草的耐盐性分析 被引量：2

4

作者 马静 曲春浦 +2 位作者 许志茹 杨传平 刘关君 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期208-217,共10页

为验证西伯利亚蓼铜伴侣蛋白基因(Ps ATX)和铜锌超氧化物歧化酶基因(Ps SOD)共转化的烟草是否具有耐盐功能,分别构建了植物单价表达载体pROKⅡ-Ps ATX、pROKⅡ-Ps SOD和双价表达载体pROKⅡ-Ps ATX-PsSOD,通过农杆菌介导遗传转化烟草,PC... 为验证西伯利亚蓼铜伴侣蛋白基因(Ps ATX)和铜锌超氧化物歧化酶基因(Ps SOD)共转化的烟草是否具有耐盐功能,分别构建了植物单价表达载体pROKⅡ-Ps ATX、pROKⅡ-Ps SOD和双价表达载体pROKⅡ-Ps ATX-PsSOD,通过农杆菌介导遗传转化烟草,PCR验证转基因植株后测定了盐胁迫条件下转基因烟草的丙二醛(MDA)、活性氧、脯氨酸含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,以此鉴定转基因植株的耐盐性。结果表明:(1)Ps ATX和Ps SOD基因已成功整合到烟草基因组中;(2)在100 mmol·L-1Na Cl处理条件下,转双价基因植株的MDA、活性氧、脯氨酸含量均比野生型和转单价基因植株低,而SOD活性则高于这两类植株。证明Ps ATX和Ps SOD基因共转化的烟草植株比转单价基因植株具有更强的耐Na Cl能力。本研究将为研究Ps ATX和Ps SOD基因的抗逆机制奠定分子基础。 展开更多

关键词 铜伴侣蛋白基因 铜锌超氧化物歧化酶基因 双价表达载体 耐盐性

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菜豆几丁质酶、烟草葡聚糖酶基因的分离克隆及双价表达载体的构建 被引量：1

5

作者 晏慧君 张婷 +3 位作者 杨春梅 于丽霞 张宝琼 李涵 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2008年第6期867-872,共6页

几丁质酶基因(Chitinase,Chi)和葡聚糖酶基因(β-1,3-glucanase,Glu)具有协同抗真菌作用,根据GenBank号M13968,X53600分别设计引物,经RT-PCR扩增,克隆菜豆Chi基因和烟草Glu基因,将两个目的基因分别连上CaMV35S启动子和终止子Nos,然后串... 几丁质酶基因(Chitinase,Chi)和葡聚糖酶基因(β-1,3-glucanase,Glu)具有协同抗真菌作用,根据GenBank号M13968,X53600分别设计引物,经RT-PCR扩增,克隆菜豆Chi基因和烟草Glu基因,将两个目的基因分别连上CaMV35S启动子和终止子Nos,然后串联在一起共同组建于一个表达载体pBI121中,重组表达质粒经过限制性酶切分析鉴定,结果表明含有双价抗真菌基因的植物重组表达载体已构建成功。为非洲菊、香石竹等花卉抗真菌基因工程育种奠定了基础。 展开更多

关键词 几丁质酶 葡聚糖 pB1121 双价表达载体

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含融合杀虫基因和VHb基因双价表达载体的构建

6

作者 王友如 郭三堆 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期6-8,共3页

目的:探索分子育种的新途径,获得高产多抗虫谱的转基因植物。方法:将密码子优化后的透明颤菌血红蛋白(vgbM)基因与融合杀虫基因(GFMcryIA+CPTI)构建成双价基因植物高效表达载体pGBI4ABCVHB,基因表达盒中含2个增强子、35S启动子、Ω前导... 目的:探索分子育种的新途径,获得高产多抗虫谱的转基因植物。方法:将密码子优化后的透明颤菌血红蛋白(vgbM)基因与融合杀虫基因(GFMcryIA+CPTI)构建成双价基因植物高效表达载体pGBI4ABCVHB,基因表达盒中含2个增强子、35S启动子、Ω前导序列、Kozak序列、多联终止密码子及Nos终止子以及正确切割、加工序列、Poly(A)信号序列。结果:通过根癌农杆菌介导转化烟草,获得了转基因植株,结论:vgbM基因在转基因烟草中有效表达;融合杀虫基因也表达出活性毒蛋白。 展开更多

关键词 融合杀虫基因 VHB基因 双价表达载体 抗虫性 活性蛋白

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木薯淀粉分支酶基因双价块根特异性反义表达载体的构建 被引量：3

7

作者 肖琼 郭运玲 +2 位作者 孔华 贺立卡 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 2009年第5期688-693,共6页

淀粉分支酶(starch branching enzyme,SBE)是高等植物淀粉生物合成的关键酶之一,包括分支酶I(SBEI)和分支酶II(SBEII)两种类型,调控着支链淀粉的合成。利用DNA重组技术,将这两种分支酶反义基因片段构建在一个植物表达载体中,形成双价反... 淀粉分支酶(starch branching enzyme,SBE)是高等植物淀粉生物合成的关键酶之一,包括分支酶I(SBEI)和分支酶II(SBEII)两种类型,调控着支链淀粉的合成。利用DNA重组技术,将这两种分支酶反义基因片段构建在一个植物表达载体中,形成双价反义表达载体p1301-SBEII-Spo-SBEI,其中SBEII反义基因置于CaMV35S启动子之后,SBEI反义基因置于块根特异型启动子Sporamin之后,两者具有各自的Nos终止子。通过反复冻融法,将双价表达载体转入农杆菌EHA105,并采用PCR技术对所构建的农杆菌工程菌株进行了鉴定分析。 展开更多

关键词 木薯 淀粉分支酶基因 Sporamin启动子 反义双价表达载体 农杆菌工程菌株

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phaC1、phaC2基因双价植物表达载体的构建及其转基因烟草的获得 被引量：3

8

作者 郑军荣 周鹏 洪葵 《分子植物育种》 CAS CSCD 2003年第1期58-65,共8页

利用聚合酶链式反应 (PCR)技术 ,从类产碱假单胞菌YS1(PseudomonaspsuedoalcaligeneseYS1)染色体DNA中扩增并克隆了调控短链与中链PHA生物合成的两个关键酶基因 :phaC1、phaC2基因。同时利用套叠PCR技术对 phaC1基因进行了改造 ,经过基... 利用聚合酶链式反应 (PCR)技术 ,从类产碱假单胞菌YS1(PseudomonaspsuedoalcaligeneseYS1)染色体DNA中扩增并克隆了调控短链与中链PHA生物合成的两个关键酶基因 :phaC1、phaC2基因。同时利用套叠PCR技术对 phaC1基因进行了改造 ,经过基因拼接构建了植物表达载体pC3C1(嵌合phaC1)、pC3C2 (嵌合 phaC2 )和 pC3C1C2 (嵌合 phaC1和 phaC2双基因 )。将构建好的嵌合 phaC1和phaC2双基因的植物高效表达载体 pC3C1C2 ,用冻融法转入根癌土壤杆菌 (AgrobacteriumtumefaciensEHA10 5 )并且通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草 (NicotianatobacumHonghuadajinyuan)。 2个月后获得了一批卡那霉素抗性烟草植株 ,抗性植株大田生长表型正常 ,生长速度相对缓慢。抗性植株经过PCR、PCR Southern、Southern检测初步确定有 32 %烟草稳定整合了 phaC1和 phaC2。用氯仿 -次氯酸钠直接从部分Southern检测阳性转化植株中抽提纯化得到PHA ,在产物合成水平确证有 2 5 6 展开更多

关键词 phaC1基因 phaC2基因 双价植物表达载体 转基因烟草 聚-β-羟基脂肪酸脂 PHAS 生物合成 生物可降解塑料 生物反应器

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中国水仙NtBCH基因的克隆及LCYE RNAi与反义BCH双价植物表达载体的构建 被引量：3

9

作者 廖正平 郑益平 +2 位作者 罗鹏 吴雪琴 曾黎辉 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2013年第12期2382-2390,共9页

参考洋水仙BCH基因设计引物,以中国水仙花瓣cDNA为模板克隆出中国水仙NtBCH基因,全长959 bp,编码303个氨基酸。以中国水仙LCYE和BCH为目的基因,利用pKANNBIAL、pBI121和pCAMBIA1301等载体构建了LCYE RNAi与反义BCH双价植物表达载体,为... 参考洋水仙BCH基因设计引物,以中国水仙花瓣cDNA为模板克隆出中国水仙NtBCH基因,全长959 bp,编码303个氨基酸。以中国水仙LCYE和BCH为目的基因,利用pKANNBIAL、pBI121和pCAMBIA1301等载体构建了LCYE RNAi与反义BCH双价植物表达载体,为利用基因工程技术改良中国水仙奠定了基础。 展开更多

关键词 中国水仙 LCYE基因 BCH基因 反义技术 RNAI 双价植物表达载体

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海南PRSV-CP与rhIFNα-2b双价载体构建新策略 被引量：3

10

作者 周鹏 郭安平 黎小瑛 《热带作物学报》 CSCD 2003年第3期58-62,共5页

为了获得抗病毒能力较强的海南番木瓜转基因新品系,采用海南番木瓜环斑花叶病毒外壳蛋白(PapayaRing Spot Virus-Capsid Protein of Hainan,HPRSV-CP)和重组人源干扰素α-2b(recombinant human interferon-α 2b,rhIFNα-2b)为目的基因... 为了获得抗病毒能力较强的海南番木瓜转基因新品系,采用海南番木瓜环斑花叶病毒外壳蛋白(PapayaRing Spot Virus-Capsid Protein of Hainan,HPRSV-CP)和重组人源干扰素α-2b(recombinant human interferon-α 2b,rhIFNα-2b)为目的基因,利用pBI121、pCAMBIA2300载体及相关技术(如技术基因内部位点突变套叠PCR),实施双价基因表达载体的构建策略。本研究成果可为其他多价基因表达载体的构建提供技术依据。 展开更多

关键词 海南番木瓜环斑花叶病毒外壳蛋 重组人源干扰素α-2b 双价基因表达载体 转基因 抗病性

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抗除草剂bar基因植物表达载体的构建与抗性功能的检测 被引量：2

11

作者 孟灵真 陈全家 +3 位作者 杨婷 阿依夏木.古丽 王希东 曲延英 《新疆农业大学学报》 CAS 2013年第4期265-268,共4页

根据GenBank上发表的抗除草剂bar基因序列设计引物,通过高保真DNA聚合酶进行PCR扩增,获得bar基因片段,连接在pMD18-T中间克隆载体上,用限制性内切酶XbaⅠ和BamHⅠ酶切后连接到pBI121上获得pBI121-bar。用HindⅢ内切酶切含Bt-4AB基因的... 根据GenBank上发表的抗除草剂bar基因序列设计引物,通过高保真DNA聚合酶进行PCR扩增,获得bar基因片段,连接在pMD18-T中间克隆载体上,用限制性内切酶XbaⅠ和BamHⅠ酶切后连接到pBI121上获得pBI121-bar。用HindⅢ内切酶切含Bt-4AB基因的质粒并与pBI121-bar重组,重组质粒命名为pBI121-bar/Bt。重组质粒导入农杆菌LBA4404工程菌中,转化新海24号棉花胚性愈伤组织。PPT抗性实验证明,构建的pBI121-bar/Bt载体获得抗除草剂抗性,并筛选出PPT临界筛选浓度为3.0mg/L。 展开更多

关键词 抗除草剂 抗虫 双价植物表达载体 棉花 PPT头孢霉素

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木霉双价基因表达载体的构建

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作者 陈凯 李纪顺 +2 位作者 李红梅 魏艳丽 杨合同 《中国农学通报》 CSCD 2014年第9期232-236,共5页

利用几丁质酶基因和β-1,4-葡聚糖酶基因构建双价基因表达载体,为木霉转化奠定基础。利用限制性内切酶酶切得到目的基因片段,通过T4 DNAligase将基因插入表达框中,并采用PCR、酶切和核苷酸序列分析验证双价基因表达载体的正确性。利用... 利用几丁质酶基因和β-1,4-葡聚糖酶基因构建双价基因表达载体,为木霉转化奠定基础。利用限制性内切酶酶切得到目的基因片段,通过T4 DNAligase将基因插入表达框中,并采用PCR、酶切和核苷酸序列分析验证双价基因表达载体的正确性。利用启动子CaMV35S和终止子PolyA构建几丁质酶基因chi42的表达框,获得表达载体pC1302-C42;利用启动子CaMV35S和终止子Nos构建β-1,4-葡聚糖酶基因glu14的表达框,获得表达载体pC1300-2-G14;在单基因表达载体的基础上,通过串联构建双价基因表达载体pC1300-2-G14-C42,该表达载体含有潮霉素B抗性基因。经检测证实表达元件35S-chi42-PolyA和35S-glu14-Nos连接成功。得到的双价基因表达载体pC1300-2-G14-C42可直接用于木霉等丝状真菌的遗传转化,为构建木霉广谱高效工程菌株奠定基础。 展开更多

关键词 木霉 双价基因表达载体 几丁质酶基因 β-1 4-葡聚糖酶基因 潮霉素B抗性

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甘蔗黄叶病毒与花叶病毒CP基因RNAi载体构建与转化甘蔗研究 被引量：9

13

作者 陈利平 陈平华 +6 位作者 陈忠伟 王恒波 许莉萍 刘迪 高三基 郭晋隆 陈如凯 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期99-106,共8页

甘蔗黄叶病和甘蔗花叶病是我国甘蔗最主要的病毒病,感病品种产量下降和品质变劣,传统方法难以防治。RNA干扰技术使培育抗病毒甘蔗品种成为可能。本研究根据甘蔗黄叶病毒和侵染甘蔗的高粱花叶病毒结构与功能特性,广泛收集不同来源病毒分... 甘蔗黄叶病和甘蔗花叶病是我国甘蔗最主要的病毒病,感病品种产量下降和品质变劣,传统方法难以防治。RNA干扰技术使培育抗病毒甘蔗品种成为可能。本研究根据甘蔗黄叶病毒和侵染甘蔗的高粱花叶病毒结构与功能特性,广泛收集不同来源病毒分离物CP基因序列,经过比对选取保守序列作为干扰序列。通过在序列两端添加酶切位点,合成并连接成双价甘蔗黄叶病和花叶病毒干扰序列,然后构建到中间载体p HANNIBAL上,形成双价RNAi干扰结构,最后插入到p ART27上形成干扰表达载体。利用基因枪轰击甘蔗品种福农15号愈伤组织进行转化,经G418筛选获得抗性再生植株。通过提取DNA和RNA分析,证实双价RNAi干扰结构不仅以不同拷贝整合到甘蔗基因组中,而且得到了转录表达。 展开更多

关键词 甘蔗黄叶病毒 甘蔗花叶病毒 CP基因 双价RNAi表达载体构建 遗传转化

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