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耐药质粒pR_(ST98)在不同种属肠道杆菌间的接合及表达 被引量:18
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作者 黄瑞 秦爱兰 闻玉梅 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期323-326,共4页
目的 研究伤寒杆菌耐药质粒pRST98在不同种属肠道杆菌间 (大肠杆菌、伤寒杆菌、鼠伤寒杆菌及痢疾杆菌 )互相接合传递的规律及表达。方法 以 3株携带不相容性C群 (IncC)pRST98的伤寒杆菌作供体 ,用传统及改良的两种接合转移试验方法 ,... 目的 研究伤寒杆菌耐药质粒pRST98在不同种属肠道杆菌间 (大肠杆菌、伤寒杆菌、鼠伤寒杆菌及痢疾杆菌 )互相接合传递的规律及表达。方法 以 3株携带不相容性C群 (IncC)pRST98的伤寒杆菌作供体 ,用传统及改良的两种接合转移试验方法 ,研究其在肠道杆菌间的传递及耐药标志的表达 ,并用核酸内切酶对供体菌及受体接合子的R质粒进行分析。结果 pRST98能在 4种肠道杆菌间传递 ;但在不同种属中R质粒接合难易程度不同 ;同一R质粒在不同宿主菌中耐药标志的表达亦有差异。结论 质粒的可传递性给阻断耐药性的传播和疾病的防治带来很大困难 ,大肠杆菌在一定条件下可将耐药质粒传递给伤寒杆菌等肠道致病菌。正常菌群中庞大的耐药基因库是致病性耐药菌株流行的潜在危险 ;同一质粒在不同宿主菌中耐药标志的差异显示出耐药质粒表达的多样性和复杂性。 展开更多
关键词 耐药质粒 肠道杆菌 接合传递 耐药标志
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耐药质粒在肠道杆菌间的接合传递研究 被引量:6
2
作者 黄瑞 秦爱兰 林发榕 《苏州医学院学报》 1999年第8期846-849,共4页
选用13 种抗菌药物对18 株肠道杆菌进行药敏试验、质粒检测并用传统及改良两种接合转移试验方法,以5 株伤寒杆菌的不相容性 C群( Inc C) R 质粒、6 株大肠杆菌及2 株鼠伤寒杆菌的 R 质粒作供体,研究其在肠道杆菌间的... 选用13 种抗菌药物对18 株肠道杆菌进行药敏试验、质粒检测并用传统及改良两种接合转移试验方法,以5 株伤寒杆菌的不相容性 C群( Inc C) R 质粒、6 株大肠杆菌及2 株鼠伤寒杆菌的 R 质粒作供体,研究其在肠道杆菌间的传递。结果显示, R 质粒能在4 种肠道杆菌间互相传递,其中伤寒杆菌 Inc C 群 R 质粒能在这4 种菌中稳定复制并表达耐药性。质粒的可传递性给阻断耐药性的传播和疾病的防治带来很大困难,单纯消除某个菌中的耐药质粒已难以奏效,正常菌群中庞大的耐药基因库是致病性耐药菌株流行的潜在危险;合理选择、控制抗生素的使用,降低“选择性压力”显得尤为重要。 展开更多
关键词 肠道杆菌 耐药性 耐药质粒 接合传递
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亮氨酰氨肽酶基因的阻断对刺糖多孢菌生长及次级代谢产物合成的影响 被引量:4
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作者 杨燕 罗林根 +1 位作者 徐妙 夏立秋 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期629-642,共14页
【目的】构建亮氨酰氨肽酶基因(pep A)被阻断的刺糖多孢菌工程菌株,并鉴定该基因对刺糖多孢菌菌丝形态、生物量、菌体全蛋白表达水平及产多杀菌素能力的影响,探究该基因调控多杀菌素合成的可能机制。【方法】利用PCR扩增刺糖多孢菌中的p... 【目的】构建亮氨酰氨肽酶基因(pep A)被阻断的刺糖多孢菌工程菌株,并鉴定该基因对刺糖多孢菌菌丝形态、生物量、菌体全蛋白表达水平及产多杀菌素能力的影响,探究该基因调控多杀菌素合成的可能机制。【方法】利用PCR扩增刺糖多孢菌中的pep A基因同源片段,经酶切连接技术构建敲除载体p OJ260-pep A;通过接合转移和单交换同源重组将该载体整合至刺糖多孢菌染色体中,获得工程菌株S.sp-△pep A;利用培养特征、形态学、高效液相色谱、SDS-PAGE等方法对菌株进行研究分析。【结果】工程菌株S.sp-△pep A菌丝片段化程度加剧,生长态势被延缓且生物量降低,但有效促进了多杀菌素的生物合成。阻断亮氨酰胺肽酶基因的表达使刺糖多孢菌菌体全蛋白表达情况发生明显改变,找到表达水平显著上调的差异蛋白核糖体蛋白亚基和醛基脱氢酶,核糖体蛋白亚基通过影响蛋白质代谢对菌体生长产生影响;醛基脱氢酶则可与乙醇脱氢酶、乙酰辅酶A的合成酶相互作用影响辅酶A合成,而辅酶A是合成多杀菌素的重要底物。【结论】在刺糖多孢菌合成多杀菌素的次级代谢过程中,pep A基因作为负调控因子发挥作用。 展开更多
关键词 刺糖多孢菌 亮氨酰氨肽酶基因 阻断 多杀菌素 接合转移
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委内瑞拉链霉菌秦岭变种属间接合转移系统的构建及透明颤菌血红蛋白的表达 被引量:3
4
作者 高峰 王斌 +2 位作者 陈太春 汪志军 安德荣 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期406-410,共5页
【目的】构建委内瑞拉链霉菌秦岭变种属间接合转移系统及透明颤菌血红蛋白的表达。【方法】以链霉菌广泛使用的整合型质粒pSET152和复制型pHZ1358为出发质粒,通过供体大肠杆菌(Escherichia coli)ET12567(pUZ8002)进行属间接合转移委内... 【目的】构建委内瑞拉链霉菌秦岭变种属间接合转移系统及透明颤菌血红蛋白的表达。【方法】以链霉菌广泛使用的整合型质粒pSET152和复制型pHZ1358为出发质粒,通过供体大肠杆菌(Escherichia coli)ET12567(pUZ8002)进行属间接合转移委内瑞拉链霉菌秦岭变种。【结果】确定了该变种的最佳接合转移条件;通过SOE-PCR(Splicing by overlap extension PCR)技术构建含PermE和vhb结构基因融合片段的整合型表达载体pJD100,转化ET12567(pUZ8002)后属间接合转移委内瑞拉链霉菌秦岭变种。通过PCR和CO结合差光谱验证了vhb基因在委内瑞拉链霉菌秦岭变种中的整合表达。【结论】本文首次探索了委内瑞拉链霉菌秦岭变种接合转移系统,确定了委内瑞拉链霉菌秦岭变种的最佳接合转移条件,并采用基因工程手段使vhb基因在委内瑞拉链霉菌秦岭变种中获得表达。 展开更多
关键词 委内瑞拉链霉菌秦岭变种 接合转移 VHB基因 CO结合差光谱
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聚磷酸激酶基因的阻断对刺糖多孢菌生长及多杀菌素合成的影响 被引量:2
5
作者 杨燕 罗林根 +5 位作者 唐斯佳 徐妙 丁学知 胡胜标 孙运军 夏立秋 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2014年第5期703-712,共10页
聚磷酸激酶基因(Polyphosphate kinase gene,ppk)是放线霉菌中的一种影响抗生素合成的全局性负调控因子,阻断该基因能显著提高其次级代谢产物产量。本文利用PCR扩增了刺糖多孢菌中的ppk基因中间片段,经酶切连接技术将其克隆到大肠杆菌-... 聚磷酸激酶基因(Polyphosphate kinase gene,ppk)是放线霉菌中的一种影响抗生素合成的全局性负调控因子,阻断该基因能显著提高其次级代谢产物产量。本文利用PCR扩增了刺糖多孢菌中的ppk基因中间片段,经酶切连接技术将其克隆到大肠杆菌-链霉菌穿梭载体pOJ260上,构建阻断型载体pOJ260-ppk;通过接合转移将该功能质粒导入刺糖多孢菌中,获得了遗传性能稳定的重组菌株S.sp-△ppk。对工程菌株的PCR检测结果显示,ppk基因片段已整合到刺糖多孢菌染色体上并成功阻断了该基因的表达。摇瓶发酵结果显示,工程菌株多杀菌素产量较原始菌株提高了122%。阻断聚磷酸激酶基因的表达对刺糖多孢菌的菌丝形态及生长发育产生了影响,并有效地促进该菌多杀菌素的生物合成。 展开更多
关键词 刺糖多孢菌 聚磷酸激酶基因 阻断 多杀菌素 接合转移
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荧光标记珊瑚组织来源细菌及其与虫黄藻相互作用的显微观察 被引量:2
6
作者 琚慧敏 杨键 +1 位作者 张偲 李洁 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期351-361,共11页
【背景】研究珊瑚-细菌、虫黄藻-细菌的相互作用是解析珊瑚健康机理的关键。对珊瑚共附生细菌进行稳定荧光标记有助于原位观察细菌与虫黄藻或珊瑚的相互作用。当前,对于野生型珊瑚共附生细菌遗传操作体系的研究有限,限制了对细菌与珊瑚... 【背景】研究珊瑚-细菌、虫黄藻-细菌的相互作用是解析珊瑚健康机理的关键。对珊瑚共附生细菌进行稳定荧光标记有助于原位观察细菌与虫黄藻或珊瑚的相互作用。当前,对于野生型珊瑚共附生细菌遗传操作体系的研究有限,限制了对细菌与珊瑚、虫黄藻原位互作模式的揭示。【目的】建立一种适合专性海洋细菌的遗传操作体系,利用其对珊瑚组织来源细菌进行绿色荧光蛋白标记,用于研究标记菌株与虫黄藻的相互作用。【方法】通过电穿孔的方式将构建好的广宿主重组质粒转入供体菌(Escherichia coli WM3064),然后将供体菌与添加海水才可以生长的受体菌SCSIO 12696(港口球菌科,Porticoccaceae;分离自鹿角杯形珊瑚组织)按供、受体菌细胞数比分别为4:1、2:1、1:1比例混合,在25℃和30℃下于改良LB培养基上接合转移。显微观察标记细菌与虫黄藻相互作用。【结果】改良的LB培养基适用于需海水才可生长的专性海洋细菌的接合转移实验。接合转移的效率与供、受体菌的比例及温度有关。确定优化的接合转移条件为:供、受体菌的比例为1:1,温度为30℃。利用建立的接合转移体系,构建了增强型绿色荧光蛋白标记菌株SCSIO 12696。在激光扫描共聚焦显微镜下能清晰观察到标记菌株SCSIO 12696和虫黄藻在共培养时的相互作用。【结论】建立了适合专性海洋细菌的遗传操作体系,利用其构建荧光蛋白标记菌株可用于虫黄藻-细菌、珊瑚-细菌相互作用的研究,有助于揭示珊瑚共附生细菌的生态作用机制。 展开更多
关键词 珊瑚共附生细菌 接合转移 荧光标记 虫黄藻 菌-藻互作
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应用抑制性消减杂交筛选志贺菌基因转移耐多药相关基因 被引量:1
7
作者 宋春花 王颖芳 +1 位作者 段广才 郗园林 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2013年第1期63-66,共4页
目的:应用抑制性消减杂交技术初步筛选志贺菌基因转移耐多药相关基因。方法:以志贺菌基因转移耐多药株DNA为检测子,以其敏感株DNA为驱赶子,构建DNA消减文库,采用PCR鉴定及斑点杂交进行筛选,并随机挑取阳性克隆测序,所得结果在GenBank中... 目的:应用抑制性消减杂交技术初步筛选志贺菌基因转移耐多药相关基因。方法:以志贺菌基因转移耐多药株DNA为检测子,以其敏感株DNA为驱赶子,构建DNA消减文库,采用PCR鉴定及斑点杂交进行筛选,并随机挑取阳性克隆测序,所得结果在GenBank中进行同源性比较和分析。结果:成功构建了志贺菌基因转移耐多药株的特异性DNA消减杂交文库。选取部分阳性克隆进行杂交筛选,其中5个测序成功,与GenBank数据库进行初步比对,3个可能为新基因,2个为已知基因(Tn3926转座子部分的转座酶基因及23SrRNA核糖体核糖核酸)。结论:成功构建了志贺菌基因转移耐多药株的特异性DNA消减杂交文库并获得了其耐多药相关基因,提示转座子介导的耐药机制可能在志贺菌基因转移耐多药中起重要作用。 展开更多
关键词 志贺菌 基因转移 耐多药相关基因
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烧伤病区绿脓杆菌R质粒的接合传递试验
8
作者 贾赤宇 陈璧 《第四军医大学学报》 1991年第4期318-319,共2页
为了探讨烧伤病区绿脓杆菌耐药性增多的原因,以便研究其防治对策,我们进行了绿脓杆菌R质粒的接合传递试验.1 材料和方法1.1 菌株 ①供菌体:绿脓杆菌系1989年9月至1989年12月从烧伤病区环境和患者创面采集,经乙酰胺平板筛选后,用生物学... 为了探讨烧伤病区绿脓杆菌耐药性增多的原因,以便研究其防治对策,我们进行了绿脓杆菌R质粒的接合传递试验.1 材料和方法1.1 菌株 ①供菌体:绿脓杆菌系1989年9月至1989年12月从烧伤病区环境和患者创面采集,经乙酰胺平板筛选后,用生物学方法鉴定证实. 展开更多
关键词 烧伤 绿脓杆菌 R质粒 接合传递
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基因组挖掘指导下的新颖Ⅰ型羊毛硫肽合成基因簇的解析及其异源表达体系的构建
9
作者 张宏宇 赵敏敏 +3 位作者 娄婷婷 董世瑞 赵培 王素英 《生命的化学》 CAS CSCD 2020年第5期762-773,共12页
基于Ⅰ型羊毛硫肽独特的抑菌机制及其在抗耐药菌治疗领域极强的应用潜能,通过对海洋链霉菌W007基因组的深度挖掘,发现了新颖的Ⅰ型羊毛硫肽合成基因簇,并解析了其组成。以pJTU2554为建库载体构建了链霉菌W007基因组文库,通过菌液PCR策... 基于Ⅰ型羊毛硫肽独特的抑菌机制及其在抗耐药菌治疗领域极强的应用潜能,通过对海洋链霉菌W007基因组的深度挖掘,发现了新颖的Ⅰ型羊毛硫肽合成基因簇,并解析了其组成。以pJTU2554为建库载体构建了链霉菌W007基因组文库,通过菌液PCR策略筛选获得了包含完整基因簇的阳性文库克隆,将阳性文库克隆电击转化到大肠杆菌ET12567(pUZ8002)中,并与天蓝色链霉菌M145和变铅青链霉菌TK24进行了接合转移,构建了Ⅰ型羊毛硫肽合成基因簇的异源表达体系。通过对基因簇上的簇内基因进行PCR验证,发现该新颖Ⅰ型羊毛硫肽合成基因簇成功导入了变铅青链霉菌TK24和天蓝色链霉菌M145中,结合抗菌活性和次级代谢谱的分析结果,证实该基因簇在变铅青链霉菌TK24中获得成功表达。虽然该Ⅰ型羊毛硫肽合成基因簇的异源表达体系已经成功建立,但是该基因簇在异源表达宿主内的表达水平及目标产物的鉴定还有待进一步确定。该研究为具有潜在应用价值的新颖Ⅰ型羊毛硫肽的发现及其独特的生物合成机制的解析奠定了基础。 展开更多
关键词 Ⅰ型羊毛硫肽 基因组挖掘 异源表达 接合转移
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密旋链霉菌Act12遗传转化系统的建立与优化
10
作者 李晓霞 马怡茗 +4 位作者 文冰洁 舒伟学 薛泉宏 贾良辉 颜华 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期418-425,共8页
密旋链霉菌(Streptomyces pactum)Act12是分离自黄土高原的1株多效放线菌,具有良好的生防应用价值,为了深入研究与利用,需建立该菌株的高效遗传转化系统。本试验以整合型质粒pSET152为出发质粒,大肠杆菌S17-1为供体,Act12的孢子为受体时... 密旋链霉菌(Streptomyces pactum)Act12是分离自黄土高原的1株多效放线菌,具有良好的生防应用价值,为了深入研究与利用,需建立该菌株的高效遗传转化系统。本试验以整合型质粒pSET152为出发质粒,大肠杆菌S17-1为供体,Act12的孢子为受体时,在改良2CMY培养基上进行接合转移,孢子预萌发条件为50℃热激10min,阿普霉素质量浓度为10.0mg/L,覆盖时间为18h,转化效率达到2.079×10^(-5)。以抗阿普霉素基因为目的基因,通过PCR验证,成功地将质粒pSET152转入到Act12中。同时,利用该转化系统,成功敲出Act12基因组中一可能的负调控转录因子spa0520,并获得了次级代谢图谱明显变化的缺失突变株Δspa0520。所构建的Act12遗传转化系统,为后续对其生防活性机理的研究以及深入开发利用奠定了基础。另外,通过培养基的改良发现,Act12在氮源含有NO-3时产孢丰富,为后续研究提供了思路。 展开更多
关键词 密旋链霉菌 遗传转化系统 接合转移
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质粒RSF1010从大肠杆菌到稀有放线菌头状链轮丝菌和星状诺卡氏菌的接合转移 被引量:2
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作者 李维泉 沈美娟 +1 位作者 焦瑞身 赵国屏 《微生物学报》 CSCD 北大核心 1999年第4期376-380,共5页
1987年,TrienCuot等人[1]证明穿梭质粒可以在革兰氏阴性的大肠杆菌(Escherichiacoli)和多种革兰氏阳性细菌之间发生接合转移。在这种转移中质粒需具备大肠杆菌的复制起始位点,同时又具备革兰氏阳... 1987年,TrienCuot等人[1]证明穿梭质粒可以在革兰氏阴性的大肠杆菌(Escherichiacoli)和多种革兰氏阳性细菌之间发生接合转移。在这种转移中质粒需具备大肠杆菌的复制起始位点,同时又具备革兰氏阳性细菌的广宿主范围复制起始位点。转... 展开更多
关键词 RFF1010 接合转移 质粒 稀有放线菌 诺卡氏菌
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去甲肾上腺素对大肠杆菌耐药质粒接合转移的影响 被引量:2
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作者 翁梦薇 计徐 +1 位作者 郑卫江 姚文 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期901-908,共8页
[目的]本研究旨在探讨生产中普遍存在的急性应激因素对细菌耐药基因水平转移的可能影响。[方法]选取分离自断奶香猪粪便的2株喹诺酮类敏感型大肠杆菌作为试验菌株,通过测定D600值比较菌株在添加不同浓度去甲肾上腺素培养液中的生长曲线... [目的]本研究旨在探讨生产中普遍存在的急性应激因素对细菌耐药基因水平转移的可能影响。[方法]选取分离自断奶香猪粪便的2株喹诺酮类敏感型大肠杆菌作为试验菌株,通过测定D600值比较菌株在添加不同浓度去甲肾上腺素培养液中的生长曲线,确定去甲肾上腺素对于大肠杆菌的最佳促生长浓度;分离自断奶香猪粪便的7株携带质粒喹诺酮类耐药基因(aac(6')-lb-cr、oqx AB、qnr S)的大肠杆菌,采用滤膜接合法,计算去甲肾上腺素诱导和未诱导的大肠杆菌分离株(供体菌)与大肠杆菌J53(受体菌)的接合转移率;PCR检测接合子及供、受体菌质粒介导抗性基因的携带情况;采用K-B纸片扩散法和琼脂稀释法测定接合子及供、受体菌的多种抗生素最小抑菌浓度(MIC)。[结果]去甲肾上腺素对于大肠杆菌的促生长效果具有浓度依赖性,最佳促生长浓度为100μmol·L-1。7株携带质粒介导的喹诺酮类耐药基因的大肠杆菌中有4株(A、B、C、D)成功获得接合子,经去甲肾上腺素(100μmol·L-1)诱导后与受体菌的接合转移率与去甲肾上腺素未诱导组相比均升高,其中A、B、C 3株供体菌极显著升高(P<0.01)。所有接合子均扩增到恩诺沙星3种耐药基因:aac(6')-lb-cr、oqx AB、qnr S。接合子菌株对6种抗菌药物的MIC值与大部分供体菌株相同。[结论]去甲肾上腺素对于大肠杆菌的促生长效果具有浓度依赖性,且提高了大肠杆菌分离株耐药质粒体外接合转移率。提示:动物养殖生产中应加强应激管理,以减少细菌耐药基因水平传播的发生。 展开更多
关键词 去甲肾上腺素 大肠杆菌 耐药性 接合转移率
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解毒酶基因在蓝藻中的克隆与表达 被引量:12
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作者 闫艳春 乔传令 张媛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期42-45,共4页
用抗性库蚊酯酶基因B1的cDNA片段插入质粒pRL439中的强启动子之后,再与穿梭表达载体pDC8相连构建成大肠杆菌蓝藻穿梭表达载体pDCB1,然后通过三亲接合转移法将pDCB1转入蓝藻Synechococcussp.PCC7942中,经新霉素筛选获遗传稳定的转基因藻... 用抗性库蚊酯酶基因B1的cDNA片段插入质粒pRL439中的强启动子之后,再与穿梭表达载体pDC8相连构建成大肠杆菌蓝藻穿梭表达载体pDCB1,然后通过三亲接合转移法将pDCB1转入蓝藻Synechococcussp.PCC7942中,经新霉素筛选获遗传稳定的转基因藻株;纯化单藻落在液体中扩大培养,提取蓝藻质粒,Southern杂交确证B1cDNA已转入受体细胞;用酯酶的特异性底物β乙酸萘酯(βNA)检测B1的表达,转基因藻对βNA的降解明显高于野生藻,证明酯酶B1基因在转基因藻中得到表达。 展开更多
关键词 解毒酶基因 蓝藻 基因表达 农药污染治理 克隆
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Study on seepage and deformation characteristics of coal microstructure by 3D reconstruction of CT images at high temperatures 被引量:19
14
作者 Gang Wang Xiangjie Qin +1 位作者 Dongyang Han Zhiyuan Liu 《International Journal of Mining Science and Technology》 SCIE EI CAS CSCD 2021年第2期175-185,共11页
To study the seepage and deformation characteristics of coal at high temperatures,coal samples from six different regions were selected and subjected to computed tomography(CT)scanning studies.In conjunction with ANSY... To study the seepage and deformation characteristics of coal at high temperatures,coal samples from six different regions were selected and subjected to computed tomography(CT)scanning studies.In conjunction with ANSYS software,3 D reconstruction of CT images was used for the establishment of fluidsolid conjugate heat transfer model and coal thermal deformation model based on the microstructures of coal.In addition,the structure of coal was studied in 2 D and 3 D perspectives,followed by the analysis of seepage and deformation characteristics of coal at high temperatures.The results of this study indicated that porosity positively correlated with the fractal dimension,and the connectivity and seepage performances were roughly identical from 2 D and 3 D perspectives.As the porosity increased,the fractal dimension of coal samples became larger and the pore-fracture structures became more complex.As a result,the permeability of coal samples decreased.In the meantime,fluid was fully heated,generating high-temperature water at outlet.However,when the porosity was low,the outlet temperature was very high.The average deformation of coal skeleton with different pore-fracture structures at high temperatures showed a trend of initial increase and subsequent decrease with the increase of porosity and fractal dimension.The maximum deformation of coal skeleton positively correlated with connectivity but negatively correlated with the fractal dimension. 展开更多
关键词 COAL Pore-fracture structures Fluid-solid conjugate heat transfer Thermal deformation
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猪霍乱沙门氏菌C78-1株Δcrp缺失株的构建及其生物学特性初步研究 被引量:16
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作者 郁川 程相朝 +3 位作者 赵战勤 张春杰 李银聚 吴庭才 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期587-593,共7页
通过自杀性质粒介导的等位交换技术构建猪霍乱沙门氏菌C78-1株的crp基因缺失株,并对其生物学特性进行初步研究。首先以猪霍乱沙门氏菌C78-1基因组为模板进行PCR,扩增出crp基因上下游片段(1 048和1 743 bp),并分别将其克隆入自杀性质粒pR... 通过自杀性质粒介导的等位交换技术构建猪霍乱沙门氏菌C78-1株的crp基因缺失株,并对其生物学特性进行初步研究。首先以猪霍乱沙门氏菌C78-1基因组为模板进行PCR,扩增出crp基因上下游片段(1 048和1 743 bp),并分别将其克隆入自杀性质粒pRE112上,构建含缺失320 bpcrp基因的重组自杀性质粒pREΔcrp。运用重组自杀性质粒介导的等位交换技术,两步法筛选C78-1的Δcrp缺失株。进一步的生物学特性研究表明,缺失株的血清型与亲本菌株C78-1一致,且能够稳定遗传缺失的crp基因,但其生化特性和生长速度与C78-1相比发生明显改变,小鼠致死性试验结果表明其毒力较C78-1降低约750倍。以上结果均证实,作者成功构建了猪霍乱沙门氏菌C78-1株的crp基因缺失突变株,缺失株遗传稳定,毒力显著降低,为进一步开发猪霍乱沙门氏菌的弱毒疫苗菌株奠定了基础。 展开更多
关键词 猪霍乱沙门氏菌C78-1 crp基因 重组自杀性质粒 接合转移 Δcrp缺失株
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Numerical Simulation of Temperature Distribution and ThermalStress Field in a Turbine Blade with Multilayer-Structure TBCs by a Fluid–Solid Coupling Method 被引量:16
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作者 W.Z.Tang L.Yang +3 位作者 W.Zhu Y.C.Zhou J.W.Guo C.LU 《Journal of Materials Science & Technology》 SCIE EI CAS CSCD 2016年第5期452-458,共7页
To study the temperature distribution and thermal-stress field in different service stages, a two-dimensional model of a turbine blade with thermal barrier coatings is developed, in which the conjugate heat transfer a... To study the temperature distribution and thermal-stress field in different service stages, a two-dimensional model of a turbine blade with thermal barrier coatings is developed, in which the conjugate heat transfer analysis and the decoupled thermal-stress calculation method are adopted. Based on the simulation results, it is found that a non-uniform distribution of temperature appears in different positions of the blade surface, which has directly impacted on stress field. The maximum temperature with a value of 1030 ℃ occurs at the leading edge. During the steady stage, the maximum stress of thermally grown oxide (TGO) appears in the middle of the suction side, reaching 3.75 GPa. At the end stage of cooling, the maximum compressive stress of TGO with a value of-3.5 GPa occurs at the leading edge. Thus, it can be predicted that during the steady stage the dangerous regions may locate at the suction side, while the leadine edge mav be more Drone to failure on cooling. 展开更多
关键词 Thermal barrier coatings Temperature distribution Thermal-stress field conjugate heat transfer Decoupled thermal-stress calculation Fluid–solid coupling
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透明颤菌血红蛋白基因在弗氏链霉菌中的表达及其对菌体生长和泰乐星合成的影响 被引量:9
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作者 陈文青 喻子牛 郑应华 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期516-520,共5页
质粒 p IJ4 0 2 6和 p RK4 0 4 - vhb分别含有红霉素抗性基因启动子 (Perm E)和透明颤菌血红蛋白基因 (vhb) ,先用 PCR分别扩增二者 ,再用 SOE- PCR(Splicing by overlap extension PCR)将不含自身启动子的vhb基因置于 Perm E之下 ;将 S... 质粒 p IJ4 0 2 6和 p RK4 0 4 - vhb分别含有红霉素抗性基因启动子 (Perm E)和透明颤菌血红蛋白基因 (vhb) ,先用 PCR分别扩增二者 ,再用 SOE- PCR(Splicing by overlap extension PCR)将不含自身启动子的vhb基因置于 Perm E之下 ;将 SOE- PCR产物克隆到链霉菌整合性载体 p SET15 2上 ,构建成 vhb基因表达载体 p WQ2 0 0 4。通过大肠埃希氏菌 -链霉菌属间接合转移的方式将 p WQ2 0 0 4导入弗氏链霉菌 (Streptomycesfradiae)中 ,利用 p WQ2 0 0 4上 Φ C31整合性位点使 vhb基因整合到弗氏链霉菌染色体上。PCR验证表明 ,vhb基因已整合到染色体上 ,CO结合差光谱分析则表明 vhb基因在弗氏链霉菌中成功表达。摇瓶与上罐发酵显示 展开更多
关键词 uhb基因 SOE-PCR 属间接合转移 CO结合差光谱分析 泰乐星
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Conjugate Heat Transfer Analysis of Film Cooling Flows 被引量:12
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作者 Xiaochen LU Peixue JIANG +2 位作者 Hideaki SUGISHITA Hideyuki UECHI Kiyoshi SUENAGA 《Journal of Thermal Science》 SCIE EI CAS CSCD 2006年第1期85-91,共7页
The objective of this study is to evaluate the potential of various grids to satisfactorily simulate the development of a cooling film, using a coupled computation that takes into account the full geometry. Detailed c... The objective of this study is to evaluate the potential of various grids to satisfactorily simulate the development of a cooling film, using a coupled computation that takes into account the full geometry. Detailed computations of a single row of 30 degrees round holes on a flat plate are presented for blowing ratios of 0.764, 1.01 and 1.54. The simulation results are compared well with experimental data. The two-layer model gave more accurate results but consumed much more computational time than the standard wall functions. The k-ε turbulence model with wall functions with appropriate values of y^+ is suitable for practical use. The results show the importance of the conjugate calculation for accurately describing the influence of the heat transfer within the cooling film. 展开更多
关键词 film cooling conjugate heat transfer blowing ratio.
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温度与pH值对长江水系产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药基因转移影响分析 被引量:10
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作者 郭业彬 舒为群 +3 位作者 常晓松 陈浩 杨澜 付文娟 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期29-35,共7页
研究温度和pH值对长江水系中产超广谱β-内酰胺酶(Extended-Spectrum β-Lactamases,ESBL)大肠埃希菌(Escherichia coli)耐药基因转移影响规律,为今后介水疾病的预防与控制提供理论依据。采用滤膜法分离、梅里埃微生物分析系统鉴定菌株... 研究温度和pH值对长江水系中产超广谱β-内酰胺酶(Extended-Spectrum β-Lactamases,ESBL)大肠埃希菌(Escherichia coli)耐药基因转移影响规律,为今后介水疾病的预防与控制提供理论依据。采用滤膜法分离、梅里埃微生物分析系统鉴定菌株;将由长江水系分离出的产ESBL大肠埃希菌与大肠埃希菌NK5449进行接合,观察不同温度和pH值条件下接合频率变化情况;用纸片扩散法测定耐药谱;用PCR方法分析产ESBL供体菌与转移接合子β-内酰胺酶编码基因(bla),并对供、受体菌及转移接合子进行随机扩增多态性分析,判别转移接合子与供、受体菌的同源性。温度和pH值对产ESBL大肠埃希菌耐药基因水平转移影响明显,发生接合最适宜的pH值为7.1。温度对接合频率的影响具有双重性,相同条件下,某些大肠埃希菌接合频率随环境温度的降低率急剧下降,但某些大肠埃希菌的接合频率随环境温度下降有所上升。温度和pH值对产ESBL大肠埃希菌接合频率有重要影响。 展开更多
关键词 产超广谱Β-内酰胺酶 大肠埃希菌 接合 转移 温度 pH
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Turbine blade temperature calculation and life estimation-a sensitivity analysis 被引量:10
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作者 Majid Rezazadeh Reyhani Mohammad Alizadeh +1 位作者 Alireza Fathi Hiwa Khaledid 《Propulsion and Power Research》 SCIE 2013年第2期148-161,共14页
The overall operating cost of the modern gas turbines is greatly influenced by thedurability of hot section components operating at high temperatures.In turbine operatingconditions,some defects may occur which can dec... The overall operating cost of the modern gas turbines is greatly influenced by thedurability of hot section components operating at high temperatures.In turbine operatingconditions,some defects may occur which can decrease hot section life.In the present paper,methods used for calculating blade temperature and life are demonstrated and validated.Usingthese methods,a set of sensitivity analyses on the parameters affecting temperature and life ofa high pressure,high temperature turbine first stage blade is carried out.Investigateduncertainties are:(1)blade coating thickness,(2)coolant inlet pressure and temperature(asa result of secondary air system),and(3)gas turbine load variation.Results show thatincreasing thermal bamier coating thickness by 3 times,leads to rise in the blade life by 9times.In addition,considering inlet cooling temperature and pressure,deviation in temperaturehas greater effect on blade life.One of the interesting points that can be realized from theresults is that 300 hours operation at 70%load can be equal to one hour operation atbase load. 展开更多
关键词 conjugate heat transfer Life assessment Sensitivity analysis Gas turbine BLADE
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