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大熊猫和小熊猫粪便DNA提取的简易方法
被引量：
41
1
作者
张保卫
魏辅文
+1 位作者
李明
吕晓平
《动物学报》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2004年第3期452-458,共7页
采集了大熊猫和小熊猫的新鲜粪便样品 ,使用 1 0 0 %乙醇保存。通过重复离心富集研究动物的肠道脱落细胞 ,并使用乙醇和双蒸水洗涤以除去抑制物。用 1 %的SDS快速裂解细胞 ,离心除去残渣后 ,向裂解液中加入蛋白酶进行消化。消化结束后...
采集了大熊猫和小熊猫的新鲜粪便样品 ,使用 1 0 0 %乙醇保存。通过重复离心富集研究动物的肠道脱落细胞 ,并使用乙醇和双蒸水洗涤以除去抑制物。用 1 %的SDS快速裂解细胞 ,离心除去残渣后 ,向裂解液中加入蛋白酶进行消化。消化结束后使用等体积的酚 /氯仿抽提 ,乙醇沉淀DNA。用双蒸水溶解粪便DNA后 ,使用PCR产物纯化试剂盒对粪便DNA进行纯化。电泳检测结果显示 ,从乙醇保存的大、小熊猫粪便样品中抽提到高质量的粪便DNA。对线粒体控制区、细胞色素b基因、 1 2SrRNA基因的PCR扩增反应以及测序结果也证实了样品保存方法和DNA抽提方法可靠而高效。此方法使用实验室内常用的分子生物学试剂 ,不仅克服了分子粪便学研究中常见的抑制物粪便DNA微量降解严重等障碍 ,与商业化的粪便抽提试剂盒 (QIAampDNAStoolMiniKit,Qiagen)相比还是一种经济的试验方法 (抽提反应成本为试剂盒的 1 / 5 )。文中还对粪便DNA内细菌基因组等背景DNA可能对分子粪便学试验结果的影响进行了探讨。在基于PCR技术的遗传学研究中 ,对于植食性动物而言 ,粪便内的背景DNA对目标动物DNA片断的扩增和序列测定未见影响 ;但对于肉食性动物 ,则必须考虑被捕食者基因组对试验可能产生的影响 。
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关键词
大熊猫
小熊猫
粪便
dna
PCR技术
抽提方法
下载PDF
职称材料
粪便不同保存方法对动物基因组DNA提取效果的影响
被引量：
14
2
作者
李娜
李迪强
+1 位作者
王秀磊
刘毅
《国际遗传学杂志》
CAS
2006年第5期341-345,367,共6页
目的为了探索一种既能使野外采集的粪便样品DNA保存完好,又方便带回实验室用于分子水平研究的粪便保存方法。方法本研究通过将普氏原羚的粪便在野外分别采取60℃干燥后低温保存,75％乙醇保存,100％乙醇保存,直接低温(保温箱中加生物冰袋...
目的为了探索一种既能使野外采集的粪便样品DNA保存完好,又方便带回实验室用于分子水平研究的粪便保存方法。方法本研究通过将普氏原羚的粪便在野外分别采取60℃干燥后低温保存,75％乙醇保存,100％乙醇保存,直接低温(保温箱中加生物冰袋)保存,在1个月内、5个月后、8个月后对粪便DNA进行抽提,并将提取的DNA作为模板进行PCR扩增,基因克隆测序。结果短期内均可得到高质量的DNA,DNA大小在23kb左右,电泳带型整齐,无降解,线粒体的扩增结果也完全一致,而用100％乙醇保存粪便DNA的时间更为长久。结论不同的保存方法提取动物基因组效果不一样。
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关键词
粪便保存方法
dna
提取
普氏原羚
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职称材料
题名
大熊猫和小熊猫粪便DNA提取的简易方法
被引量：
41
1
作者
张保卫
魏辅文
李明
吕晓平
机构
中国科学院动物研究所
出处
《动物学报》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2004年第3期452-458,共7页
基金
国家自然科学基金重点项目 (No .3 0 2 3 0 0 80 )
国家杰出青年基金项目 (No .3 0 12 5 0 0 6)
中国科学院知识创新工程项目 (KSCX2 1 0 3 )
文摘
采集了大熊猫和小熊猫的新鲜粪便样品 ,使用 1 0 0 %乙醇保存。通过重复离心富集研究动物的肠道脱落细胞 ,并使用乙醇和双蒸水洗涤以除去抑制物。用 1 %的SDS快速裂解细胞 ,离心除去残渣后 ,向裂解液中加入蛋白酶进行消化。消化结束后使用等体积的酚 /氯仿抽提 ,乙醇沉淀DNA。用双蒸水溶解粪便DNA后 ,使用PCR产物纯化试剂盒对粪便DNA进行纯化。电泳检测结果显示 ,从乙醇保存的大、小熊猫粪便样品中抽提到高质量的粪便DNA。对线粒体控制区、细胞色素b基因、 1 2SrRNA基因的PCR扩增反应以及测序结果也证实了样品保存方法和DNA抽提方法可靠而高效。此方法使用实验室内常用的分子生物学试剂 ,不仅克服了分子粪便学研究中常见的抑制物粪便DNA微量降解严重等障碍 ,与商业化的粪便抽提试剂盒 (QIAampDNAStoolMiniKit,Qiagen)相比还是一种经济的试验方法 (抽提反应成本为试剂盒的 1 / 5 )。文中还对粪便DNA内细菌基因组等背景DNA可能对分子粪便学试验结果的影响进行了探讨。在基于PCR技术的遗传学研究中 ,对于植食性动物而言 ,粪便内的背景DNA对目标动物DNA片断的扩增和序列测定未见影响 ;但对于肉食性动物 ,则必须考虑被捕食者基因组对试验可能产生的影响 。
关键词
大熊猫
小熊猫
粪便
dna
PCR技术
抽提方法
Keywords
Giant
panda,Ailuropoda
melanoleuca,
Lesser
panda,
Ailurus
fulgens,
Molecular
scatology,
faecal
dna
extraction
分类号
Q781 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
粪便不同保存方法对动物基因组DNA提取效果的影响
被引量：
14
2
作者
李娜
李迪强
王秀磊
刘毅
机构
湖南农业大学动物医学院
中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所
出处
《国际遗传学杂志》
CAS
2006年第5期341-345,367,共6页
基金
国家自然科学基金项目(No.30370217)
濒危动物保护技术研究项目(No.2001DIB10058)
文摘
目的为了探索一种既能使野外采集的粪便样品DNA保存完好,又方便带回实验室用于分子水平研究的粪便保存方法。方法本研究通过将普氏原羚的粪便在野外分别采取60℃干燥后低温保存,75％乙醇保存,100％乙醇保存,直接低温(保温箱中加生物冰袋)保存,在1个月内、5个月后、8个月后对粪便DNA进行抽提,并将提取的DNA作为模板进行PCR扩增,基因克隆测序。结果短期内均可得到高质量的DNA,DNA大小在23kb左右,电泳带型整齐,无降解,线粒体的扩增结果也完全一致,而用100％乙醇保存粪便DNA的时间更为长久。结论不同的保存方法提取动物基因组效果不一样。
关键词
粪便保存方法
dna
提取
普氏原羚
Keywords
Preservation
methods
of
faeces
faecal
dna
extraction
Przewalski＇s
gazelle
分类号
Q523-3 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大熊猫和小熊猫粪便DNA提取的简易方法
张保卫
魏辅文
李明
吕晓平
《动物学报》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2004
41
下载PDF
职称材料
2
粪便不同保存方法对动物基因组DNA提取效果的影响
李娜
李迪强
王秀磊
刘毅
《国际遗传学杂志》
CAS
2006
14
下载PDF
职称材料
已选择
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